肺癌组织中肿瘤转移相关基因1和血管内皮生长因子C表达与肿瘤分期和预后的关系

赵丽霞，任成波，翟明慧，鲍 昕，刘 博，赵峻峰

(河北北方学院附属第一医院，河北 张家口 075000)

肺癌起源于支气管黏膜及腺体[1]，早期表现不明显，临床诊断多以中晚期为主，生存率较低[2]。有学者认为，肿瘤发展的生理过程与其外周血管的生成有着极大的联系，抑制肿瘤血管的生长有利于控制肿瘤的生理活动，以延缓患者疾病发展[3]。血管生长因子C(vascular endothelial growth factor-C，VEGF-C)在新生淋巴管的形成中具有重要推动作用，而淋巴转移是肿瘤患者恶化的标志之一[4]。肿瘤转移的生理过程有多种基因参与，近年来发现肿瘤转移相关基因1(tumor metastasis-associated gene 1，MTA1)与肿瘤的发展有关[5]，但与肺癌关系尚不明确。本研究检测非小细胞肺癌(non-small cell carcinoma, NSCLC)患者癌组织/癌旁组织VEGF-C、MTA1表达水平，分析与NSCLC患者肿瘤分期及预后的关系，为临床诊治提供新方向。

1 资料与方法

1.1 一般资料2017年8月至2020年11月我院108例NSCLC患者癌组织及癌旁组织标本，纳入标准：临床已确诊为NSCLC；我院病理科留存标本。排除标准：病理及临床资料不全者；存在多种肿瘤者；患有全身感染性或免疫性障碍者。男81例，女27例，年龄(65.97±7.86)岁。

1.2 方法

1.2.1资料收集 通过查阅病历整理患者临床资料，包括性别、年龄、病理类型、肿瘤分期、分化、淋巴结转移及生存随访资料等。

1.2.2病理组织处理 手术中采集的癌组织样本及距离癌组织2 cm的癌旁组织，依次经过石蜡包埋、组织切片(5 μm)，常规脱蜡处理(二甲苯溶液，5 min)后在常温下脱苯和水化，苏木素染色2 min，采用1%盐酸酒精浸泡(1 min)，清洗后使用伊红染色处理(3～5 min)，清洗后再次脱水，待染色成功后行盖玻片封层固定，光镜下观察。

1.2.3VEGF-C与MTA1表达水平检测 VEGF-C与MTA1多克隆抗体均购自艾美捷科技有限公司。取制备的石蜡切片经抗原修复后滴入一抗，4 ℃条件过夜培育，清洗后慢滴二抗，37 ℃条件培育30 min，二次复染脱水后行盖玻片封层固定，在光镜下观察。阴性对照一抗试剂采用磷酸盐缓冲液。

1.3 结果判定VEGF-C、MTA1表达参照Axiotis病理评分标准[6]，以染色强度和对应的阳性细胞数量进行评估。染色强度(无染色～黄褐色)计为0～3分。阳性率=阳性表达细胞数/视野总细胞数×100%，0分为无表达；1分为<25%；2分为25%～50%；3分为>50%。评估标准为染色强度评分与阳性率评分的乘积，0分为阴性，反之均为阳性。最终结果由我院2名资深检验技师同时进行判读，在有歧义时邀请另一名资深技师参与结果的判断。

1.4 统计学方法采用SPSS 21.0软件分析数据。计数资料比较采用χ2检验；相关性分析采用Pearson相关分析；预后生存分析采用Kaplan-Meier分析法，行Log-rankχ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 VEGF-C与MTA1阳性表达情况比较NSCLC患者癌组织中VEGF-C及MTA1阳性表达率均高于癌旁组织(P<0.05)。见表1。

表1 VEGF-C与MTA1阳性表达情况 [n(%)]

2.2 不同临床特征NSCLC患者癌组织中VEGF-C与MTA1阳性表达情况比较MTA1与VEGF-C在肿瘤III～IV期、低分化、有淋巴结转移的患者中阳性表达率较高(P<0.05)。见表2。

表2 不同临床特征NSCLC癌组织中VEGF-C与MTA1蛋白阳性表达情况 [n(%)]

2.3 NSCLC患者癌组织中VEGF-C与MTA1表达相关性癌组织VEGF-C表达量为(1.14±0.13)，MTA1表达量为(0.67±0.12)，二者呈正相关(r=0.472，P<0.05)。

2.4 不同VEGF-C与MTA1表达水平患者生存分析108例NSCLC患者按VEGF-C及MTA1表达情况分为阳性组和阴性组。VEGF-C阳性组1年总生存率为46.88%，低于阴性组的68.18%(HR=1.895，95%CI：1.049～3.423，P<0.05)，无进展生存率为35.94%，低于阴性组的56.82%(HR=1.834，95%CI：1.076～3.127，P<0.05)；MTA1阳性组1年总生存率为48.21%，低于阴性组的62.00%(HR=1.830，95%CI：1.013～3.307，P<0.05)，无进展生存率为32.14%，低于阴性组的52.00%(HR=1.971，95%CI：1.161～3.346，P<0.05)。见图1～4。

