刺玫果籽油索氏法提取工艺优化及其体外抗氧化活性分析

于晓瑾，刘采艳，张萌，王硕，袁旭，韩华

摘要：目的：对刺玫籽油进行体外抗氧化活性评价，旨在为刺玫籽油的进一步研究及刺玫果的综合开发利用提供科学依据。方法：以刺玫果籽为原料，利用索氏提取法提取刺玫果籽油，并以刺玫果籽油的提取率为指标，在单因素分析的基础上，选取提取温度、粉碎目数、溶剂体积3个因素进行响应面优化试验。以维生素C为阳性对照，对所提取的刺玫果籽油进行体外抗氧化活性分析。结果：当溶剂体积333  mL、提取温度82 ℃、粉碎度60目时，刺玫果籽油的提取率为18.84%。此外，刺玫果籽油清除ABTS 自由基、DPPH自由基、超氧阴离子自由基的作用存在量效关系，且IC50值分别为29.73、34.58、40.54 μg/mL，而同浓度维生素C清除自由基的IC50值分别为26.51、49.62、26.37 μg/mL，此外，刺玫果籽油还具有一定的还原力。结论：利用响应面优化法优化提取工艺参数可提高刺玫籽油的提取率，刺玫籽油还具有较好的抗氧化活性，可作为一种潜在可用的天然抗氧化剂。

关键词：刺玫果;种子油;索氏提取法;中心组合响应面设计 ;抗氧化活性

刺玫果（Rosa davurica）是一种药食同源的野生浆果，主要分布于中国吉林、辽林、黑龙江省等地。刺玫籽蕴藏的油脂中包含各种维生素、类胡萝卜素[1] （β-胡萝卜素、番茄红素）、植物甾醇[1]、角鲨烯、多酚及多不饱和脂肪酸（52.52%亚油酸、23.50%亚麻酸、12.39%油酸、5.88%棕榈酸）[2]等营养物质[3-7]。同时，刺玫籽油也是一种极好的天然保湿油 [8-9]。此外，屈岩峰等[10]报道了往一级大豆油中添加0.2%的刺玫果籽油具有较好的抗氧化效果;高阳等[11]报道了不同溶剂的刺玫果种子萃取物具有一定的抗氧化活性。目前，提取刺玫籽油的方法主要有酶解法、超临界CO2萃取法、超声提取法，而利用响应面法优化索氏提取刺玫籽油及其体外抗氧化活性分析尚无相关文献报道。本试验以刺玫果籽为原材料，利用索氏提取法提取刺玫籽油，并采用Central Composite Design响应面优化法（CCD-RSM） 對工艺参数进行优化，再以维生素C为阳性对照，利用ABTS（ABTS+·）法，DPPH（DPPH·）法，超氧阴离子自由基（O-2·）清除法及还原Fe3+作用对刺玫籽油进行体外抗氧化活性评价，旨在为刺玫籽油的进一步研究及刺玫果的综合开发利用提供科学依据。

1材料与方法

1.1原料

刺玫果;1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH），上海金穗生物科技有限公司;2，2'氨基-二（3-乙基-苯并噻唑啉磺酸-6）铵盐（ABTS），合肥巴斯夫生物科技有限公司。

1.2主要仪器设备

TGL-16LG高速离心机，湖南星科科学仪器有限公司;0SB-2100旋转蒸发仪，上海爱朗仪器有限公司;Synergy MX酶标仪，美国BIOTEK公司。

1.3方法

1.3.1刺玫籽油的提取溶剂的选择准确称取刺玫籽粉末20.00 g，装入脱脂滤纸筒中，并以无水乙醇、乙酸乙酯、正己烷、石油醚为提取溶剂，利用索氏提取法在适宜的条件下进行刺玫籽油的提取，刺玫籽油提取率按式（1）计算。

y=m2m1×100% （1）

式（1）中，m1为刺玫籽粉末质量（g）;m2为刺玫果籽油质量（g）。

1.3.2单因素试验准确称取20.00 g刺玫籽粉末于脱脂滤纸筒中，利用索氏提取法提取刺玫果籽油，并以溶剂体积、提取温度、粉碎目数、提取时间5个因素进行单因素设计。设定溶剂体积分别为140 、200、260、320、360 mL;提取温度分别为70、75、80、85、90 ℃;粉碎目数分别为0、20、40、60、80目;提取时间分别为180、210、240、270、300、330 min，分析各个因素对刺玫籽油提取率的影响。

