炒赤芍质量标准研究

占丽琴 方 磊 罗 艳 孙 辉 丁 野*

1.湖南省药品检验研究院(湖南药用辅料检验检测中心)，湖南 长沙 410001；2.湖南省药品质量评价工程技术研究中心，湖南 长沙 410001

赤芍为毛茛科植物芍药PaeonialactifloraPall.或川赤芍PaeoniaveitchiiLynch的干燥根，味苦、微寒；有清热凉血、散瘀止痛的功效[1]，临床常用的赤芍品规主要有生赤芍、炒赤芍和酒赤芍等。目前报道多为赤芍的化学成分及药理研究，其炮制品炒赤芍的相关研究较少[2-3]。本试验进行薄层鉴别水分、总灰分、浸出物、含量测定研究，为炒赤芍的质量标准建立及质量控制提供依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器 岛津LC20-AT 高效液相色谱仪(检测器DAD)、色谱柱 Welch LP C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)、色谱工作站 Empower、Lecia DM2500。

1.2 材料 芍药苷对照品(批号：110736-201842，纯度：97.4%)赤芍对照药材(批号：121093-201804)均购自中国食品药品检定研究院。

实验用样品共15批次(批号：190501、190523、19100722-1、19100722-2、19100722-3、Y20191001、Y20191002、Y20191003、2019100042、0191005、201910006、2019050081、2019102125、2019102126、2019102127)，来自不同生产企业及使用单位，产地为安徽及内蒙古，经湖南省药品检验研究院中药所罗艳副主任中药师鉴定为炒赤芍。部分样品如图1所示。

图1 炒赤芍部分样品图

2 方法与结果

2.1 性状 为类圆形厚片，外表皮棕褐色。切面微黄色，偶有焦斑，皮部窄，木部放射状纹理明显，有的有裂隙，质硬而脆，气微香，味微苦、酸涩。

2.2 薄层鉴别 取本品粉末0.5 g，加乙醇 10 mL，振摇 5 min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2 mL使其溶解，作为供试品溶液。另取赤芍对照药材0.5 g，同法制成对照药材溶液。再取芍药苷对照品，加乙醇制成每1 mL含2 mg溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2015年版四部通则0502)试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液各10 μL，对照品溶液4 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40∶5∶10∶0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同的蓝紫色斑点。结果如图2所示。

1-15：样品 10 μL;S1:芍药苷对照品 4 μL；S2：赤芍对照药材 10 μL 图2 炒赤芍薄层色谱图

2.3 水分、总灰分、水溶性浸出物 均按照《中国药典》2015年版相关规定测定。结果见表1。

表1 炒赤芍水分、总灰分、浸出物测定表

2.4 含量测定

2.4.1 溶液的制备

2.4.1.1 对照品溶液 精密称取芍药苷对照品10.24 mg，精密称定，置50 mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品储备液(199.4752 μg/mL)。精密吸取对照品储备液适量，加甲醇稀释成浓度99.7 μg/mL、48.7 μg/mL的对照品溶液。

2.4.1.2 供试品溶液 取本品粗粉约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，称定重量，浸泡4 h，超声处理(300 W，30 kHz)20 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，取续滤液，即得。

2.4.2 色谱条件 色谱柱：Welch LP C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：甲醇-0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液(30∶70)；流速1.0 mL/min；检测波长为230 nm；柱温30 ℃。理论板数按芍药苷峰计，不低于3000。如图3、图4所示。

图3 芍药苷对照品图谱

图4 炒赤芍样品图谱

2.4.3 线性关系考察 精密吸取浓度为1.0508、0.4203、0.1051、0.0420、0.0841 mg/mL的对照品溶液10 μL，注入液相色谱仪，测定，以峰面积积分值为纵坐标，进样量为(ng)为横坐标，绘制标准曲线。其回归方程为：y=1202x+22554，r=1。结果表明：芍药苷对照品在168.1～10507.5 ng范围内线性关系良好。结果见表2、如图5所示。

图5 线性关系拟合图

表2 线性关系试验结果表

2.4.4 精密度试验 取同一炒赤芍供试品溶液(批号：2019102125)，连续进样6次，每次 10 μL，记录色谱峰面积，计算RSD(n=6)为0.6%，表明仪器精密度良好。

2.4.5 稳定性试验 取同一炒赤芍供试品溶液(批号：2019102125)，分别于配制后的0、4、8、12、24 h，精密吸取 10 μL，注入液相色谱仪，测定，记录色谱峰面积，计算RSD(n=6)为0.4%。

2.4.6 重复性试验 取同一炒赤芍供试品溶液(批号：2019102125)，依法制备6份供试品溶液，测定并计算，结果分别为0.81%、0.83%、0.82%、0.81%、0.82%，RSD为0.9%。

2.4.7 回收率试验 取同一炒赤芍供试品溶液(批号：2019102125)(含芍药苷2.0 mg)约 0.25 g(6份)，精密称定，置锥形瓶中，精密加入浓度为0.0997 mg/mL的芍药苷对照品适量(见表3)，依法制备供试品溶液，测定并计算，结果平均加样回收率为100.5%。

表3 加样回收率试验结果表

2.4.8 样品含量测定结果 对收集的15批炒赤芍进行了含量测定。结果见表4。

表4 炒赤芍中芍药苷含量测定结果

3 讨论

3.1 薄层鉴别展开剂的考察 实验中的薄层色谱鉴别增加赤芍对照药材做对照，用二氯甲烷替代传统的三氯甲烷做展开剂，取得较好薄层色谱效果，保证方法专属性亦兼顾了环保。

3.2 流动相的考察 含量测定实验中对流动相比例进行考察，当甲醇-0.05 moL/L磷酸二氢钾溶液(35∶65)时供试品的芍药苷峰存在干扰。当流动相甲醇-0.05 moL/L磷酸二氢钾溶液比例改为30∶70时，测定芍药苷峰分离效果好。

3.3 含量测定结果的讨论 该研究中15批次炒赤芍的芍药苷含量平均值为2.4%，而含量测定结果显示(批号：2019102125、2019102126、2019102127)的芍药苷含量均小于1.0%，结合调研及性状，样品颜色均为棕黄色，考虑其炒制过程中炮制稍过度，影响了芍药苷的含量。

本文对15批炒赤芍质量进行了包括性状、薄层色谱鉴别、水分、总灰分、浸出物和含量测定等项目的考察，结果显示方法可行、操作性强，可以作为炒赤芍的质量控制标准。