慢性HBV感染患者血清CP，HNF 1α与肝组织病理分级及分期的相关性研究

泽汪格玛，杨建蓉，欧仕颖，余长芳（甘孜藏族自治州人民医院 ，四川甘孜 626000）

乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）是嗜肝DNA病毒，全球约有20亿人口曾感染HBV，其中有2.4亿人为慢性HBV感染者[1]。持续性HBV感染对肝脏功能有严重损伤，慢性HBV感染也是导致肝硬化、肝细胞癌的主要因素[2-3]。目前，慢性乙型肝炎防治指南推荐丙氨酸氨基转移酶（alanine transferase，ALT）＞2倍正常值上限的慢性乙肝患者进行肝脏活组织检查，以指导抗病毒治疗[4]。但肝脏活组织检查存在一定的局限性[5]，因此，急需无创性检测指标用于评估患者是否需要抗病毒治疗。铜蓝蛋白（ceruloplasmin，CP）、肝细胞核因子1α（hepatic nuclear factor 1α，HNF 1α）均可反映肝功能状态，相关报道显示，血清CP，HNF 1α可用于各种肝病的诊断与鉴别[6-7]。但在慢性HBV感染患者肝脏炎症及纤维化进展过程中，上述指标是否可准确反映慢性HBV感染患者肝脏炎症分级和纤维化分期尚不明确。有鉴于此，本研究对血清CP，HNF 1α与慢性HBV感染患者肝组织病理分级及分期的关系进行研究，旨在为慢性HBV感染的临床评估与治疗提供参考。

1 材料与方法

1.1 研究对象 选取2018年2月～2020年12月于甘孜藏族自治州人民医院就诊并接受肝脏活组织检查的慢性HBV感染者158例为感染组，年龄26～68(43.26±10.57)岁；男性105例，女性53例。纳入标准：①慢性HBV感染符合2015版《慢性乙型肝炎防治指南》[8]中的相关定义；②年龄18～70周岁；③接受肝脏活组织检查；④自愿参与本研究，并签署知情同意书。排除标准：①近1个月内服用免疫抑制剂或其他影响本研究结果药物，如可的松、强的松等；②存在肝脏活组织检查禁忌症；③并发其他类型病毒性肝炎或其他肝脏疾病；④伴有严重心、肺、肾等功能障碍；⑤并发恶性肿瘤、全身性炎症疾病或自身免疫性疾病；⑥处于妊娠期、哺乳期妇女。并选取同期医院内体检正常者50例为对照组，年龄24～70岁，平均年龄45.53±11.82岁；男性30例，女性20例。两组受试者年龄、性别比例资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。本研究已通过医院伦理委员会审批。

1.2 仪器与试剂 肝功能指标的检测采用7600型全自动生化分析仪及配套试剂（日本日立）；CP，HNF 1α的检测采用酶联免疫吸附法试剂盒（美国Bio Rad）。

1.3 方法 清晨采集受试者空腹静脉血5 ml，室温下静置20 min，3 000 r/min离心15 min分离上层血清，检测ALT，AST，CP和HNF 1α含量。感染组患者在腹部B超引导下进行肝穿刺活检，穿刺针刺入深度至少2cm，获取肝组织立即送病理科，采用HE染色，通过Metavir评分[9]对肝组织炎症和纤维化程度进行评级，其中肝组织炎症分为4级：无炎症活动为G0级，轻度炎症活动为G1级，中度炎症活动为G2级，重度炎症活动为G3级；肝纤维化分为5期：无病变为F0期，汇管区纤维性扩大但无纤维间隔形成为F1期，汇管区纤维性扩大且少数纤维间隔形成为F2期，多数纤维化间隔形成但无硬化结节为F3期，肝硬化为F4期。肝组织炎症活动分级＞G2级、肝纤维化分期＞F2期提示炎症显著或纤维化程度显著。

1.4 统计学分析 应用统计学软件SPSS19.0分析处理数据，正态计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用单因素方差分析或t检验，偏态数据进行正态变换后再进行比较；计数资料以例数（n）或率（%）表示，采用χ2检验；采用Logistic回归模型分析影响肝组织炎症和纤维化的因素；相关性分析采用Paerson相关系数描述，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组血清CP，HNF 1α，ALT及AST水平的比较 检测感染组和对照组血清CP，HNF1α，ALT及AST水平，结果显示，感染组血清CP（205.63±18.74mg/L），HNF1α（3.25±0.91ng/ml）水平低于对照组（283.59±22.35mg/L, 6.38±0.83ng/ml），ALT（149.67±23.91U/L），AST（109.84±19.23U/L）水平高于对照组（25.13±5.62U/L, 19.93±4.37U/L），差异均有统计学意义（t=24.440, 21.634; 36.457, 32.743, 均P＜0.001）。

2.2 不同肝组织炎症分级的慢性HBV感染患者血清CP，HNF 1α，ALT及AST水平比较 根据Metavir评分对肝组织炎症进行评估，＜G2级121例（G0级19例，G1级102例），≥G2级37例（G2级23例，G3级14例）。比较＜G2级和≥G2级慢性HBV感染患者血清CP，HNF1α，ALT及AST水平，结果显示，＜G2级患者血清CP（211.37±20.54mg/L），HNF1α（3.42±1.05ng/ml）水平高于≥G2级 者（186.96±15.32mg/L,2.69±0.83ng/ml）；ALT（134.56±17.68U/L），AST（92.53±17.93U/L）水平低于≥G2级 者（199.08±22.34U/L, 166.45±20.58U/L），差异均有统计学意义（t=6.704, 3.872; 18.212, 21.183, 均P＜0.001）。