1.3.3CCD-RSM法优化刺玫籽油提取工艺参数在单因素试验的基础上，选溶剂体积（X1）、提取温度（X2）、粉碎目数（X3）作为变量，刺玫籽油提取率为响应值进行响应面优化实验。利用Design Expert10.0.3软件，进行Central Composite Design（CCD）实验方案，进行三因素三水平试验设计，并将所得结果进行相应的统计学分析，确定最优的工艺参数，试验因素及水平见表1。

1.3.4刺玫籽油体外抗氧化活性研究

（1）刺玫籽油清除ABTS+·活性测定：将ABTS溶液与过硫酸钾溶液等体积混合，置于黑暗条件下氧化12 h，然后加无水乙醇稀释反应液，并在734 nm波长下调节其吸光度值为0.7左右。其次，利用无水乙醇将刺玫果籽油配制成一序列质量浓度，并以维生素C溶液作为阳性对照，在96孔板中加入100 μL的ABTS工作液及30 μL的样品溶液，震荡混匀，避光反应5 min，于734 nm波长处测定溶液的吸光度值A，以式（2）计算刺玫籽油清除ABTS活性[12]。

ABTS+·清除率%=（A0-A样）A0×100%（2）

式（2）中，A样为30 μL样品溶液与100 μL ABTS溶液混合后的吸光度值;A0为30 μL乙醇溶液与100 μL ABTS溶液混合后的吸光度值。

（2）刺玫籽油清除DPPH·活性测定：将配置好的DPPH乙醇储备液，加无水乙醇溶液稀释，并在517 nm波长处调节吸光度值为0.7左右。与ABTS试验相似，在96孔板中加入100 μL的DPPH溶液及30 μL的样品溶液，震荡混匀，避光反应30 min后，于517 nm波长处测定溶液的吸光度值A，以式（3）计算刺玫籽油清除DPPH·活性[11]。

DPPH·清除率（%）=（A0-A样）A0×100%（3）

（3）刺玫籽油清除O-2·活性测定：参照文献[13]，并稍作修改，精密量取500 μL Tris-HCl（pH 8.2）溶液于12支试管中，置于37 ℃水浴锅内预热20 min。待预热结束后，于试管中分别加入不同浓度样品溶液，在其中的6支试管内加入40 μL邻苯三酚溶液（25 mmol/L），充分混匀后置于37 ℃水浴锅内反应5 min，加入8 mmol/L HCl终止反应。最终，移取 100 μL溶液置于325 nm波长处测光度值A，并利用式（3）计算刺玫籽油对O-2·的清除率。

O-2·清除率（%）=[A0-（A1-A2）]A0×100%（4）

式（4）中，A0为含有邻苯三酚的空白溶液的吸光度值;A1为含有样品溶液及邻苯三酚的吸光度值;A2为只含样品溶液的吸光度值。

（4）刺玫籽油还原力的测定：参照文献[14-15]。

1.3.5数据处理每组做3个平行样，结果以X±SD值表示，利用SPSS 23.0统计软件进行单因素方差分析及差异性分析，P<0.05表示差异性具有统计学意义，并利用GraphPad Prism 8.0.1 进行图的绘制。

2结果与讨论

2.1不同溶劑对刺玫籽油提取率的影响

选取石油醚、正己烷、乙酸乙酯、无水乙醇4种溶剂分别提取刺玫籽油。由图1可知，4种常用的提取溶剂对刺玫籽油的溶解性具有差异性，其中以石油醚为提取溶剂所获得的刺玫籽油量最佳，为11.23%;正己烷为10.96%;无水乙醇为5.74%;乙酸乙酯最低，为2.09%。其中，石油醚沸程长，回收时温度不易控制，而正己烷的沸程短、毒性低、且提取率与石油醚相差0.27%，故选取正己烷为刺玫籽油的提取溶剂。

