六味降糖颗粒提取和制剂工艺研究*

岳 璐，李牧珅，李春燕，张学敏，樊江平

(1 新乡医学院三全学院生物与基础医学实验教学中心，河南 新乡 453000；2 新乡医学院药学院，河南 新乡 453002)

目前全球有4亿多成年人患有糖尿病，其中大部分是Ⅱ型糖尿病。中药在治疗糖尿病及其并发症上具有独特的优势。六味降糖颗粒是由丹参、葛根等6味中药制成的中药降糖颗粒。其中主药葛根能解表退热、生津止渴，葛根中的黄酮类化合物具有良好的扩血管作用，临床上葛根素用于改善由于糖尿病等造成的微循环障碍。丹参能活血调经，祛瘀止痛，养心安神，药理学研究表明丹参具有降低血糖、防治糖尿病并发症和改善微循环的作用[1-3]。本研究采用正交实验法探究最佳水提醇沉工艺，并筛选最佳辅料，所制备的颗粒剂稳定可行，成药性良好。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

UV-2700紫外可见分光光度计，日本岛津公司；葛根素对照品(批号：110752-201514)，中国食品药品检定研究所；无水乙醇(批号：R0170308，分析纯)，天津市天力化学试剂有限公司；可溶性淀粉(批号：20100317)，天津市德恩化学试剂有限公司；β-环糊精(批号：20140703)，北京索莱宝科技有限公司。

1.2 实验方法

1.2.1 处方吸水率

按六味降糖药的处方量称取9份，分别放入烧杯中，加入400 mL水，浸泡时间分别为0、10、20、30、40、50、60、90、120 min，测定吸水率[4]

1.2.2 水提醇沉工艺

以总黄酮含量和干膏重为指标，采用L9(34)正交表进行实验[5]，水提工艺考察加水量、煎煮次数、煎煮时间这三个因素对水提效果的影响，醇沉工艺考察药液比、醇沉浓度和醇沉时间这三个因素对醇沉效果的影响。

1.2.3 总黄酮含量测定

取葛根素对照品约15 mg，精密称定，置入100 mL量瓶中，加甲醇定容，摇匀，作为对照品母液。精密量取葛根素对照品母液0.25 mL、0.50 mL、0.75 mL、 1.00 mL、1.50 mL和2.00 mL 至25 mL的容量瓶中，加30%的乙醇溶液定容，摇匀，在251 nm处测定吸光度，并绘制标准曲线。将水提醇沉工艺中的中药药液过滤后，精密量取1 mL药液至50 mL的容量瓶中，加水定容，摇匀，过滤，精密量取0.5 mL至50 mL的容量瓶中，30%乙醇定容，摇匀，在251 nm处测定吸光度，代入上述标准曲线中计算总黄酮的含量。

1.2.4 干膏的制备

将药液搅拌均匀，精密量取15 mL置已干燥并恒重的坩埚中，平行制备3组， 在105 ℃下干燥，测定干膏重量。

2 结果和讨论

2.1 处方吸水率

吸水率实验结果见图1，处方药材浸泡20 min后吸收率基本保持稳定，故最佳浸泡时间为20 min。

图1 处方吸水率测定结果Fig.1 The water absorption results of the prescription

2.2 水提工艺的筛选

如表1所示，根据极性大小判断各因素对水提工艺的影响大小，极差越大，影响越大，故水提工艺各因素影响大小次序为C(煎煮次数)> A(加水量)> B(煎煮时间)。每个因素下，各水平的比较主要参考均值的大小，均值越大，该因素相应的水平提取效果越好，故水提的最佳工艺为A3B1C3，即煎煮3次，每次加10倍的水，每次煎煮1 h。在大生产中，综合考虑表1实验结果与大生产中的时间成本和能源消耗，煎煮次数中煎煮2次(均值-7.596)与煎煮3次(均值-8.350)差别不大，故可以煎煮2次以节约成本；另外加水量考察中，8倍量水(均值-7.526)与10倍量水(均值-7.626)的差异很小，故定为8倍量加水量更利于实际生产。

表1 水提工艺正交实验结果Table 1 Orthogonal experimental results of water extraction process

2.3 醇沉工艺的筛选

由表2可知，各因素影响大小次序为C(醇沉时间)> B(醇沉浓度)> A(药液比)，故醇沉的最佳工艺为A3B3C1，即乙醇浓度50%，醇沉时间12 h，药液比1:2。在大生产中，综合考虑表2实验结果与大生产中的时间成本和能源消耗，乙醇浓度40%(均值-7.361)与乙醇浓度50%(均值-7.392)差别很小，故可将醇沉浓度定为40%以节约成本；另外药液比考察中，药液比1:1.5(均值-7.259)与药液比1:2(均值-7.403)的差异较小，故可将药液比定为1:1.5。

表2 醇沉工艺正交实验结果Table 2 Orthogonal experimental results of alcohol precipitation process

2.4 最佳辅料的筛选

分别以可溶淀粉、β-环糊精、低聚果糖、果糖二磷酸钠作为辅料，药与辅料1:1.5研磨均匀，用70%的酒精做润湿剂，将制好的软材过14目筛，制得的颗粒放入电热鼓风干燥箱(60 ℃)干燥，过40目筛，筛去细粉。

外观：研究发现低聚果糖制软材效果不好，太黏；其余辅料制软材效果较好。

溶化性：按中国药典制剂通则中颗粒剂的检查法，取颗粒1 g至20 mL的热水中，搅拌5 min，立即观察。以可溶性淀粉制得的颗粒有明显的沉淀，果糖二磷酸钠和低聚果糖为辅料制得的颗粒有轻微浑浊，以β-环糊精的颗粒溶化性良好。

吸湿性：结果表明以低聚果糖为辅料的颗粒全部黏在一起，以果糖二磷酸钠和可溶性淀粉为辅料的颗粒较好；以β-环糊精为辅料的颗粒无明显吸湿性，颗粒外观良好。

综上所述，β-环糊精制粒效果好，故以β-环糊精为本制剂的辅料。

2.5 总黄酮含量测定

图2 葛根素对照品标准曲线Fig.2 Standard curve of Puerarin reference substance

取葛根素线性溶液，在251 nm处测定吸光度，以线性溶液浓度与紫外吸收绘制标准曲线如图2所示，结果表明在1.579～12.63 μg/mL的范围内线性良好。

3 结 论

六味降糖颗粒是由葛根、丹参等6味中药组成的复方制剂，本实验采用以干膏重、总黄酮的含量为指标，采用正交实验对处方活性成分提取工艺进行影响因素分析，优选最佳水提工艺和醇沉工艺，并在此基础上优选最佳辅料，所制备的颗粒制剂工艺科学合理，可行性较强，颗粒成药性良好。