血浆S1P和HDL-C表达水平与帕金森病患者临床症状的相关性研究

闫 欣，商素亮，李 娜，武 娇

（1.保定市第二中心医院神经内科，河北保定 072750; 2.河北省第八人民医院老年科，石家庄 050000）

帕金森病（Parkinson’s disease，PD）是老年人常见神经系统性疾病，发病率呈逐年上升趋势，调查显示85岁以上老年人群发病率达5%左右，临床主要表现为典型运动症状如静止性震颤、肌强直、运动迟缓、姿势反射障碍等及非运动症状如认知障碍、焦虑、抑郁等，而非运动症状可能出现在运动症状之前加速PD的发生或出现在运动症状之后加重PD患者残疾，给家庭、社会带来巨大的精神负担[1-2]。寻找评估PD严重程度的生物学指标作为辅助诊断手段对提高患者预后具有现实意义。氧化应激损伤导致多巴胺水平降低是PD的主要发病机制，多巴胺神经元变性坏死，导致多巴胺递质生成障碍，从而使黑质纹状体通路中多巴胺与乙酰胆碱能神经递质平衡失调，产生运动迟缓、肌强直[3]。鞘氨醇1磷酸（sphingosine1phosphate，S1P）是鞘磷脂代谢过程中重要信号分子，主要以脂蛋白形式存在，在内皮细胞、血管平滑肌细胞及心肌细胞均有所表达。研究证实，其具有血管内皮保护、心肌缺血/再灌注损伤保护等作用，是动脉粥样硬化性心脏病的保护因素，与氧化应激损伤关系密切[4]。高密度脂蛋白胆固醇（high density lipoprotein cholesterol，HDL-C）是由脂质及其所携带的调节因子组成的复杂脂蛋白，主要在肝脏合成，负责摄取胆固醇、三酰甘油等，具有抗氧化、抗炎等作用[5]。王守章等[6]研究发现，PD患者外周血HDL-C表达水平明显低于健康对照组，且提示HDL-C与PD氧化应激损伤有关，是PD的保护因素。然而有关探讨S1P，HDL-C在PD中的表达水平与临床症状的关系研究鲜有报道，因此本研究分析血浆S1P，HDL-C表达与PD临床症状的关系，以期为寻找评估PD患者病情严重程度的生物学指标，及时有效干预、治疗以提高患者生活质量提供参考。

1 材料与方法

1.1 研究对象 选择2018年7月～2021年3月于保定市第二中心医院确诊的PD患者100例为研究对象（PD组），男性52例，女性48例，年龄62～85（75.03±6.37）岁，根据HoehnYahr分期[7]标准评定患者严重程度，将患者分为轻度组（1～2期）35例、中度组（2.5～3期）36例、重度组（4～5期）29例。纳入标准：①患者均符合《中国帕金森病的诊断标准(2016版)》的相关内容[8]；②首发PD患者；③一般资料完整者。排除标准：①特发性震颤、脑血管病、脑炎、中毒、脑外伤等导致的继发性PD综合征；②多系统萎缩、进行性核上性麻痹等PD叠加综合征；③并发心脏、肝脏、肾脏功能不全者；④恶性肿瘤患者。另选取同期健康体检者105例为对照组，男性53例，女性52例，年龄63～85岁，平均年龄74.97±6.18岁。PD组与对照组性别、年龄差异均无统计学意义（均P＞0.05）。本研究获得医院伦理委员会批准后实施，受试者家属或者本人均签署知情同意书。

1.2 仪器与试剂 酶标仪（赛默飞世尔科技有限公司，型号：Multiskan FC）；全自动生化分析仪（美国贝克曼库尔特生物科技有限公司，型号：AU5800）；血浆S1P酶联免疫吸附（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）试剂盒（北京百奥莱博科技有限公司，批号：ARB11575）；血浆HDL-C生化检测试剂盒（浙江伊利康生物技术有限公司，批号：L7003）。

1.3 方法

1.3.1 标本采集：PD患者于确诊后24 h内、体检者于体检当日空腹情况下抽取肘静脉血5 ml于肝素抗凝管中，在20℃条件下离心15 min（3 000 r/min）分离得到血浆，-80℃保存于冰箱待测。

1.3.2 血浆S1P，HDL-C表达水平检测：从-80℃冰箱中取出冻存血浆样本，解冻，采用ELISA法测定受试者血浆S1P表达水平；采用全自动生化分析仪测定血浆HDL-C表达水平，所有操作均严格按照试剂盒说明书进行。

1.3.3 临床症状评分：运动症状：采用统一帕金森病评定量表第Ⅲ部分（unified Parkinson’s disease rating scale part III，UPDRS Ⅲ）评分评价PD患者运动功能，由UPDRS Ⅲ评分计算震颤、强直、运动迟缓、步态或姿势异常、轴性症状计算言语、步态、姿势等得分，各项评分相加得UPDRS Ⅲ总评分，总评分越高症状越严重[9]。

