ApoE基因526C>T多态性与瑞舒伐他汀调脂疗效及hs-CRP的关系

李汶嘉，郑文玲，杨 伟

高脂血症特别是高胆固醇血症是冠心病的危险因素之一，随着长期胆固醇水平的异常升高，病人发生冠心病概率明显上升[1]。目前，临床治疗冠心病、动脉粥样硬化最常用的药物是他汀类调脂药，该类药物在降脂及降低临床不良事件发生率方面存在一定的个体差异[2]。近年来，随着医学界对遗传药理学不断深入的研究，越来越多的研究表明，脂代谢相关基因多态性会造成蛋白结构域及功能的改变，从而影响他汀类药物的降脂效果[3]。载脂蛋白E(apolipoprotein E，ApoE)是常见的血浆脂蛋白之一，其主要作用是调节体内脂质代谢，而这一功能的实现依赖于低密度脂蛋白受体(low density lipoprotein receptor，LDLR)。临床实验表明，同他汀类药物一样，ApoE基因多态性对各种人群自身的调脂效能均存在一定的影响，但不同的是，他汀类药物调节血脂的主要途径是通过竞争性抑制对羟甲戊二酰辅酶A(3-hydroxy-3-m ethylglutaryl eoenzyme A，HMG-CoA)还原酶活性实现[4]。但值得注意的是，ApoE基因与不同亚型LDLR的结合方面同样存在差异[5]，但这种差异与HMG-CoA还原酶活性的改变是否同期尚不清楚。超敏C-反应蛋白(hs-CRP)亦参与并促进动脉粥样硬化的发生、发展，高水平的C-反应蛋白(CRP)是导致冠心病发生的独立危险因素，其浓度水平和他汀类药物治疗冠心病病人的疗效及预后密切相关[6]。本研究就ApoE基因526C>T多态性与瑞舒伐他汀调脂疗效及hs-CRP的关系进行探讨，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2018年1月—2020年3月西安交通大学医学院第一附属医院收治的高脂血症病人155例进行前瞻性研究，其中男 85 例，女70例，年龄25～79(52.9±10.2)岁。入选病人均保持低脂饮食，口服瑞舒伐他汀20 mg，每晚1次，连续服用12周。本研究经医院伦理委员会批准，所有病人及家属均知情同意并签署知情同意书。

1.2 纳入与排除标准 纳入标准：符合《2014年中国胆固醇教育计划血脂异常防治专家建议》[7]中高脂血症的诊断标准。排除标准：伴有肝、肾功能异常者；合并糖尿病、内分泌功能紊乱者；合并其他脏器肿瘤者；合并精神疾病者。

1.3 试剂及仪器 实时定量聚合酶链式反应(RT and quantitative real-time PCR，RT-PCR)相关试剂、总RNA提取试剂均由北京全式金公司提供；聚合酶链式反应(PCR)扩增仪由杭州朗基科学仪器有限公司提供；全波长酶标仪、凝胶成像仪由美国Bio-RAD公司提供、血生化指标采用奥林巴斯全自动生化分析仪进行检测。

1.4 试验方法 于治疗前、治疗后的第12周末分别采集空腹12 h静脉血5 mL并分离血清。

1.4.1 DNA提取 人血DNA提取试剂盒提取病人的血液DNA后，利用PCR-荧光探针法对ApoE基因进行测定。

1.4.2 ApoE基因型检测 采用等位基因特异性多重PCR技术对ApoE基因进行分型。序列：P1为5′-ATGCCGATGACCTGCAGAATT-3′，P2为5′-ATGCCGATGA CCTGCAGAATC-3′，分别检测158位的半胱氨酸(Cys)和精氨酸(Arg)；P3为5′-CGCGGACATGGAGGACGTTT-3′，P4为5′-CGCGGACATGGAGGACGTTC-3′，分别检测112位的半胱氨酸(Cys)和精氨酸(Arg)；P5为5′-GTTCAGTGATTGTCGCTGGGC-3′，为公共引物。其中，ApoE基因有两个单核苷酸多态性(SNPs)，分别为氨基酸序列第112位(c.388 T>C)为E3/2组，第158位(c.526 C>T)为E4/3组，其余的为E3/3组。P1、P2与P5间扩增片断大小为451 bp，P3、P4与P5间扩增片断为588 bp。反应体系：总体积为25 μL，各个样本分为A管、B管，均含12.5 mL的2×PCR Master Mi，P5共20 pmol。其中A管加入15 pmol的P1、10 pmol的P3；B管加入15 pmol的P2，10 pmol的P4。反应条件为：95 ℃、5 min预变性，然后在95 ℃、45 s，62 ℃、45 s，72 ℃、45 s，共循环35次，最后72 ℃、5 min延伸，产物在采用含溴化乙锭(EB)浓度为10 g/L的琼脂糖凝胶进行电泳。

