董国兴,阳爱国,陈 烺,郝力力,袁东波*
(1.四川省南充市动物疫病预防控制中心,四川 南充 637000;2.四川省动物疫病预防控制中心,四川 成都 610041;3.西南民族大学畜牧兽医学院,四川 成都 610041)
棘球蚴病俗称包虫病,由棘球绦虫幼虫所引起的一类人畜共患寄生虫病,属于我国二类动物疫病。本病主要以犬、狐及狼为传染源和终末宿主,人、牛羊等家畜以及鼠等啮齿类动物为中间宿主[1]。包虫病对我国畜牧业造成重大经济损失,并严重危害人的健康,是我国西部牧区因病返贫的主要因素之一[2]。本试验通过对犬粪样品进行检测,对川西地区阿坝州、甘孜州、凉山州以及雅安市部分包虫病流行地区的感染情况进行分析,给四川省包虫病防控提供数据参考。
1.1 样本采集和处理 共采集犬粪样本3 200份。采集地点包括阿坝藏族羌族自治州的马尔康市、阿坝县、松潘县、壤塘县、理县、九寨沟县,甘孜藏族自治州的石渠县、雅江县、乡城县、德格县、理塘县、甘孜县,凉山彝族自治州的木里县、越西县,雅安市的宝兴县和天全县。每个市(县)各200份。
取犬粪样1 g,放入盛有1 mL 样品稀释液(试剂盒)的1.5 mL离心管中,充分振荡混匀粪样,在3 000 r∕min条件下离心10 min,取上清液备用。
1.2 仪器设备和试剂
1.2.1 仪器设备 离心机;最终测定仪器为莱恩德LD-96A酶标仪。
1.2.2 试剂 棘球绦虫粪抗原夹心ELISA 检测试剂盒。
1.3 检测方法和结果判定
1.3.1 检测方法(1)按照棘球绦虫粪抗原夹心ELISA 检测试剂盒说明书进行样本处理,记录样本顺序,取出包被板。
(2)按顺序加入已处理样品100 μL。阳性对照、阴性对照各1孔,临界对照3孔。于37 ℃放置60 min。
(3)洗板机洗板6次,洗板结束将微孔板倒置在吸水纸上拍干。
(4)每孔加酶标记物50 μL,于37 ℃放置30 min。洗板。
(5)每孔加显色液A、B 各50 μL,振荡混匀,置37 ℃避光30 min。
(6)每孔加入终止液50 μL,混匀后用酶标仪读数,450 nm波长测定OD值。
1.3.2 结果判定 根据试剂盒说明书判定结果,阳性:样品OD 值比临界对照OD 值平均值≥1.0;阴性:样品OD 值比临界对照OD 值平均值<1.0。
2.1 各县阳性率情况 阿坝州阿坝县阳性率为1.0%;甘孜州德格县阳性率为5.5%,乡城县阳性率为4.5%;凉山州木里县阳性率为5.0%;雅安市天全县阳性率为0.5%,其余市(县)均未检测出阳性样本。具体结果如表1所示。
表1 各县阳性率情况
2.2 分析 本次检测阿坝州涉及1个市、5个县,共采集犬粪样品1 200份,总阳性率为0.2%;甘孜州涉及6 个县,共采集犬粪样品1 200 份,总阳性率为1.7%;凉山州涉及2 个县,共采集犬粪样品400 份,总阳性率为2.5%;雅安市涉及2 个县,共采集犬粪样品400份,总阳性率为0.3%。2021年四川省包虫病部分流行地区的总阳性率为1.0%,如表2所示。
表2 各地阳性率情况
本次调查结果与2012年及2018年四川省犬细粒棘球绦虫的平均阳性率相比(图1)[3],其感染率大幅度降低,如阿坝州的马尔康市、甘孜州的石渠县、凉山州的越西县以及雅安市的天全县均未检测出阳性样本。
图1 四川省近年犬细粒棘球绦虫感染情况对比
本次共检测犬粪样本共3 200 份,阳性率约为1.0%。与四川省2012年及2018年流调的平均阳性率32.3%、8.1%相比,2021 年阳性率明显降低。其中,阿坝州的马尔康市、松潘县、壤塘县、理县、九寨沟县,甘孜州的石渠县、雅江县、理塘县、甘孜县,凉山州的越西县以及雅安市的宝兴县感染率大幅度降低。分析原因如下:(1)各地建立了相应的犬只管理系统,对各家各户的犬进行登记,且大力提倡家犬拴养;(2)限制了牧区居民养殖犬的数量,及时对流浪犬扑杀;(3)本着“犬犬投药,月月驱虫”的防控原则,定期用吡喹酮对家犬进行药物驱虫;(4)对羊群进行免疫接种,机体具有了一定的保护力[4]。(5)集中屠宰牛羊,及时对动物脏器进行无害化处理,很大程度上避免了犬误食患病动物脏器,从而降低感染本病的风险。作为包虫病重度流行的甘孜州石渠县,在本次调查中未检测出阳性样本,但是凉山州木里县作为包虫病轻度流行区域,本次检测阳性率为5.0%,提示当地应引起重视。
此外,在包虫病防控工作中依旧存在几点问题:(1)驱虫工作存在不足。使用药物吡喹酮对家犬进行驱虫时,由于药物适口性差,增加了药物驱虫的难度,犬在不食或摄入药量不足情况下都会直接影响驱虫效果。经药物驱虫后,由于当地牧民居住分散,粪便无法做到集中定点无害化处理,粪便中的虫卵仍存在感染隐患。(2)屠宰工作存在不足。部分地区无法做到集中屠宰,存在牧民自行屠宰的现象,屠宰后的动物脏器也未能及时集中销毁。因此,当地政府相关部门应当加强宣传,让广大居民了解包虫病的生活史、传播途径等相关知识,同时做好犬的驱虫工作,避免粪便中的虫卵污染环境;加强屠宰检疫工作和培训工作,做到集中屠宰和集中处理动物脏器,并对屠宰场进行动物疫病防控知识及技能的培训。
四川省部分包虫病流行地区的犬不仅存在细粒棘球绦虫感染,还存在多房棘球绦虫以及混合感染[5]。然而,本次检测所用试剂盒只能检测到细粒棘球绦虫,无法检测到多房棘球绦虫。因此,后期可采用荧光PCR方法对犬粪样本进行细粒棘球绦虫和多房棘球绦虫检测,从而提供更为完整的数据参考。■