非运动症状：①认知功能：采用简易精神状态检查（minimental state examination，MMSE）量表[10]评价，MMSE评分标准：定向感10分、注意力及计算力5分、记忆力3分、回忆力3分、语言及视空间能力9分，总分30分，分数越高，认知功能越好。②焦虑：采用汉密尔顿焦虑量表（Hamilton anxiety scale，HAMA）14项版本[11]进行评价，0～14分为非焦虑；＞14分为焦虑。③抑郁：采用汉密尔顿抑郁量表（Hamilton depression scale，HAMD）24项版本[12]进行评价，＜8分为非抑郁；≥8分为抑郁。

1.4 统计学分析 对本研究数据采用统计学软件SPSS 23.0进行分析，符合正态分布计量资料采用均数±标准差（±s）表示，两组间比较采用独立样本t检验，多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用SNKq检验；计数资料以例数（n）表示，采用卡方检验；采用Pearson法分析血浆S1P，HDL-C表达水平与患者临床症状评分的相关性；Logistic回归分析影响重度PD的危险因素；P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 PD组与对照组血浆S1P，HDL-C表达水平比较 与对照组比较，PD组患者血浆S1P（298.77±142.22 pmol/ml vs 512.66±201.31 pmol/ml），HDL-C（0.96±0.24 mmol/L vs 1.87±0.33mmol/L）表达水平均显著降低，差异有统计学意义（t=8.744, 20.327，均P＜0.05）。

2.2 不同严重程度PD患者血浆S1P，HDL-C表达水平比较 见表1。与轻度组患者比较，中度、重度组患者血浆S1P，HDL-C表达水平显著降低（q=4.448, 7.641, 7.088, 21.025, 均P＜0.05）；与中度组患者比较，重度组患者血浆S1P，HDL-C表达水平显著降低（q=3.458, 14.416, 均P＜0.05）。

表1 不同严重程度PD患者血浆S1P，HDL-C表达水平比较（±s）

表1 不同严重程度PD患者血浆S1P，HDL-C表达水平比较（±s）

项目 轻度组（n=35） 中度组（n=36） 重度组（n=29） F值 P值S1P（pmol/ml） 395.33±156.66 290.73±142.60 210.25±113.07 14.090 0.000 HDL-C（mmol/L） 1.36±0.29 1.07±0.25 0.45±0.16 113.414 0.000

2.3 不同严重程度PD患者运动症状、非运动症状评分比较 见表2。与轻度组患者比较，中度、重度组患者UPDRS Ⅲ评分、HAMD评分、HAMA评分显著升高（q=5.234, 9.120, 9.296, 15.487,11.405, 23.955, 均P＜0.05），MMSE评分显著降低（q=11.766, 18.214, 均P＜0.05）；与中度组患者比较，重度组患者UPDRS Ⅲ评分、HAMD评分、HAMA评分显著升高（q=4.199, 6.742, 13.257, 均P＜0.05），MMSE评分显著降低（q=7.136，P＜0.05）。

表2 不同严重程度PD患者运动症状、非运动症状评分比较（±s）

表2 不同严重程度PD患者运动症状、非运动症状评分比较（±s）

项目 轻度组（n=35） 中度组（n=36） 重度组（n=29） F值 P值UPDRS Ⅲ评分 26.89±8.63 43.11±16.66 56.79±27.27 21.036 0.000 HAMD评分 12.35±3.96 19.63±4.87 25.18±5.17 61.097 0.000 HAMA评分 8.86±2.67 16.93±3.89 26.79±5.83 143.461 0.000 MMSE评分 23.67±4.37 16.58±3.67 12.06±2.15 85.925 0.000

2.4 PD患者血浆S1P，HDL-C表达水平与运动症状评分、非运动症状评分相关性分析 PD患者血浆S1P和HDL-C表达水平与UPDRS Ⅲ评分、HAMD评分、HAMA评分均呈负相关（rS1P=-0.480，-0.577，-0.603，P=0.002, 0.006, 0.003；rHDL-C=-0.500，-0.496，-0.605，P=0.027, 0.008,0.030），与MMSE评分呈正相关（rS1P=0.587,P=0.008；rHDL-C=0.518，P=0.013）。PD组 患 者血浆S1P表达水平与HDL-C表达水平呈正相关（r=0.633，P=0.007）。

2.5 影响重度PD的Logistic回归分析 见表3，表4。以PD是否重度为因变量（否=0，是=1），以UPDRS Ⅲ评分、HAMD评分、HAMA评分、MMSE评分、S1P，HDL-C为自变量（均为实测值）进行单因素及多因素Logistic回归分析，结果显示血浆S1P，HDL-C表达水平降低是影响重度PD的独立危险因素（P＜0.05）。

