参芎注射液对急性非ST 段抬高型心肌梗死患者外周血Th17 及Treg 细胞亚群的影响*

魏 傲，李 强，丁 玲，谭 宪，郑 曦，辜 琴，郭东梅，罗晓丽

1 重庆市南川区人民医院，重庆 408400；2 陆军军医大学大坪医院

根据我国最新心血管病研究报告资料显示，急性心肌梗死（acute myocardial infarction，AMI）发病率呈逐年上升趋势，是除了恶性肿瘤外，造成我国居民死亡的最主要原因之一[1］。冠状动脉粥样硬化斑块的破裂是引起AMI 发生的直接原因。近年来相关研究显示，动脉粥样硬化的发病机制与机体细胞免疫紊乱密切相关，不同的CD4+T细胞参与了这一过程[2］。AMI患者机体促炎/抗炎同时存在，其中，辅助性T淋巴细胞17（T helper cell 17，Th17）分泌的白细胞介素17（interleukin-17，IL-17）可促进炎症反应。调节性T细胞（regulatory T cells，Treg）分泌的白细胞介素10（interleukin-10，IL-10），具有抗炎作用，Th17/Treg 细胞亚群失衡是促进AMI进展的重要因素[3］。相关研究显示，针对冠心病及AMI 患者，在常规抗血小板、调脂治疗的基础上，给予以参芎注射液为代表的中成药物，可显著提高临床疗效[4］，但具体机制尚不清楚。本研究通过探讨参芎注射液对急性非ST段抬高型心肌梗死（acute non ST segment elevation myocardial infarction，NSTEMI）患 者 外 周 血Th17/Treg 细胞亚群及相关下游炎性通路的影响，为阐明该药物的作用机制提供实验依据。

1 资料与方法

1.1 临床资料选取2017年1月至2019年10月在重庆市南川区人民医院就诊的150例NSTEMI患者，根据随机数字表法分为观察组和对照组，每组75 例。观察组中男45 例，女30 例，平均年龄（62.4±9.8）岁；平均病程（5.2±0.9）天；基础疾病：高血压41 例，糖尿病35 例，高脂血症38 例。对照组中男47例，女28例；平均年龄（61.9±9.2）岁；平均病程（5.0±1.1）天；基础疾病：高血压39例，糖尿病37例，高脂血症39例。两组患者基本临床资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2 纳入标准纳入：1）符合欧洲心脏病学会颁布的NSTEMI 诊断与治疗指南[5］者；2）患者书面知情同意并签订知情同意书，本研究获得医院伦理委员会的批准。

1.3 排除标准排除：1）对本研究使用药物过敏者；2）合并急慢性器官感染者；3）心功能Killip分级为Ⅳ级者；4）合并自身免疫系统疾病者。

1.4 治疗方法对照组给予抗血小板治疗、抗凝治疗、调脂及稳定斑块、冠状动脉介入治疗等对症治疗。观察组在对照组治疗方案的基础上同时给予参芎葡萄糖注射液（贵州益佰制药公司，批号：20140804，规格：200 mL/瓶）静脉滴注治疗，每次200 mL，每日1次。两组连续治疗2周。

1.5 观察指标

1.5.1 外周血Th17和Treg细胞亚群水平 抽取两组患者治疗前后静脉血4 mL，经肝素抗凝后，去抗凝血200 μL于EP管中，将其加入等体积的RPMI-1640 培养基（美国eBioscience 公司），接种于培养板，同时加入佛波酯（30 μL，1 μg/mL）、离子霉素（16 μL，50 μg/mL）及莫能霉素（16 μL，0.1 mg/mL）（以上试剂购自美国eBioscience 公司），培养箱中孵育4 h。取100 μL上述培养液，加入抗人CD4和CD25单克隆抗体（美国Invitrogen公司）10 μL，震荡混匀后室温避光孵育15 min，加入100 μL 细胞固定液。再次室温避光孵育15 min后，经1500×g离心5 min，弃上清后，加入100 μL破膜液，同时加入IL-17单克隆抗体（美国Invitrogen公司）10 μL和Foxp3 抗体10 μL，震荡混匀后，采用FACS 型流式细胞仪（美国BD公司）上机检测。

1.5.2 外周血炎性指标 分别于治疗前及治疗结束后，采用ELISA 法测定不同组间外周血炎性指标[白细胞介素6（interleukin-6，IL-6）、白细胞介素17（interleukin-17，IL-17）］和转化生长因子β（transforming growth factor-β，TGF-β）水平，具体操作依据IL-17、IL-6 及TGF-β 酶联免疫试剂盒（中国南京建成生物公司）说明书进行。

1.5.3 临床疗效[5］显效：相应治疗后患者心绞痛发作次数减少80%以上或基本消失，硝酸甘油使用剂量较治疗前减少80%以上。有效：心绞痛发作次数显著减少，即较治疗前减少50%～80%，硝酸甘油使用剂量较治疗前减少50%～80%。无效：心绞痛发作次数无明显减少。

1.5.4 心功能指标 用彩色多普勒超声仪检测两组治疗前后心功能指标，包括舒张早期充盈峰速度与舒张晚期充盈峰速度的比值（E/A）、左心室射血分数（left ventricular ejection frac‐tion，LVEF）及左室舒张末期直径（left ventricular end diastolic diameter，LVEDD）。

