急性冠脉综合征患者术后血清TP53、miR-222-3p与预后的关系

李耀征，白保强，孙亚勤，张海柱

急性冠脉综合征（ACS）是国际公认的急性 心血管疾病，死亡率高。经皮冠状动脉介入治疗（PCI）是高效治疗冠状动脉（冠脉）血管闭塞的手段，能快速改善心肌缺血缺氧状态，临床效果较好，但术后部分患者可发生主要不良心血管事件（MACE）[1]。早期预估患者预后情况，可尽早调整治疗方案，改善预后。急性冠脉综合征的病理基础主要与动脉粥样硬化不稳定斑块破裂有关，动脉粥样硬化主要由血管内皮损伤及血管内膜增厚引起。微小RNA（miRNA）在心血管疾病的发生和发展中扮演着重要角色[2]。近年来，越来越多的研究发现miRNA与急性冠脉综合征预后有关[3]。微小RNA-222-3p（miR-222-3p）是许多病理过程关键的调控因子。Han等[4]研究显示，miR-222-3p高表达可抑制血管内皮增殖，并促进血管平滑肌细胞增殖[5]。肿瘤蛋白P53（TP53）是与人类肿瘤相关性最高的抑癌基因。近年来Tan等通过体外实验发现小鼠胚胎干细胞体外分化为平滑肌细胞过程中，TP53表达增加。目前TP53和miR-222-3p与PCI术后急性冠脉综合征患者预后的关系鲜有文献报道。基于此，本研究探讨TP53和miR-222-3p对急性冠脉综合征患者PCI术后MACE预测价值，以期为临床早期预估患者PCI术后MACE情况提供帮助。

1 材料与方法

1.1 研究对象选取2018年1月至2020年1月于驻马店市中心医院行PCI的急性冠脉综合征患者96例为研究对象，其中男性56例，女性40例，年龄33～79岁，平均年龄为（55.94±11.67）岁。纳入标准：①符合急性冠脉综合征的诊断标准[6]；②均为首次接受PCI；③术后接受抗血小板药物治疗；④病例资料完整。排除标准：①合并非阻塞性冠脉疾病；②合并自身免疫性疾病；③合并严重肝肾功能障碍、恶性肿瘤；④合并感染性疾病；⑤合并心肌炎、心脏瓣膜病。本研究受试者知情同意，经本院伦理委员会批准同意。

1.2 临床资料收集收集所有患者高血压史、糖尿病史、吸烟史、他汀类药物服用史、糖化血红蛋白水平、肌钙蛋白Ⅰ（cTnI）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）及术前病变支数。

1.3 方法

1.3.1 样本采集采集患者PCI术后12 h空腹静脉血4～5 ml，离心（4000 r/min，5 min），取上清液装于无RNA酶的EP管中，冻存-80 ℃冰箱中待测。

1.3.2 PCR法检测血清中mR-222-3p的水平RNA提取试剂盒（美国GeneCopoeia公司）提取血清中总RNA，依据反转录试剂盒（Primescript RT Reagent Kit，日本TaKaRa公司）操作步骤将RNA反转录，得到cDNA。采用SYBR Premix Ex Taq Ⅱ荧光定量试剂盒[宝生物工程(大连)有限公司]，制备反应体系。采用CFX96实时荧光定量PCR仪（德国Bio-Rad公司）对miR-222-3p及内参U6进行扩增反应。miR-222-3p、U6引物由上海生工合成。反应条件：95 ℃，3 min；95 ℃，30 s；60 ℃，30 s； 72 ℃，30 s；38个循环。对miR-222-3p相对表达量用2-△△CT法计算。引物由上海生工合成（表1）。

表1 qRT-PCR引物序列

1.3.3 检测血清中TP53水平采用双抗夹心法测定血清TP53水平，按照试剂盒采用TP53定量检测试剂盒（北京百奥莱博科技有限公司）操作步骤进行测定。

1.4 随访对PCI术后ACS患者随访12个月，统计患者12个月内发生MACE情况，将患者分为MACE组（22例）和非MACE组（74例）。本研究中MACE定义为再次心肌梗死、严重心律失常、心力衰竭、支架内再狭窄、血运重建、脑卒中[7]。

1.5 统计学分析采用软件SPSS 25.0对数据进行分析，计数资料用（n，%）表示，采用χ2检验。计量资料符合正态分布，以平均值±标准差（±s）表示，两组间比较采用t检验；血清TP53、miR-222-3p水平预测急性冠脉综合征患者PCI术后MACE的价值采用受试者工作特征（ROC）曲线评价。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者一般资料比较MACE组和非MACE组性别、年龄、高血压、糖尿病、吸烟史、他汀服用史、病变支数、糖化血红蛋白差异无统计学意义（P＞0.05）；与非MACE组相比，MACE组cTnI、CK-MB较高（P＜0.05），表2。