2.3 不同肝纤维化分期的慢性HBV感染患者血清CP，HNF 1α，ALT及AST水平比较 根据Metavir评分对肝纤维化程度进行评估，＜F2期122例（F0期55例，F1期67例），≥F2期36例（F2期25例，F3期7例，F4期4例）。比较＜F2期和≥F2期慢性HBV感染患者血清CP，HNF 1α，ALT及AST水平，结果显示，＜F2期患者CP（215.69±21.37mg/L），HNF1α（3.58±1.12ng/ml）水平高于≥F2期 者（171.54±16.64mg/L,2.13±0.55ng/ml）；ALT（130.25±16.52U/L），AST（84.53±18.23U/L）水平低于≥F2期 者（215.48±21.69U/L, 195.61±21.37U/L），差异均有统计学意义（t=11.408, 7.431; 25.229, 30.857, 均P＜0.001）。

2.4 肝组织炎症或纤维化显著的危险因素分析 见表1。采用Logistic回归模型分析影响肝组织炎症和纤维化的因素，结果显示，血清CP，HNF 1α升高分别是肝组织炎症或纤维化显著的独立保护因素（P＜0.05）。

表1 肝组织炎症或纤维化显著的危险因素分析

2.5 慢性HBV感染患者血清CP，HNF 1α，ALT及AST水平相关性分析 采用Paerson相关系数描述慢性HBV感染患者血清CP，HNF 1α，ALT及AST水平相关性，结果显示，CP，HNF 1α与ALT，AST呈负相关性（r=-0.452，-0.429；-0.521，-0.483，均P＜0.001）。

3 讨论

临床数据显示，HBV感染患者中大多为慢性感染状态，表现为血清乙肝病毒表面抗原（HBsAg）和/或HBV DNA阳性持续时间≥6个月，这种持续感染可引起肝组织出现纤维化，甚至肝硬化[10]。目前，临床常用肝组织活检评价肝脏病变的严重程度，推荐Metavir评分对组织炎症与纤维化程度进行分期，但肝组织活检属于有创性检查，结果判读有一定的主观差异[11]。而肝脏瞬时弹性成像技术虽属于无创性检查，但容易受腹腔积液、肥胖等因素的影响[12]。因此，对于无法进行肝组织活检、肝脏瞬时弹性成像技术等检查的患者，亟需其他可客观评估病情严重程度的指标。

血清学检查具有无创、重复性好、价格便宜等特点，是反映肝性病理损伤的理想指标[13]。CP是肝脏合成的糖蛋白，可反映肝脏合成功能，在各种肝病中的临床应用价值受到广泛关注[14]。CORRADINI等[15]纳入328例非酒精性脂肪肝患者，发现CP基因多态性可能与患者高铁蛋白血症和肝铁储量增加有关，携带有这种变异的患者存在更严重的肝纤维化。WANG等[16]通过分析细胞因子表达谱发现，CP可能有助于修复氧化应激，维持肝细胞在无药耐受同种异体原位肝移植模型中的生存。KANG等[17]通过回顾性研究，血清CP水平与HBV感染患者肝纤维化呈负相关，联合CP，血小板和HBsAg可有效预测显著纤维化，晚期纤维化和肝硬化。HNF 1α主要表达于肝脏，可调控肝脏中多个基因表达，参与脂代谢、碳水化合物的合成及代谢等生物过程，对于促进肝细胞的分化成熟，维持肝细胞正常的功能有重要作用[18]。基础研究成果表明，沉默HNF1α可激活炎症信号通路，加重正常干细胞的损伤和肝纤维化程度[19]。邓羊羊等[20]采用免疫组织化学染色法对慢性乙型肝炎患者的肝穿刺组织观察显示，HNF1α的表达强度随着肝脏炎症及纤维化程度的加重而降低，提示HNF 1α可能在肝脏炎症及纤维化过程中其负向调控作用。上述研究表明，CP，HNF1α可用于HBV感染的病情评估。

本研究对血清CP，HNF1α与慢性HBV感染患者病情严重程度进行分析，结果显示，感染组CP，HNF 1α水平低于对照组，进一步表明上述指标与慢性HBV感染密切相关，是判断是否存在疾病的潜在诊断标志。同时，不同肝组织炎症、纤维化程度患者CP，HNF1α水平有显著差异，CP，HNF 1α分别与肝功能酶谱ALT，AST呈负相关，血清CP，HNF1α升高可能是肝组织炎症或纤维化显著的独立保护因素，由此推测，CP，HNF 1α可能参与了慢性HBV感染患者肝组织病理变化过程，可用于评估慢性HBV感染患者病情严重程度。

综上所述，血清CP，HNF 1α水平与慢性HBV感染患者病情严重程度密切相关，可反映肝组织炎症及纤维化进程，有望作为临床反映慢性HBV感染患者肝组织病理变化的敏感指标。但本研究病例样本数较少，仍需要更大样本，进一步阐明CP，HNF 1α在慢性肝损伤、肝纤维化中的生物学特征。