1.5.5 不良反应 记录两组患者治疗期间恶心、呕吐、头痛、腹部不适、皮疹等不良反应发生情况。

1.6 统计学方法采用SPSS 19.0软件对数据进行统计学分析与处理。计量资料以xˉ±s表示，两组间比较采用t检验，计数资料比较采用χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 外周血Th17细胞和Treg细胞亚群水平治疗后，两组外周血Th17 细胞和Th17/Treg 细胞比值水平均较治疗前明显降低，而Treg 细胞水平显著增加（P＜0.05）。其中观察组治疗后外周血Th17细胞和Th17/Treg及Treg细胞水平改善均优于对照组（P＜0.05）。见表1。

表1 两组治疗前后外周血Th17和Treg细胞亚群水平比较（xˉ±s）

2.2 外周血Th17/Treg 细胞因子水平治疗后，两组外周血IL-6 和IL-17 显著低于治疗前，而TGF-β高于治疗前（P＜0.05）。其中，观察组治疗后IL-6 和IL-17 及TGF-β改善程度均优于对照组（P＜0.05）。见表2。

表2 两组治疗前后外周血Th17/Treg细胞因子水平比较（xˉ±s） ng/L

2.3 临床疗效观察组显效40例，有效28例，无效7例，总有效率90.67%（68/75）；对照组显效35例，有效25 例，无效15 例，总有效率80.00%（60/75）。两组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。

2.4 心功能指标与治疗前比较，两组治疗后E/A 和LVEF 值明显升高（P＜0.05），而LVEDD 值明显降低（P＜0.05）；与对照组治疗后比较，观察组LVEDD、LVEF水平改善均优于对照组（P＜0.05），而E/A值比较差异无统计学意义（P＞0.05）。见表3。

表3 两组治疗前后心功能指标比较（xˉ±s）

2.5 不良反应治疗期间，对照组出现1 例不良反应，表现为恶心呕吐；观察组出现2 例不良反应，其中头痛1 例、皮疹1 例。两组不良反应发生情况比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。

3 讨论

AMI 的发生机制与冠状动脉粥样硬化斑块的形成密切相关。既往研究[6］表明，机体炎症免疫反应参与了动脉粥样硬化的发生及不稳定斑块的破裂，是导致AMI发生的重要启动因子。AMI属中医“胸痹”范畴，病机主要为心气不足，心阳不振，不能滋养五脏之阴，引起心脉瘀阻，心气衰微，治疗时应强调养阴生津，活血化瘀。相关研究[4，7］显示，参芎葡萄糖可显著提高心肌梗死及脑梗死患者临床疗效，但机制仍然不清楚。

研究[8］显示，机体免疫功能紊乱与炎症反应的激活及放大密切相关。Th17 细胞是近年来发现的一类新型辅助型CD4+T淋巴细胞亚群，它通过特异性分泌IL-17，参与了众多炎症及自身免疫性疾病的发生、发展过程[9］。Treg 细胞也是CD4+T细胞亚群之一，在调节机体免疫功能，抑制过度免疫反应引起的组织细胞损伤的过程中，发挥重要作用[10］。近年来，相关研究[11］显示，Treg 细胞与Th17细胞在功能上相互拮抗。在生理状态下，两者维持平衡状态，保持机体免疫功能稳定，而一旦机体遭遇应激原刺激，可导致免疫功能紊乱，引起Th17细胞与Treg细胞亚群的平衡失调，进而促进炎症反应的级联放大[12］。研究[13］证实，在动脉粥样硬化患者中，Th17 细胞水平显著升高，而Treg细胞亚群显著降低，通过调节Th17和Treg细胞亚群平衡，在维持动脉粥样硬化斑块稳定过程中，发挥重要的作用。参芎葡萄糖由丹参素和川芎嗪组成，具有显著降低机体氧化应激、抑制血小板聚集、降低血浆黏度及改善微循环障碍等作用[14］。特别是对于脑梗死及心肌梗死患者，参芎葡萄糖可显著改善微循环，促进脑及心肌细胞能量代谢，同时起到降低细胞凋亡和保护脑及心脏功能的作用[15-16］。本研究结果显示，参芎葡萄糖注射液可显著降低外周血Th17细胞水平，升高Treg细胞亚群水平，从而改善机体免疫功能，抑制下游炎性通路的级联放大。参芎葡萄糖注射液可降低NSTEMI患者炎症反应，其机制可能如下：1）抑制Th17 细胞活化，可显著降低IL-17 水平，抑制下游炎性通路的激活。2）促进Treg 细胞亚群升高，可引起TGF-β 水平增加，进而显著抑制机体NF-κB 活化，降低心肌细胞的损伤与凋亡。AMI 引起心肌细胞缺血坏死，可最终导致患者心功能进行性降低，主要表现为E/A 和LVEF 值降低，而LVEDD 值升高。给予NSTEMI 患者参芎葡萄糖注射液治疗后，评价其心功能，结果显示：1）参芎葡萄糖对NSTEMI 患者心功能的改善与恢复，具有明显促进作用；2）参芎葡萄糖可显著改善NSTEMI 患者临床疗效，但不增加不良反应的发生率。说明参芎葡萄糖在提高临床疗效的同时，安全性较好。

综上所述，参芎葡萄糖可显著改善NSTEMI 患者机体免疫功能，调节外周血Th17和Treg细胞亚群的水平，从而降低机体炎性通路的激活与放大，减轻心肌细胞损伤，提高临床治疗效果。