β地中海贫血患儿T淋巴细胞亚群、自然杀伤细胞、B淋巴细胞水平的变化及临床意义

郭文丽，刘香萍，陈信，张倩

深圳市宝安区人民医院检验科，广东 深圳 518101

因β珠蛋白基因的缺失或缺陷，引起β珠蛋白链合成受到抑制，进而致使珠蛋白链比例失衡的溶血性贫血为β地中海贫血，其为常染色体隐性遗传性血红蛋白疾病，该病临床特征主要表现为贫血、特殊面容、肝脾肿大、肾脏受损等[1-2]。目前临床上尚无能改变β地中海贫血异常基因的准确治疗方法，多数患儿只能采取定期红细胞输注配合铁螯合剂去铁治疗，以此维持体内血红蛋白浓度，保证正常生活质量[3]。同种异体输血弊端在于会导致免疫功能抑制，造成细胞防御功能受到损害，患儿在治疗过程中易受到细菌病毒及肿瘤的侵害；长期输血治疗造成红细胞不断分解，进而使铁质大量聚集，引发铁过载，过量的铁沉积在重要脏器，导致多组织及脏器功能受损，极易出现心力衰竭、糖代谢紊乱等严重并发症，威胁到患儿生命安全[4-5]。β地中海贫血患儿的长期贫血和输血治疗，使其常出现反复感染，这会进一步造成恶性循环，影响患儿生活质量，为家庭及社会带来沉重负担[6]。因此，临床检测T淋巴细胞亚群、自然杀伤(NK)细胞、B淋巴细胞水平变化，以此为基础正确评价患儿免疫状况，制定针对性免疫干预治疗，达到减少患儿反复感染、提升长期生存质量的目的。为此，本研究旨在探讨β地中海贫血患儿T淋巴细胞亚群、NK细胞、B淋巴细胞水平的变化及临床意义，现报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料选取2017年3月至2020年3月深圳市宝安区人民医院收治的84例β地中海贫血患儿作为研究组。纳入标准：①患儿经诊断确诊为β地中海贫血[7]；②患儿长期接受高量输血治疗；③临床资料完整；④患儿家属均知晓此研究，且同意参与。排除标准：①合并恶性肿瘤；②有内分泌疾病；③合并其他血液疾病；④严重心脏、肝、肾功能异常；⑤严重精神、意识障碍。研究组中男性45例，女性39例；年龄2～15岁，平均(6.82±3.04)岁；体质量指数(BMI)14～19 kg/m2，平均(18.21±1.48)kg/m2；发病年龄3个月～4岁，平均(1.15±0.28)岁；病程1～11年，平均(3.47±1.49)年。选取同期84例健康儿童作为对照组，其中男性44例，女性40例；年龄2～16岁，平均(6.75±2.98)岁；BMI 15～20 kg/m2，平均(18.33±1.54)kg/m2。两组儿童的性别、年龄和BMI比较差异均无统计学意义(P＞0.05)，具有可比性。本研究经我院伦理委员会批准。

1.2 检测方法选用BeckmanCoulter DxFLEX检测T淋巴细胞亚群(CD3+细胞、CD4+细胞、CD8+细胞、CD4+/CD8+比值)、NK细胞、B淋巴细胞(CD19+细胞)水平。具体步骤：(1)于清晨采集儿童空腹静脉血1 mL，将其置于EDTA抗凝管中，并于6 h内进行处理；(2)采用四色直接免疫荧光法进行检测，将荧光素标记的各种单克隆抗体加入到全血中，与白细胞膜上相应的抗原结合，经过溶血、洗涤(和固定)等步骤后，在流式细胞仪上进行分析；(3)根据检测样本的数量，一个样本需要做两管检测，分别向已编好号的试管中加入10μL T亚群混合抗体，10μL BNK亚群混合抗体；(4)分别向试管中加入混匀的100μL抗凝血，涡旋混匀，避光，室温(19℃～22℃)孵育15 min；(5)向每个检测管中加入OptiLyse C 500μL，并涡旋10 s，充分混匀，避光，室温(19℃～22℃)孵育10 min至溶液由浑浊变为澄清；(6)每管中加入200μL生理盐水或者PBS，混匀；(7)小心加入100μL绝对计数微球，上机进行检测。

1.3 观察指标比较两组儿童T淋巴细胞亚群(CD3+细胞、CD4+细胞、CD8+细胞、CD4+/CD8+比值)、NK细胞、B淋巴细胞(CD19+细胞)水平。

1.4 统计学方法应用SPSS19.0统计软件进行数据分析。计量资料以均数±标准差(±s)表示，组间比较采用t检验；计数资料比较采用χ2检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组儿童的T淋巴细胞亚群比较研究组患儿的CD3+细胞、CD4+细胞、CD4+/CD8+比值明显低于对照组，CD8+细胞明显高于对照组，差异均有统计学意义(P＜0.05)，见表1。

表1 两组儿童的T淋巴细胞亚群比较(±s)

