CEA、HSP60、SEPT9联合检测在结直肠癌早期诊断、预后中的应用价值

谢巴图白音,李 伟,张勇刚

结直肠癌(CRC)在临床中较常见，老年男性多发，其致死率仅次于胃癌、食管癌，此病早期并无明显症状，在病情进展后就医多为中晚期，大多数患者会因此错过治疗进而影响预后[1]。为提高患者生存质量延长生存期限，提高CRC早期诊断率十分重要。癌胚抗原(CEA)在CRC诊断中具有一定的应用价值，但在部分良性疾病中也会升高,限制了其在CRC早期诊断中的应用[2]。热休克蛋白60(HSP60)在CRC病变早期就可呈现为高表达，对CRC早期诊断有重要的参考价值[3]。有研究表明，SEPT9基因甲基化可参与CRC细胞的浸润及转移[4]。基于此，本研究通过分析CEA、HSP60、SEPT9在CRC患者中表达情况，了解三者联合检测对CRC早期诊断、预后的评估价值。

1 资料与方法

1.1临床资料 将2013年12月—2018年12月在本院行手术治疗的CRC 81例作为CRC组。纳入标准：经术后病理检查证实为CRC者；临床资料完整；符合《结直肠癌诊疗规范》中相关诊断标准[5]。排除标准：合并其他恶性肿瘤者；存在心、肝、肾等器官严重疾病者；存在免疫系统疾病者；入院前接受相关治疗者；合并急慢性感染、创伤者。CRC组中男59例，女22例；年龄45～78(58.87±4.33)岁；TNM分期：Ⅰ～Ⅱ期33例，Ⅲ～Ⅳ期48例。另选取本院同期行健康体检人群78例作为对照组，男51例，女27例；年龄44～78(57.10±4.95)岁。2组性别、年龄比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法

1.2.1CEA、HSP60、SEPT9检测方法：CRC组入院后次日清晨在空腹状态下抽取静脉血5 ml，对照组则在体检当日清晨抽取静脉血5 ml，离心半径10 cm， 3000 r/min离心10 min，取上清液，待检。应用电化学发光法检测CEA。酶联免疫吸附试验检测HSP60。SEPT9检测：取冷冻血清置室温30 min，按照检测试剂盒(Plasma Quick Kit试剂)说明书操作提取血清游离DNA，随后进行PCR检测，实验步骤根据相关说明书进行，用ABI 7500 Fast PCR仪自带软件(pplied Bio Systems公司)进行结果判读；质控样品内参照β-actin的Ct值≤32.1以保证样本中DNA足量，SEPT9 Ct值<45.0为阳性结果；3次平行的PCR中有2次及以上阳性则判定为阳性，反之为阴性，其他结果无效。

1.2.2随访：对CRC患者随访3年，时间截至2021年12月31日，观察患者预后，发生复发、死亡则为预后不良，反之为预后良好。

1.3观察指标 对比不同人群中CEA、HSP60、SEPT9表达情况；对比不同分期及预后CRC患者CEA、HSP60、SEPT9表达情况；分析CEA、HSP60、SEPT9对CRC早期诊断价值。

2 结果

2.1不同人群中CEA、HSP60、SEPT9表达情况 CRC组CEA、HSP60水平及SEPT9阳性率均高于对照组(P<0.01)。见表1。

表1 不同人群CEA、HSP60、SEPT9表达情况

2.2不同分期CRC患者CEA、HSP60、SEPT9表达情况 Ⅲ～Ⅳ期CEA、HSP60水平及SEPT9阳性率均高于Ⅰ～Ⅱ期(P<0.01)。见表2。

表2 不同分期CRC患者CEA、HSP60、SEPT9表达情况

2.3不同预后患者CEA、HSP60、SEPT9表达情况 随访3年，81例均未失访，其中预后良好52例，预后不良29例。预后不良组CEA、HSP60水平及SEPT9阳性率均高于预后良好组(P<0.01)。见表3。

表3 不同预后CRC患者CEA、HSP60、SEPT9表达情况

2.4CEA、HSP60、SEPT9对CRC早期诊断价值 依据ROC曲线可知，三者联合检测对CRC早期诊断敏感度和特异度分别为80.20%、74.40%；AUC为0.765(95%CI：0.669，0.833)，明显高于三者单独检测。见表4。

表4 CEA、HSP60、SEPT9对CRC早期诊断价值

3 讨论

CEA广泛应用于消化道肿瘤的诊断、监测及预后评估[6-8]。CEA在胚胎时期通过肝胰、肠道合成，含量极少，在以往研究中发现CEA在消化道及内胚层恶性肿瘤组织中阳性率高。本研究结果显示，CRC组中CEA表达水平升高，且分期越高、预后不良者CEA水平更高，提示CEA可为CRC早期诊断及预后评估提供一定参考信息[9]。而肿瘤标志物的缺点在于特异度较差，因此临床中建议多种肿瘤标志物联合检测，进而为临床早期诊断提供更全面参考信息[10-11]。

HSP60属于高度保守的蛋白质家族，是具有多种功能的大分子物质，其可参与蛋白质的折叠、转移，同时在细胞增殖、凋亡、信号传导中也有一定的作用[12]。有研究表明，在正常细胞中HSP60几乎不释放，在宫颈癌、前列腺癌等肿瘤中其水平明显升高[13]。本研究也表明，CRC患者中HSP60表达明显升高，且随着分期增加其表达水平也越高，与以往研究结果相符[14]。提示HSP60可能与CRC的发生与发展关系密切。本研究还显示，预后不良患者中HSP60表达也高于预后良好者，提示HSP60可能为CRC患者预后评估提供参考。CRC患者中SEPT9基因甲基化可导致基因在复制、转录、翻译过程中出现一定的变化，对SEPT9蛋白复合物的构成造成影响，进而癌变[15]。有研究表明，SEPT9在子细胞胞质的最终分离中有重要的作用，其基因异常可影响细胞分裂[16]。以往研究发现，检测外周血SEPT9基因甲基化对CRC的诊断准确性高[17]。本研究发现，CRC患者SEPT9阳性率高于对照组，且在Ⅲ～Ⅳ期与预后不良CRC患者中阳性率明显升高，与以往研究结果相符[18-19]，提示随着CRC病程进展，肿瘤细胞坏死所释放的甲基化SEPT9基因也被释放入外周血中，因此SEPT9检出率明显升高。本研究中，CEA、HSP60、SEPT9联合检测可有效提高对CRC早期诊断的敏感度与特异度，提示联合检测可有效提高对CRC诊断效能。

综上所述，相比CEA、HSP60、SEPT9单独检测，CEA、HSP60、SEPT9联合检测可提高CRC早期诊断效能，同时对患者预后评估也有一定的参考价值。