表3 影响重度PD的单因素Logistic回归分析

表4 影响重度PD的多因素Logistic回归分析

3 讨论

帕金森病（PD）是第二大中枢神经退行性疾病，常见于中老年人群，具有高发病率、高致残率及慢性病程特点[13]。多数学者认为氧化应激及氧自由基形成导致多巴胺能神经元功能紊乱进一步造成患者出现认知功能异常及运动障碍是PD主要发病机制[14]。

鞘氨醇1磷酸（S1P）是调节细胞内外多种生物学功能的重要信号分子之一，是鞘磷脂代谢产生的一种生物活性脂类，参与细胞的多种基本功能，如细胞增殖、迁移、存活及细胞间信号转导等，能够拮抗氧化应激，保护线粒体功能[15-16]。ESAKI等[17]研究报道，鞘磷脂在少突胶质细胞分化和髓鞘等神经系统发育过程中发挥关键作用，精神分裂症患者的胼胝体中S1P表达水平较对照组低。DIRR等[18]研究发现，ATP13A2基因编码的ATP13A2蛋白功能障碍造成鞘磷脂代谢异常，使鞘磷脂在脑部积累，进一步促使脑部多巴胺神经递质水平降低，从而造成小鼠行为异常及运动障碍，因此推测SIP与PD患者行为异常有关。本研究结果显示，PD组患者血浆S1P表达水平显著低于对照组，与ESAKI等[17]研究结果具有类似性，且随病情严重程度的增加水平逐渐降低，验证了推测的合理性，说明血浆S1P异常低表达可能与PD发生及病情进展有关，原因可能是S1P表达水平降低，氧化应激水平增加，使多巴胺神经元死亡增多。胆固醇是一种具有调节激素分泌作用的前体物质，在大脑组织中广泛存在，其水平变化可影响突触和神经细胞膜等中枢神经系统活动，在PD的发生、发展中扮演着重要角色。HDL-C是血液中密度最高、颗粒最小的一种脂蛋白及血脂代谢的基础物质，可逆向转运胆固醇，具有抗氧化、抗炎、抗血栓等作用，与氧化应激关系密切，研究证实其为PD患者保护因素[19]。YANG等[20]研究发现，较低的血浆HDL-C表达水平是评估PD发生及病情严重程度的重要标志。本研究结果显示，PD组患者血浆HDL-C表达水平显著低于对照组，且随病情严重程度的增加水平逐渐降低，与YANG等[20]研究结果趋势一致，提示血浆HDL-C异常低表达可能与PD发生及病情进展关系密切，原因可能是HDL-C异常低表达，抗氧化作用减弱，对氧化应激反应拮抗作用减弱，使多巴胺神经元死亡增多，多巴胺水平降低。

PD临床表现主要是运动神经功能障碍，但其也会出现一系列非运动症状，包括神经精神症状，如情感障碍、认知功能障碍、精神症状、睡眠障碍、自主神经功能障碍等[21]。研究发现，氧化应激反应能够增加海马神经元损伤，与认知损害、抑郁、焦虑密切相关[22]。UPDRS量表是临床常用的评价PD病情严重程度的评分量表，主要以患者症状及体征为依据，评分越高病情越严重；HAMD评分是临床常用的评定抑郁状态的方式，评分越高抑郁状态越严重；HAMA评分是焦虑状态评定方式，评分越高焦虑状态越严重；MMSE评分是简易精神量表评分，能全面、准确、迅速反映被试智力状态及认知功能缺损程度，评分越高患者精神状态越好且认知障碍越小[23]。本研究结果显示，轻度、中度、重度PD患者UPDRS Ⅲ评分、HAMD评分、HAMA评分依次升高，MMSE评分依次降低，说明PD患者不是单纯运动障碍性疾病，其也存在认知功能、情感障碍等，且与病情严重程度有关。刘茹等[24]研究发现，与PD认知功能无障碍组患者比较，PD认知功能障碍组患者血清HDL-C表达水平显著降低，且与认知功能评定工具蒙特利尔认知评估量表（MoCA）评分呈正相关，提示血脂成分HDL-C异常低表达可能加重PD患者认知功能损害。本研究结果显示，PD组患者血浆S1P，HDL-C表达水平与UPDRS Ⅲ评分、HAMD评分、HAMA评分、MMSE评分有关，且二者表达水平降低是影响重度PD的独立危险因素，提示检测S1P，HDL-C可能有利于评估PD的严重程度及患者认知功能障碍、焦虑、抑郁程度。原因可能与S1P是HDL-C中的磷脂成分，HDL-C异常低表达，使S1P表达降低，进一步导致抗氧化作用减弱，氧化应激反应加重有关，其中具体作用机制有待进一步深入研究。

综上所述，血浆S1P，HDL-C异常低表达可能与PD患者临床症状有关，临床可以通过监测血浆S1P，HDL-C表达水平，评估PD的发生、严重程度及临床症状的变化，为寻找新的辅助诊断手段对提高患者生活质量提供一定参考。然而本研究并没有对S1P与HDL-C在PD患者中的具体作用机制进行研究，后期应进行深入阐述。