表1 两组儿童的T淋巴细胞亚群比较(±s)

2.2 两组儿童的NK细胞、B淋巴细胞比较研究组患儿的NK细胞水平明显低于对照组，CD19+细胞水平明显高于对照组，差异均有统计学意义(P＜0.05)，见表2。

表2 两组儿童的NK细胞、B淋巴细胞比较(±s，%)

表2 两组儿童的NK细胞、B淋巴细胞比较(±s，%)

3 讨论

β地中海贫血是危害性极大的遗传病，多发于我国广西、广东等华南地区。为保证β地中海贫血患儿正常的生长发育及生活质量，患儿需要长期接受输血治疗[8]。但在长期的贫血状态下，患儿进行大量输血会增加其机体铁负荷，导致患儿出现免疫功能下降，进而出现呼吸道感染等各种并发症，危及患儿生命安全；且输血治疗过程中若不进行去铁治疗，过量的铁负荷也会导致患儿出现生长发育迟滞、肝硬化、糖尿病等疾病[9-10]。患儿接受同种异体输血会引起免疫功能的抑制，由此推测患儿长期进行输血治疗会抑制其固有免疫系统。因此，临床通过检测T淋巴细胞亚群、NK细胞、B淋巴细胞水平诊断患儿病情，评估其免疫状况，并在此基础上采取针对性干预治疗，对改善患儿免疫紊乱、提升患儿生活质量、减轻家庭及社会负担有重要意义。

T淋巴细胞亚群水平关系到患儿病情进展与预后效果，有研究表明T淋巴细胞亚群比例失调是恶性肿瘤病情发展的重要原因之一[11]。总T细胞的值由CD3+代表，其水平的降低表示免疫功能下降，CD4+则表达于辅助T细胞，CD8+主要表达于抑制细胞杀伤性T细胞，若CD3+、CD4+、CD8+水平发生异常变化则提示患儿免疫功能发生紊乱[12]。患儿长期生存率受T细胞免疫重建影响，若其免疫重建推迟会导致病毒感染或疾病复发几率的增加。本研究显示，相比健康儿童，β地中海贫血患儿的CD3+细胞、CD4+细胞、CD4+/CD8+比值明显降低，CD8+细胞水平明显升高，这表明β地中海贫血患儿会出现CD8+细胞活性增高，CD3+细胞、CD4+细胞活性降低等情况，细胞免疫功能紊乱会导致CD4+/CD8+比值倒置，进而造成患儿细胞免疫功能失调。临床检测β地中海贫血患儿的T淋巴细胞亚群水平，有利于评估其机体免疫状况，对早期采取针对性治疗干预措施促进患儿预后有重要意义。

机体细胞受NK细胞监视，在其发挥作用的同时能够促进B淋巴细胞的成熟及分化，调节胸腺细胞，进而提高各脏器免疫功能。NK细胞是固有免疫系统的重要组成部分，能够分泌多种细胞因子起到细胞毒杀伤功能；即无需抗原预先致敏，也无需抗体参与，在出现病毒感染细胞及肿瘤细胞的早期能够及时识别清除，充分发挥桥梁作用链接固有免疫与适应性免疫，促进免疫调节[13-14]。CD4+T细胞的分化、增殖、功能受NK细胞的影响，与膜上CDl6+CD56+、辅助性T细胞细胞膜上的CD4+发生免疫黏附，通过影响CD4+T细胞调节T细胞免疫效应，若其水平降低则会影响到机体免疫功能[15]。本研究显示，相比健康儿童，β地中海贫血患儿的NK细胞水平明显降低，其原因可能在于患儿长期反复接受同种异体输血，导致人体调节性T细胞抑制功能增强，进一步抑制了NK细胞活性。临床检测β地中海贫血患儿的NK细胞水平，能够清晰观察患儿临床免疫状况，为后续免疫干预治疗提供新策略。B淋巴细胞参与机体体液免疫反应的方式为分泌血清Ig，而CD19+是其特有的表面分化蛋白，能够作为B淋巴细胞特异性标志[16]。本研究显示，相比健康儿童，β地中海贫血患儿的CDl9+细胞水平明显升高。其原因可能在于患儿长期接受输血治疗导致诸如病毒等外来病原体侵入风险大幅提升；加之患儿体弱易发生各种感染，免疫系统受到刺激会导致体内淋巴细胞增生；在此基础上B淋巴细胞增殖分化的加强，显著提升其活性，Ig分泌进一步提升，致使体液免疫功能受到影响[17-18]。

综上所述，β地中海贫血患儿T淋巴细胞亚群、NK细胞、B淋巴细胞水平明显异于健康儿童，普遍存在免疫功能紊乱，临床加强对T淋巴细胞亚群、NK细胞、B淋巴细胞水平的检测，监测其水平变化，有利于患儿病情诊断、免疫状况评估及早期针对性干预治疗，对降低患儿的感染风险、显著提高其生存质量意义重大。