2.1.1提取时间对刺玫籽油提取率的影响在水浴温度为80 ℃、粉碎度为60目、溶剂260 mL的条件下，分析180、210、240、270、300、330 min时对提取率的影响。由图2可知，当提取时间为180 min时提取率最低为8.96%，且伴随温度升高，刺玫籽油的提取率逐渐升高，240 min时刺玫籽油的提取率达到最高为12.88%;但超过240 min时刺玫籽油提取率略下降，且所得的油内有白色乳浊液。可能是由于加热时间过长导致溶剂的挥发及刺玫籽油中某些成分分解。此外，唐小媛等[16]研究表明，长时间的萃取会加剧油脂乳化，严重影响油的质量。因此综合考虑选取240 min为最终提取时间。

2.1.2粉碎度对刺玫籽油提取率的影响水浴温度为80 ℃、溶剂体积260 mL、提取时间为240 min时，分析不同粉碎度对刺玫籽油提取率的影响。由图3可知，不粉碎刺玫籽时，刺玫籽油提取率为4.52%，随着粉碎目数的增大，呈上升状态。这是由于随着比表面积的增大，刺玫籽与溶剂接触面积增大，促进了油的溶出;此外，由于破坏细胞结构也可使正己烷与细胞内的油脂充分接触[17]。当粉碎度达60目时，刺玫籽油提取率最高为13.56%，而80目时提取率为13.51%，油中存在大量杂质。这可能是长时间的研磨，导致油脂达到损失，而且刺玫籽粉末的粒径过小时，会导致粉末堆积密度增大，从而降低了溶剂的扩散速率，致使刺玫籽油提取率减少[18]。故选取60目为后续实验的粉碎度。

2.1.3溶剂体积对刺玫籽油提取率的影响当提取温度为82 ℃、粉碎度为60目、提取时间为240 min的条件时，分析溶剂体积分别为140、200、260、320、380 mL对油脂提取率的影响。由图4可知，当溶剂体积为140 mL时，刺玫籽油提取率最低为9.77%，200 mL时达到最高为13.03%，这是由于浓度差的存在，伴随溶剂量的增大，提取率亦增加。溶剂体积为260 mL时提取率为11.34%，这可能是由于溶剂中油脂浓度达到饱和状态，促使刺玫籽中油脂溶出的动力减少，从而导致刺玫果籽油的提取率降低。蒋新龙等[19]人的实验结果表明，棠梨籽中油脂降低时，导致有效浓度差减小，即使增加溶剂量，对棠梨籽油的提取率的影响也较小，还会造成溶剂的浪费。因此，选取溶剂体积为320 mL用于后续的实验。

2.1.4温度对刺玫籽油提取率的影响当粉碎度为60目、提取时间为240 min、溶剂体积为320 mL时，分析温度为70、75、80、85、90℃时对提取率的影响。由图5可知，当水浴温度为70 ℃时籽油提取率最低为2.00%，80 ℃时为13.11%，可能是由于随着温度的升高，加剧了刺玫籽油内分子热运动，促进了刺玫籽油的溶出及正己烷的渗透;当水浴温度为85 ℃时，刺玫籽油的提取率达到最高为13.77%;而温度为90 ℃时，籽油提取率为12.50%，油颜色较深，伴随大量杂质，可能是由于温度过高导致短期内正己烷的大量蒸发，而冷凝效果不变，使得溶剂未能与原料充分接触，降低了油脂的扩散速率。Mohammadpour等[20]研究表明，当温度过高可导致正己烷气化，致使液固比降低及低沸点物质的分解。因此，鉴于刺玫籽油的品质及提取率，选取温度为85 ℃为刺玫籽油提取的最适工艺参数。

2.2响应面优化结果分析

2.2.1建立回归模型方程由单因素方差分析得出提取时间P>0.05，故提取时间对刺玫籽油提取率的影响较小。因此，选取料液比、温度、粉碎目数为响应面设计因素，进行中心组合设计。利用Design8.0对表2中的数据进行回归分析可得响应面模型方程：Y=18.08-0.062X1-0.32X2+4.81X3-0.3X1X2+0.23X1X3-0.68X2X3-0.77X12-0.34X22-6.19X32

