病毒性心肌炎患儿血清IL⁃35、miR⁃155和SAA的表达及临床意义

张小建 张军毅 冯嵩 李丹

病毒性心肌炎（Viral myocarditis，VMC）属于感染性心肌病，大多数患者在合理治疗后效果可观，但有的患者可因心脏扩大、病情迁延不愈进展成为心肌病，严重者可出现心源性休克，影响预后［1］。早期正确的诊断与治疗对患者预后有积极影响，寻找合适的诊断方法也成为了临床研究热点。白介素35（Interleukin 35，IL⁃35）为Treg 细胞所分泌的新型免疫抑制以及抗炎因子，通过抑制初始CD4+T 细胞分化为Th17 细胞，从而达到阻断炎症反应的作用［2］。血清淀粉样蛋白A（serum amyloid A，SAA）属于敏感的急性期反应蛋白，在正常情况下以痕量存在，机体出现炎症后可刺激SAA 表达明显上调［3］。MiRNA 为近几年新发现的非编码小RNA，具有多样化生物学活性，miR⁃155 则是其中的一员，可参与机体免疫应答调控［4］。本研究将通过检测IL⁃35、miR⁃155、SAA 在VMC 的表达水平，分析三者在VMC 诊疗中的使用价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2018年1月至2020年3月郑州大学第一附属医院收治的121 例VMC 患者，其中男67 例，女54 例，平均年龄为（6.24±1.11）岁，根据患者病情严重程度［5］不同分为轻度（患者具有胸闷、心悸等不适，但并未迅速发展出现威胁生命的血流动力学改变以及恶性心律失常）82 例，重度（患者起病急，病情进展迅速，出现泵衰竭和循环衰竭以及严重的心律失常）39 例。纳入标准：①临床资料完整；②符合《小儿病毒性心肌炎诊断标准》［6］中的诊断标准。排除标准：①存在先天性心脏病、风湿性心脏病等引起的心肌损伤；②存在代谢性疾病者；③入院前有接受抗病毒药物、免疫药物治疗者。另选取本院同期116 例健康体检儿童作为对照组，入选者均无心脏疾病、心肌损伤等影响本研究疾病，其中男63 例，女53 例，平均年龄为（6.11±1.24）岁，入选者在一般资料上比较差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。本研究经院医学伦理委员会批准通过，受试患儿监护人已签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 IL⁃35、miR⁃155、SAA 检测方法

患者在入院当天抽取静脉血液5 mL，对照组则在体检当日清晨抽取空腹静脉血液5 mL，使用3 000 r/min 离心机（离心半径10 cm）离心10 min获取上清液待检。使用双抗体夹心酶联免疫法检测IL⁃35，试剂盒由深圳晶美生物科技有限公司提供。使用PCR 检测miR⁃155，试剂盒为德国QIAGEN 公司所提供的miRNeasy Serum 试剂盒。使用全自动生化分析仪检测SAA，试剂由深圳晶美生物科技有限公司提供。

1.2.2 心肌损伤标志物检测

获取VMC 组静脉血液3 mL，离心后取血清待检。使用酶联免疫吸附法检测磷酸肌酸激酶同工酶（Phosphocreatine kinase isoenzyme，CK⁃MB），试剂由北京北方免疫试剂研究所提供，使用电化学发光法检测心肌肌钙蛋白I（Cardiac troponin I，cTnI），试剂盒由美国Spectral Diagnostics 公司所提供。

1.3 统计学方法

采用SPSS 20.0 软件进行统计分析，计量资料采用（）表示，行t检验；使用Pearson检验分析IL⁃35、miR⁃155、SAA 与心肌损伤标志物相关性，绘制受试者工作特征（ROC）曲线分析IL⁃35、miR⁃155、SAA 对病毒性心肌炎预测价值，并计算曲线下面积（AUC），以P＜0.05 为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 两组IL⁃35、miR⁃155、SAA 表达水平比较

VMC 组miR⁃155、SAA 水平均明显高于对照组，IL⁃35 低于对照组，差异均有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 两组IL⁃35、miR⁃155、SAA 表达水平比较（±s）Table 1 Comparison of IL⁃35，miR⁃155 and SAA expression levels between the 2 groups（±s）

表1 两组IL⁃35、miR⁃155、SAA 表达水平比较（±s）Table 1 Comparison of IL⁃35，miR⁃155 and SAA expression levels between the 2 groups（±s）

组别对照组VMC 组t 值P 值n 116 121 IL⁃35（ng/L）381.21±20.31 263.28±18.54 46.717＜0.001 miR⁃155 1.03±0.11 2.98±0.57 36.202＜0.001 SAA（mg/mL）10.32±3.24 18.81±3.15 20.543＜0.001

2.2 不同病情程度患者血清中IL⁃35、miR⁃155、SAA 心肌损伤标志物表达水平比较

重度组miR⁃155、SAA、CK⁃MB、cTnI 水平均明显高于轻度组，IL⁃35 低于轻度组，差异均有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2 不同病情程度患者血清中IL⁃35、miR⁃155、SAA 心肌损伤标志物表达水平比较（±s）Table 2 Comparison of the expression levels of serum IL⁃35，miR⁃155，and SAA myocardial injury markers in patients with different disease levels（±s）