表2 两组患者一般资料比较（n，%）

2.2 MACE组和非MACE组血清TP53、miR-222-3p水平与非MACE组相比，MACE组血清miR-222-3p水平、TP53水平较高（P＜0.05），表3。

表3 MACE组和非MACE组血清中TP53、miR-222-3p水平比较

2.3 血清TP53、miR-222-3p对急性冠脉综合征MACE的预测价值ROC曲线显示，血清中miR-222-3p水平预测ACS患者PCI术后MACE的曲线下面积（AUC）为0.869（95%CI：0.780～0.958），截断值为1.36，其敏感度、特异性分别为81.50%、86.50%；血清中TP53水平预测ACS患者PCI术后MACE的AUC为0.787（95%CI：0.674～0.900），截断值为0.93 U/ml，其敏感度、特异性分别为70.40%、91.90%；两者联合预测急性冠脉综合征患者PCI术后MACE预后的AUC为0.926（95%CI：0.866～0.986），其敏感度、特异性分别为92.60%、83.80%，图1。

图1 血清TP53、miR-222-3p诊断急性冠脉综合MACE的ROC曲线

2.4 急性冠脉综合征患者血清TP53、miR-222-3p水平与MACE关系按照miR-222-3p截断值将术后患者分为miR-222-3p高水平组（50例）和miR-222-3p低水平组（46例）。随访发现，miR-222-3p高水平组MACE发生率为36.00%；miR-222-3p低水平组MACE发生率为8.70%。miR-222-3p高水平组MACE发生率明显高于miR-222-3p低水平组，差异有统计学意义（P＜0.05）。按照TP53截断值将术后患者分为TP53高水平组（52例）和TP53低水平组（44例）。随访发现，TP53高水平组MACE发生率为32.69%；TP53低水平组MACE发生率为11.36%。TP53高水平组MACE发生率明显高于TP53低水平组，差异有统计学意义（P＜0.05）。

3 讨论

miRNA在组织和细胞中具有高度特异性，miRNA的特异性表示其具有作为疾病生物标记物的潜力，但miRNA的异常表达可能导致一些心血管疾病的发生[8]。血管平滑肌细胞在病理状态下可移入内膜中，血管内膜增厚，导致动脉硬化[9]。多项研究表明，miRNA可调节内皮功能障碍、血管内膜增厚等过程[10]。

miR-222-3p是miRNA家族中重要的一员。有研究报道miR-222-3p过表达可促进血管平滑肌细胞增殖和迁移，导致血管内膜增厚，抑制其表达可降低血管内膜厚度[11]。内皮祖细胞在修复血管内皮损伤方面起着至关重要的作用。Gao等[12]研究发现miR-222-3p过表达抑制内皮祖细胞迁移、侵袭和募集，且该过程是通过miR-222-3p靶向负调控诱导AMKP激活的ADIPOR1基因实现的。本研究发现MACE组血清miR-222-3p水平明显高于非MACE组，提示miR-222-3p可能参与ACS患者PCI术后MACE的发生。本研究进一步发现miR-222-3p高水平组MACE发生率明显高于miR-222-3p低水平组，猜测miR-222-3p高表达可能促进血管平滑肌细胞增殖和迁移，导致患者PCI术后血管内膜增厚，从而发生MACE。

TP53位于染色体17q13上，编码TP53蛋白质。TP53可诱导细胞生长停滞、细胞凋亡和细胞分化[13]。Tan等[5]研究发现使用类维生素A酸（RA）诱导平滑肌细胞分化过程中，TP53表达增加，进一步研究证实，TP53通过直接与心肌素启动子结合并调节心肌素表达参与平滑肌细胞分化。另有研究报道[14]，TP53在动脉粥样硬化组织中增加，并充当血管细胞凋亡的介体，TP53基因可通过抑制细胞凋亡诱发TP53功能障碍，并在动脉粥样硬化的发病机理中发挥作用。本研究发现MACE组血清TP53水平明显高于非MACE组，提示血清TP53可能对ACS患者PCI术后MACE发生有影响。本研究进一步发现TP53高水平组MACE发生率明显高于TP53低水平组，推测TP53可能通过影响PCI术后患者机体血管平滑肌细胞增殖而影响MACE发生。此外，TP53和miR-222-3p联合预测ACS患者PCI术后MACE预后的AUC为0.926，其敏感度、特异性分别为92.60%、83.80%，二者联合诊断价值高于二者单独的诊断价值，提示TP53和miR-222-3p联合在临床上预估ACS患者PCI术后MACE有较好的价值。

综上所述，急性冠脉综合征患者PCI术后MACE患者血清TP53、miR-222-3p呈高表达，二者联合检测对ACS患者PCI术后MACE评估有更好的预估价值，本研究为临床上开发预估ACS患者PCI术后MACE的生物学指标奠定理论基础，但TP53、miR-222-3p对MACE的具体作用机制在本研究中尚未探究，后续需进一步探索。