2.2.2模型及回归方程系数的显著性检验由表3可知，F回归=475.09，P<0.000 1，表明该模型达到显著性水平，其回归方程具有统计学意义，模型可靠，可用来分析与预测刺玫果籽油的提取率;失拟P=0.1019>0.05，不显著，说明该模型拟合较好，其建立的回归方程比较准确;此外，决定系数R2与调整系数Radj2的差别不大，说明本模型拟合度较佳，可用于确定本试验的最佳工艺[20]。其次，溶剂体积（X1）、水浴温度（X2）、粉碎目数（X3）对刺玫籽油的提取率均有显著性的影响; 由P值可知，各因素对刺玫籽油的提取率的影响大小为X3>X2>X1，即粉碎度>温度>溶剂体积;X2与X3的交互作用影响极显著，而X1与X2，X1与X3的交互作用影响显著;模型中X2、X3、X2X3、X12、X32对Y值的都具有显著性的影响，说明试验因素对响应值不仅是单纯的线性关系，而且都具有显著性影响。此外，由图6可知，X2、X3的曲线相对于X1的较为陡峭，表明水浴温度、粉碎目数对刺玫籽油提取率的影响程度大于溶剂体积;等高线图是

响应面在平面的投影，其形状越趋近于椭圆且排列越紧密时，预示俩个因素的交互作用越显著、对刺玫籽油提取率的影响越明显[21]。X1X2的等高线图呈圆形、排列稀疏且方差分析结果中P>0.05，故料液比、水浴温度对刺玫籽油提取率的影响不显著;X1X3、X2X3的等高线图都趋近于椭圆，但X2X3的曲面较陡峭，且P<0.000 1，而X1X3的曲面较平缓，且P>0.01，故X2X3对于刺玫籽油提取率的影响较X1X3显著，即水浴温度与粉碎度的交互作用对于响应值的影响程度大于溶剂体积与粉碎度的交互作用。

2.2.3CCD-RSM优化的验证由软件Design expert10.0.3设计的响应面实验中可知，当提取最优条件为：溶剂体积333.26 mL、水浴温度82 ℃、粉碎度68.95目时，刺玫籽油的最佳提取率为19.31%;因此，在考虑实验设备及可行性的条件下，确定溶剂体积333 mL、水浴温度82 ℃、粉碎目数60目为最佳条件进行3次平行试验，并求得平均值为18.84%，与理论值相差0.47%，与理论值相差较小，说明响应面实验模型与现实情况的拟合度较佳，可信度及稳定性较好。因此，基于CCD响应面法优化获取的工艺参数具有合理性。容晨曦等[23]利用超声提取法对刺玫籽油的提取率为11.92%。任洁等[2]利用酶解法及低温压榨法的提取率分别为9.0%、4.5%。相比之下，本试验的提取率较高。

2.3刺玫籽油体外抗氧化活性结果分析

2.3.1刺玫籽油清除ABTS+·能力根据1.2.5，以维生素C作为阳性对照，测定不同浓度刺玫籽油对ABTS+·清除活性。抗氧化剂可与ABTS+·反应，使蓝绿色的ABTS+·溶液褪色，从而降低其吸光度值，且清除ABTS+·的能力与吸光度值呈负相关。由图7可知，刺玫籽油的对ABTS+·的清除率存在量效关系，当刺玫籽油的浓度为10 μg/mL时对ABTS+ ·的清除率为30.25%;50 μg/mL时，为80.89%，而10.50 μg/mL维生素C溶液的ABTS+·的清除率分别为34.91%、87.49%;此外，经计算刺玫籽油的IC50值为29.73 μg/mL，而维生素C的IC50值为26.51 μg/mL。因此，维生素C清除ABTS+·的活性优于刺玫籽油。唐琳琳等[23]研究发现，利用索氏提取法提取的红树酶籽油清除ABTS+·的IC50值为20.41 mg/mL。故，相对于红树酶籽油，刺玫籽油ABTS+·清除能力更强。