1.5 观察指标 对比观察治疗前、治疗12周后ApoE基因各组血清hs-CRP、总胆固醇(total cholesterol，TC)、三酰甘油(triglyceride，TG)、高密度脂蛋白胆固醇(high density liptein cholesterol，HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(low density liptein cholesterol，LDL-C)、载脂蛋白B(apolipoprotein B，ApoB)、载脂蛋白A1(apolipoprotein A1，ApoA1)水平。

2 结 果

2.1 不同ApoE基因型组间治疗前血脂水平比较 治疗前，E3/2组血清TC、LDL-C水平低于E3/3组和E4/3组，差异均有统计学意义(P<0.05)；E3/3组血清TC、LDL-C水平低于E4/3组，差异均有统计学意义(P<0.05)。详见表1。

表1 不同ApoE基因型组间治疗前血脂水平比较(±s)

2.2 不同ApoE基因型组间治疗12周后与治疗前血脂水平差值比较 治疗12周后，E3/2组血清TC、LDL-C水平下降幅度大于E3/3组，差异有统计学意义(P<0.05)。详见表2。

表2 不同ApoE基因型组间治疗12周后与治疗前血脂水平差值比较(±s)

2.3 不同ApoE基因型组间治疗前后hs-CRP水平比较 治疗前，E4/3组血清hs-CRP水平低于E3/2组和E3/3组，差异均有统计学意义(P<0.05)；治疗后，3组血清hs-CRP水平均较治疗前降低，差异均有统计学意义(P<0.05)；治疗后，E4/3组血清hs-CRP水平与E3/2组、E3/3组比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。详见表3。

表3 不同ApoE基因型组间治疗前后hs-CRP水平比较(±s) 单位：mg/L

3 讨 论

ApoE基因具有显著的遗传多态性，常见异构体有ApoE2、ApoE3和ApoE4，这3个ApoE基因的突变体为ApoE2和ApoE4，野生型为ApoE3，ApoE基因不仅参与神经组织的免疫调节和再生，还参与水解脂肪酶的激活和血小板聚集的抑制[8]。他汀类药物作为HMG-CoA还原酶抑制剂，可明显降低LDL-C水平，但有研究发现，他汀类药物治疗高脂血症的疗效存在较大个体差异，调整药物剂量后，仍有约33%的病人无法达到预期疗效，可能与药物转运蛋白、药物代谢酶、药物靶点分子基因或药物受体发生变异有关[9-10]。

本研究结果显示，治疗前，E3/2组血清TC、LDL-C水平低于E3/3和E4/3组(P<0.05)，E3/3组血清TC、LDL-C水平低于E4/3组(P<0.05)；治疗12周后，E3/2组血清TC、LDL-C水平下降幅度大于E3/3组(P<0.05)。可能与E3/2组病人较E3/3组病人的低密度脂蛋白胆固醇(LDL)受体亲和力低，极低密度脂蛋白胆固醇(very low-density lipoprotein，VLDL-C)的残基清除速度低，代偿性LDL受体合成增加，进而激活HMG-CoA还原酶活性有关，最终的综合效应表现为LDL受体亲和力低病人通过他汀类药物治疗的效果更好；但E4/3中并未发现与之相反的结论，可能与E4、E2等位基因效能较弱，且脂代谢过程复杂，他汀类药物治疗结果容易受到环境因素的影响有关[11]。

ApoE基因多态性和炎症反应亦相关[12]。本研究结果显示，治疗前，E4/3组血清hs-CRP水平低于E3/2组和E3/3组，差异有统计学意义(P<0.05)；治疗后，E4/3组血清hs-CRP水平与E3/2组、E3/3组比较，差异无统计学意义(P>0.05)，说明E4等位基因对瑞舒伐他汀降低hs-CRP水平产生影响，与Hubacek等[13]研究结果类似。通常E4等位基因携带者血清TC、LDL-C水平较高，其患冠心病风险增加[14]。hs-CRP高水平是冠心病的危险因素，然而本研究中的E4等位基因携带者hs-CRP水平较低，可能与本研究样本量较小有关。

综上所述，ApoE基因多态性会影响高脂血症病人血清TC，LDL-C水平，从而影响瑞舒伐他汀的调脂疗效，临床上可以根据病人ApoE基因多态性来指导他汀类药物治疗方案。