2021年甘孜州牦牛包虫病免疫效果的再评估

计慧姝，朱 庆，四郎巴姆，张俊杰，陈和强，杨怀珍，泽仁拥忠

（1.四川省甘孜藏族自治州动物疫病预防控制中心，四川 康定 626000；2.四川省得荣县太阳谷镇综合服务站，四川 得荣 627950）

本研究对2017 年以来甘孜州开展牦牛包虫病防治的效果进行再次评估与分析，为今后制定防控措施提供参考。

1 材料与方法

1.1 试验动物 选择四川甘孜州三个县共1 244头健康成年牦牛作为疫苗免疫及血清采集的对象。其中，德格县509 头，色达县532 头，道孚县203头。

1.2 试剂及疫苗 牛棘球蚴（Eg95）ELISA 抗体检测试剂盒（批号：20210804），由重庆澳龙生物制品有限公司提供；羊棘球蚴（包虫）病基因工程亚单位疫苗Eg95（批号：2021002-2），由甘孜州动物疫病预防控制中心提供。

1.3 疫苗免疫注射 用羊棘球蚴（包虫）病基因亚工程亚单位疫苗免疫牦牛时，按照每只羊剂量的5倍量进行注射。免疫程序为第一针疫苗注射后28 d再次注射同等剂量，加强免疫。颈部皮下注射5头份，其中含Eg95蛋白250 μg。

1.4 免疫抗体检测 所有牦牛在首免后间隔28 d 二免，二免后15 d 统一采血并在现场用离心机及时分离血清，使用冷藏箱存储，并运送至县上，冰箱冷冻存储，次日由专人专车运送至甘孜州动物疫病预防控制中心。应用牛包虫病ELISA抗体检测试剂盒按说明书检测Eg95 特异性免疫抗体，统计全部样品免疫抗体总数及阳性数，计算群体抗体阳性率。

1.5 免疫安全性观察 仔细观察并记录试验牦牛在免疫后有无免疫应激情况。

2 结果

2.1 三个县牦牛免疫抗体的比较 由甘孜州动物疫病预防控制中心实验室人员和重庆澳龙生物制品有限公司实验室人员同时对试验牦牛血清进行检测。两组实验室人员均按照规范操作，试验结果均成立、无误，检测结果见表1，两者无显著差异（P＞0.05）。从表1可见，德格县的阳性率均高于其他两个县。

表1 三个县的检测结果比较

2.2 与2017 年甘孜州同种疫苗免疫效果的比较 就28 d阳性率而言，2021年高于2017年。

表2 2017年与2021年包虫病疫苗免疫效果比较

2.3 免疫应激情况 接种疫苗后，只有极少数牦牛出现精神沉郁，数日后即消失；注射部位出现局部肿胀，面积局限，数日后即消失。

3 讨论

免疫操作过程中，实验人员、设备、环境等因素对试验结果的影响非常小，只要是经过相关实验操作训练的人员均可完成，对总体结果的影响可以忽略不计。但是甘孜州地处偏远，实验条件非常有限，全部县级单位均没有独立、可正常运行的实验室，县级单位没有专职的实验室操作人员，设备缺失严重等，这些都是甘孜州以后面临的实际问题。有研究者等［1-2］用基因工程方法克隆并表达了羊源六钩蚴Eg95抗原基因，用其表达产物制成的疫苗免疫羊，其保护率达96%～100%。重组Eg95蛋白可诱导中间宿主（羊）产生较强的保护力，是最具发展前途的棘球蚴病候选疫苗，受到国内外学者的广泛关注［3］。

4 结论

本次试验使用羊棘球蚴（包虫）病基因工程亚单位疫苗，按照每只羊剂量的5倍量进行免疫，对比2017年免疫试验结果，评估得出包虫病基因工程亚单位疫苗Eg95的免疫效果相对稳定，免疫效果好，值得推广。■