2.3.2刺玫籽油清除DPPH·能力根据1.2.5，以维生素C为阳性对照，测定不同浓度刺玫籽油对DPPH·清除活性。DPPH·与抗氧化剂的H+或者电子结合可使溶液颜色由紫色变为黄色，从而降低吸光度值[24]。由图8可知，当刺玫籽油浓度为10 μg/mL时，清除率为14.19%，且随着刺玫籽油质量浓度的升高，其清除DPPH·的效果也越佳。当刺玫籽油的浓度为50 μg/mL时，DPPH·清除率为89.93%，并且IC50值为34.58 μg/mL;而同浓度的维生素C溶液自由基清除率为61.37%，IC50值为49.62 μg/mL，故刺玫籽油清除DPPH自由基的能力强于维生素C。

2.3.3刺玫籽油清除O-2·能力以维生素C作为阳性对照，测定不同浓度刺玫籽油对清除O-2·活性。O-2·为人体内存在的活性氧之一，具有氧化作用。当其产生异常时，会损坏机体细胞、DNA及蛋白质，导致机体衰老、炎症、癌症及心血疾病等系列疾病的发生[25-27]。邻苯三酚在Tris-HCl（pH 8.2）溶液中可发生自氧化产生O-2·及有色中间体，抗氧化剂可催化O-2·与氢分子的反应，且抗氧化剂中的微量元素可与中间体螯合，阻碍中间体的累积，从而降低吸光度。由图9可知，在试验浓度10～50 μg/mL范围内，刺玫籽油清除O-2·的能力随浓度的增大而增强。其 IC50值为40.54 μg/mL，而维生素C的IC50值为26.37 μg/mL，故刺玫籽油清除O-2·能力弱于维生素C。罗伟强等[29]对丝瓜籽油的抗氧化活性实验结果表明，其对O-2·的清除能力为IC50=0.069 mg/mL;高妮娜等[30]对奇亚籽油行体外抗氧化活性评价结果得出其清除O-2·的IC50值为4.97 mg/mL因此，刺玫籽油清除O-2·的能力优于丝瓜籽油及奇亚籽油。

2.3.4刺玫籽油还原力测定以维生素C作为阳性对照，测定不同浓度刺玫籽油还原力。由图10可知，10～50 μg/mL浓度范围内刺玫籽油还原能力随着质量浓度的升高，逐渐增大，当浓度为50 μg/mL时，吸光度最大为0.12，而同浓度的维生素C的还原力为0.41，可能是维生素C内酯环的烯醇式结构与羰基的共轭作用[20]，从而增强了维生素C的还原力作用。

3讨论

刺玫果籽油富含生育酚、不饱和脂肪酸、多酚、植物甾醇及类胡萝卜素，可作为优良的食用油，但提取技术受限是其未能大规模生产的原因之一。屈岩峰等[10]利用CO2超临界萃取技术提取率达97.79%;容晨曦[23]等利用超声提取法对刺玫籽油的提取率为11.92%; 任洁等[2]利用酶解法提取率分别为9.0%。CO2超临界萃取技术对设备要求高，超声提取法噪音大，酶解法需要大量酶，且操作过程烦琐。本研究采用的刺玫果籽油提取工艺得到的籽油提取率较CO2超临界萃取技术稍低，但优于超声提取法及酶解法，并且操作简单，设备要求低，噪音污染小，提取成本低，更有利于工業生产。由于化学合成的抗氧化剂对生物体具有潜在的毒性，近年来，寻找天然抗氧化剂成为了研究的热点之一，尤其是富含各种抗氧化物质的植物籽油。本研究结果表明，刺玫果籽油较强的清除自由基的活性，同时具有一定的还原力，而且具有浓度依赖性。植物籽油的抗氧化活性可能与其所含的各种物质协同作用相关，而非单一成分决定。至于各物质的抗氧化作用的强弱及其活性大小与各物质结构间的联系，有待进一步的探索。