图1 VEGF-C表达相关生存曲线 图2 MTA1表达相关生存曲线

图3 VEGF-C表达相关无进展生存曲线 图4 MTA1表达相关无进展生存曲线

3 讨论

肺癌早期无明显特征，因而临床诊疗多见中晚期，早期确诊率较低，而肺癌与其他肿瘤治疗原则一致，早期干预是改善其预后的最佳手段。中晚期患者因其身体机能的影响不能适应根治手术，多以维持性放化疗为主，预后较差。肿瘤发展与其细胞转移、侵袭有关[7]。如何控制肿瘤的转移和侵袭，以改善患者预后是临床常考虑的重点课题。临床常以患者的肿瘤分期进行治疗，但传统的组织学病理检测在预测患者的发展和恶化中仍存在缺陷。随着分子生物学的发展，在肿瘤的发展生理过程中发现了一些具有标志性的蛋白因子，如癌胚抗原、纤维蛋白原等，对癌组织的检测具有较高的敏感性，对预判肿瘤的恶性发展具有一定的价值，但其特异性较低，仍有误诊现象出现[8]。因而寻找其他具有高敏感度及特异度的标志物对NSCLC患者临床诊疗具有重要意义。

VEGF在肿瘤细胞生长、增殖和发展中具有重要的地位，VEGF-C是其家族一员，被称为淋巴管生长因子，有推动癌组织新生淋巴管的形成、促进癌细胞淋巴结转移的作用[9]。血管内皮生长因子受体(VEGFR)-2和VEGFR-3与VEGF-C同属一个家族，有着促进内皮细胞增生和迁移的作用，VEGF-C以细胞旁腺分泌的方式形成生成可激活VEGFR-2、VEGFR-3，为淋巴管内皮细胞的生长提供能量支持，新生淋巴管可为肿瘤生长提供营养，增强其生物性质，促进及其恶性发展，既往研究显示[10，11]，VEGF-C在肿瘤细胞中均匀分布，在多种肿瘤组织中呈高阳性表达，参与癌细胞淋巴结转移。本研究显示，VEGF-C在NSCLC肿瘤组织中呈阳性表达，说明VEGF-C可能参与NSCLC恶性发展。

MTA1是肿瘤转移相关的基因位点，在肿瘤细胞中呈阳性表达[12]。MTA1是Mi-2-核小体重构脱乙酰复合物的重要组成部分，既往研究显示[13]，MTA1对微小RNA-125a-3p(miR-125)具有调控作用。而miR-125a-3p与NSCLS的发展有着密切关系，在NSCLS中表达水平下调[14]，MTA1可能对miR-125表达有调控作用，对肿瘤细胞的生理过程产生影响。本研究显示，MTA1在NSCLC癌组织中均具有阳性表达，提示MTA1可能在NSCLS癌组织中具有特异性表达，其水平变化可用于NSCLC的诊断。

对其不同病理特征进行分析，发现MTA1与VEGF-C在肿瘤III～IV分期、低分化、有淋巴结转移的患者中阳性表达率较高，与顾磊等[15，16]研究部分相似，可能与肿瘤进展有关。研究显示，VEGF-C与MTA1阳性表达水平呈正相关，提示VEGF-C与MTA1在肿瘤细胞转移的生理过程中可能存在协同关系，MTA1可能对肿瘤细胞血管及淋巴结的形成有影响，刘建平等[17]研究提出MTA1可能通过黏附缺氧诱导因子影响VEGF-C分泌，但影响VEGF-C分泌的机制过于复杂，后期仍需行动物试验或体外细胞试验进一步探讨。研究显示，存在VEGF-C与MTA1阳性组NSCLC患者的预后较差，可能与肿瘤恶性发展有关，VEGF-C与MTA1对肿瘤的发展可能具有推动作用，杨昕等[18]研究指出，MTA1对NSCLC患者预后有不良影响。李璟波等[19]研究中也提到VEGF-C与肺癌患者的预后存在密切联系。结合本研究结论，提示临床可能可通过抑制VEGF-C与MTA1来延缓NSCLC患者的恶性发展，以改善患者预后，延长其生命周期。

综上所述，VEGF-C与MTA1在NSCLC癌组织中呈阳性表达，两者在肿瘤血管和淋巴结生成中可能存在协同作用，共同促进着肿瘤细胞的恶性发展，其阳性水平表达与患者预后有关。