表2 不同病情程度患者血清中IL⁃35、miR⁃155、SAA 心肌损伤标志物表达水平比较（±s）Table 2 Comparison of the expression levels of serum IL⁃35，miR⁃155，and SAA myocardial injury markers in patients with different disease levels（±s）

组别轻度组重度组t 值P 值n 82 39 IL⁃35（ng/L）312.24±22.61 160.34±18.51 38.678＜0.001 miR⁃155 2.21±0.19 4.62±0.84 24.785＜0.001 SAA（mg/mL）15.11±5.16 26.59±5.87 10.935＜0.001 CK⁃MB（u/L）41.32±10.31 75.26±10.37 16.892＜0.001 cTnI（μg/L）0.08±0.02 0.57±0.11 39.169＜0.001

2.3 IL⁃35、miR⁃155、SAA 与心肌损伤标志物相关性

miR⁃155 与CK⁃MB、cTnI 为正相关（r=0.621，0.416，P＜0.001）；SAA 与CK⁃MB、cTnI 均为正相关（r=0.594，0.685，P＜0.001），IL⁃35 与CK⁃MB、cTnI 为负相关（r=-0.0485，0.603，P＜0.001）。

2.4 IL⁃35、miR⁃155、SAA 对VMC 的预测价值

依据ROC 曲线可知，IL⁃35+miR⁃155+SAA 联合检测对VMC 预测敏感度和特异度分别为0.913、0.739，AUC 为0.869（95%CI：0.777～0.951），明显高于三者单独预测（P＜0.05）。见表3 及图1。

表3 IL⁃35、miR⁃155、SAA 对VMC 的预测价值Table 3 The predictive value of IL⁃35，miR⁃155，SAA on VMC

图1 IL⁃35、miR⁃155、SAA 对VMC 的预测ROC 曲线图Figure 1 The predicted ROC curve of IL⁃35，miR⁃155，SAA on VMC

3 讨论

以往研究发现，IL⁃35 对Th17 以及Th1 的分化、增殖均有抑制作用，可有效减少白细胞介素17 以及γ⁃干扰素的分泌，同时增加抗炎细胞的数量［7⁃8］。本研究发现，VMC 患者血清IL⁃35 水平明显低于对照组，且重度组患者IL⁃35 也明显低于轻度组，提示VMC 者机体中Treg 细胞数量不足或功能丧失，进而引起IL⁃35 表达降低，对心肌的保护作用也随之降低，造成病毒性心肌炎患者的免疫系统活化异常，自身免疫耐受丧失，促进患者病情进展［9⁃10］。IL⁃35 水平与患者cTnI、CK⁃MB 之间呈负相关也表明血清IL⁃35 与病毒性心肌炎的发生、发展关系密切。

研究发现，miR⁃155 在多种心血管疾病中表达存在异常［10］。相关动物实验通过建立心肌梗死模型发现，miR⁃155 表达增加能抑制成纤维细胞增殖，促进成纤维细胞炎症反应；在降低miR⁃155 后心肌梗死动物模型出现心脏破裂的情况明显降低［11］。也有学者通过建立VMC 大鼠模型，发现VMC大鼠血清中miR⁃155 表达明显上升，在miR⁃155 表达降低后大鼠心肌损伤、炎症反应均明显降低［12］。本研究结果与上述研究结果相符。目前VMC 患者血清中miR⁃155 水平上升机制尚未明确，但认为可能与微环境中某些物质激活并促进了炎细胞因子分泌有关［13］。另外，本研究还发现miR⁃155 的表达与CK⁃MB、cTnI 呈正相关，表明miR⁃155 的表达与患者心功能损伤的严重程度有关，其有可能成为评价心肌损伤严重程度的指标。国内学者亦报道VMC 患儿外周血中高表达miR⁃155 能够造成心肌细胞损伤及凋亡［14］。

SAA 在国内外研究中均被证实为炎症标志物，对预测未来心血管事件发生有独立的预测价值，与心血管疾病存在密切的联系［14］。VMC 发病机制尚未明确，但在患者病情发展中病毒感染导致的心肌损伤是十分明确的一个阶段，相关研究也证实在病毒感染时SAA 上升程度明显大于细菌感染，SAA 对病毒感染评估有一定的参考价值［15］。本研究结果说明SAA 可反映出患者心肌损伤程度，监测其水平变化情况对患者病情变化有一定的参考价值。绘制ROC 曲线可知，相比IL⁃35、miR⁃155、SAA 单独检测，三者联合预测VMC 发生敏感度、特异度均明显提升，提示三者联合检测在VMC 诊断中有一定的使用价值，有望成为预测VMC 病情评估的临床指标。

综上所述，IL⁃35、miR⁃155、SAA 水平异常与VMC 发生、发展可能存在联系，在临床中监测三者水平变化可为临床诊疗VMC 提供更全面参考信息。本研究不足在于无法明确IL⁃35、miR⁃155、SAA三者的变化是VMC 特有，后续将扩大样本量进行多疾病对照分析，进一步明确三指标与VMC 关系。