4结论

本试验通过对野生刺玫籽油的提取工艺及体外抗氧化活性进行研究，采用索氏提取法对刺玫籽油进行提取，基于单因素试验的基础上，利用 CCD-RSM优化法对刺玫籽油的提取工艺参数进行优化，获得提取刺玫籽油的最佳工艺：溶剂体积333 mL、温度82 ℃、粉碎度60目，此条件下，最佳的刺玫籽油提取率为18.84%，与理论值相差0.47%。该方法操作简便、提取率高，且所得的结果可信，因此，该方法可用于刺玫籽油的提取。此外，由于抗氧化反应机制的复杂性，无法用单一的检测方法综合评价物质的抗氧化能力。因此，本实验采用ABTS+·清除法、DPPH·清除法、O-2·清除法、还原力的测定法对刺玫籽油的体外抗氧化活性进行评价。刺玫籽油清除ABTS+·、O-2·、DPPH·试验中，对自由基的清除率最高可分别达80.89%、79.64%、89.93%，尤其对DPPH自由基的清除活性最强，表明刺玫籽油具有较好的抗氧化活性。此外，在Fe3+还原试验中，结果表明刺玫籽油具有一定的还原作用。综上所述，基于CCD响应面法优化提取工艺参数可提高刺玫籽油的提取率，刺玫籽油具有较强的抗氧化活性，可作为一种天然的抗氧化剂。本实验可为刺玫籽油的深入研究奠定实验基础，及刺玫果的综合开发利用提供一定的理论依据。

参考文献

[1]Mariola D，Ewa M，Danuta K. Rose hip seed oil：methods of extraction and chemical composition[J].European Journal of Lipid Science and Technology，2019（121）：180-440.

[2]任洁. 不同方法提取刺玫果籽油工艺及提取其果籽油降血脂的试验研究[D].长春：吉林农业大学，2016.

[3]Simopoulos A P，Salem N.Fatty acids and lipids from cell biology to human disease[J].Lipids，1996，31（1）：1-2.

[4]Sezai E. Chemical composition of fruits in some rose （Rosa spp.） species[J].Food Chemistry，2007，104（4）：1379-1384.

[5]Pawlosky R J，Ward G，Sale N. Essential fatty acid uptake and metabolism in the developing rodent brain[J].Lipids，1996（31）：103-107.

[6]Lane K，Derbyshire E，Li W，et al. Bioavailability and potential uses of vegetarian sources of omega-3 fatty acids：a review of the literature[J].Critical Reviews in Food Science and Nutrition，2014，54（5）：572-579.

[7]Naveed A，Farooq A，Anwar H G. Rose hip（Rosa canina L.）oils. essential oils in food preservation[J].Flavor and Safety，2016：667-675.

[8]Cavalera M，Axling U，Rippe C，et al. Dietary rose hip exerts antiatherosclerotic effects and increases nitric oxidemediated dilation in ApoE-null mice[J].The Journal of Nutritional Biochemistry，2017（44）：52-59.

[9]Zahra A，Mohammad S A，Mahin R，et al. Phytochemistry，Traditional Uses and Pharmacological Profile of Rose Hip：A Review[J].Current Pharmaceutical Design，2018，24（35）：4101-4124.

[10]屈巖峰，王腾宇，李红玲，等.CO2超临界萃取技术提取刺玫果籽油及其抗氧化性的研究[J].食品工业，2009，30（2）：8-10.

[11]高阳，姜会敏，霍雅玉，等. 刺玫果的体外抗氧化活性研究[J].西北药学杂志，2015，29（3）：226-230.

[12]于晓瑾. 百华花楸黄酮分离鉴定及对As2O3诱导心肌氧化应激防护研究[D].哈尔滨：哈尔滨工业大学，2017.

[13]张丽敏，姜涛.广藿香精油抗氧化活性的研究[J].中国野生植物资源，2016，35（6）：31-34.

[14]马金魁，李珂，韦炳墩，等.百香果籽油超临界CO2萃取工艺优化及其体外抗氧化活性[J].食品与机械，2017，33（7）：155-159.

[15]郑满荣，吕晓玲，王建新，等.3种沙棘油的主要成分及抗氧化能力比较[J].食品研究与开发，2018，39（8）：24-29.

[16]唐小媛，韩永斌.索氏法提取黑莓籽油工艺研究[J].食品工业科技，2012，33（22）：303-305.

[17]朱凯艳，张文斌，杨瑞金，等.粉碎处理对花生水酶法提取油脂和蛋白质的影响[J].食品与机械，2012，28（2）：119-122.

[18]LI P，Gasmala M AA，Zhang W，et al. Effects of roasting temperatures and grinding type on the yields of oil and protein obtained by aqueous extraction processing[J].Journal of Food Engineering，2015（173）：15-24.

[19]蔣新龙，蒋益花，陈思晴，等.棠梨籽油的超声波-微波协同提取及其脂肪酸组成[J].中国粮油学报，2019，34（3）：61-66.

[20]Mohammadpour H，Sadrameli S M，Eslami F，et al. Optimization of ultrasound - assisted extraction of Moringa peregrina oil with response surface methodology and comparison with Soxhlet method[J].Industrial Crops and Products，2019（131）：106-116.

[21]李健鹏，李险峰，陈鸿雁，等.响应面法优化索式提取艾草精油的工艺研究[J].惠州学院学报，2020，40（3）：42-46.

[22]田建华，张春媛，魏璐.沙棘果渣总黄酮提取工艺优化及抗氧化活性研究[J].天然产物研究与开发，2021，33（1）：65-72.

[23]容晨曦. 刺玫籽油和原花青素的提取及其降血脂功能的研究[D].哈尔滨：东北农业大学，2016.

[24]唐琳琳，桑英，陈思睿，等. 不同提取方法的红树莓籽油品质及体外抗氧化活性对比[J].现代食品科技，2020，36（3）：81-88.

[25]Rodrigues F T，Ramos K A C，Galoda S P，et al. Effects of electron beam irradiation on the bioactive components of goji-berry[J].Radiation Physics and Chemistry，2021（179）：109144.

[26]李响. 胞外超氧阴离子破坏肠屏障机制的探究[D].广州：南方医科大学，2020.

[27]Tiago J C，Paula R B，Cristina A，et al. The homeostatic role of hydrogen peroxide，superoxide anion and nitric oxide in the vasculature[J].Free Radical Biology and Medicine，2021（162）：615-625.

[28]Suhyun K E R，Woo D，Gun L. Apigenin promotes antibacterial activity via regulation of nitric oxide and superoxide anion production[J].Journal of Basic Microbiology，2020，60（10）：862-872.

[29]罗伟强，唐水秀，毛慧珊，等. 丝瓜籽油成分分析及其抗氧化活性研究[J].食品研究与开发，2021，42（9）：49-53，81.

[30]高妮娜，刘鸿铖，樊红秀，等.超临界CO2萃取奇亚籽油工艺优化及 抗氧化活性的研究[J].食品科技，2019，44（8）：217-222.

Process Optimization on Soxhlet Extraction for Seed Oil from

Rosa davurica and Antioxidant Activities Analysis of Extracted Oil in Vitro

YU Xiao-jin，LIU Cai-yan，ZHANG Meng，WANG Shuo，YUAN Xu，HAN Hua

（College of Pharmacy，Heilongjiang University of Chinese Medicine，Harbin 150040，China）

Abstract：ObjectiveThe antioxidant properties of Rosa davurica seed oil in vitro was evaluated to provide scientific basis for further studying and comprehensive development and utilization for Rosa davurica.MethodRosa davurica seed oil was extracted by Soxhlet Extraction. With extract yields as target，based on the analysis of single factors such as extraction temperature，crushing mesh number，extraction time and solvent volume. The experiment of response surface optimization was selected for extraction temperature，crushing mesh number，extraction time，solvent volume as variables，as well as the in vitro antioxidant activity of Rosa davurica  seed oil was analyzed using vitamin C as positive control.ResultThe optimum extraction conditions were projected as solvent volume 333 mL，extraction temperature 82 ℃，crushing mesh number 60 mesh，and the yield of 18.84% were obtained. Moreover，these results demonstrated that Rosa davurica seed oil had dose-effect on the scavenging rate of ABTS，DPPH，superoxide anions that the IC50 values were 29.73 μg/mL，34.58 μg/mL，40.54 μg/mL，respectively，compared to that of vitamin C group was 26.51 μg/mL，49.62 μg/mL，26.37 μg/mL，respectively. Besides，it also possessed definite reducing powering.Conclusion Response Surface Optimization Method is adopted to improve the extraction rate of Rosa davurica seed oil，the seed oil from Rosa davurica shows significant antioxidant capacity，and can be usedas a potentially available natural antioxidant.

Keywords：Rosa davurica; seed oil; soxhlet extraction; central composite response surface design; antioxidant activity