急性主动脉夹层患者血浆miR-30a及D-二聚体水平检测对临床预后判断价值

黄 英，陈 兰，周英艳，肖爱芪

(海口市第三人民医院心血管科，海口 571100)

急性主动脉夹层（acute aortic dissection, AAD）是一种极为严重的心血管急症，其病情凶险、病死率高，若未能及时诊断治疗，AAD发生后48 h内的病死率高达50%[1]。准确地对AAD进行预后判断，并采取有效的治疗措施，对降低患者的病死率具有重大帮助。微小核糖核酸（microRNA，miRNA）是一类单链非编码小分子RNA，参与多种信号通路的调节，在AAD的发生发展中起到重要的作用[2]。有研究发现，miR-30a在AAD中异常表达，参与细胞外基质重塑、氧化应激等重要功能的调节，有望成为治疗AAD的潜在靶点[3]。D-二聚体（Ddimer，D- D）作为反映体内纤溶活性的重要指标，对评估AAD患者的病情及预后具有一定的价值[4]。本研究通过检测AAD患者血浆miR-30a及D-二聚体水平，分析其对AAD预后判断的价值，旨在为AAD的救治提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 研究对象 选取2018年1月～2020年12月海口市第三人民医院收治的AAD患者152例，其中男性114例，女性38例，年龄36～79（54.80±11.24）岁。纳入标准：①经主动脉CT血管成像明确诊断为AAD；②临床病例资料记录完整。排除标准：①并发其他心血管疾病及严重基础病；②不愿意配合本次研究者。152例AAD患者根据住院期间存活情况分为存活组（n=107）和死亡组（n=45）。另选取65例体检正常者作为对照组，其中男性47例，女性18例，年龄35～78（53.70±9.82）岁。各组的性别、年龄及体质指数比较，差异均无统计学意义（均P＞0.05）。本研究与患者签署知情同意书。

1.2 仪器与试剂 7500型荧光定量PCR仪（美国ABI公司）；PCR试剂盒，RNeasy试剂盒，miRNA Easy试剂盒和Trizol试剂盒（博士德生物有限公司）；贝克曼ACL7000全自动凝血分析仪。

1.3 方法

1.3.1 miR-30a检测:采集静脉血3 ml于EDTA抗凝管中，离心分离血浆，在ABI 7500型荧光定量PCR仪上检测miR-30a水平。逆转录反应体系为15μl：5μl RNA模板，3μl U6及miRNA特异性茎环引物，0.15μl 100mmol/L脱氧核糖核苷酸，1.00μl逆转录酶，1.50 μl 10×反转录缓冲液，0.19 μl RNase抑制剂，4.16 μl双蒸水；反应体系为20μl：1μl 引物及探针Mix（20×），10μl TaqMan通用混合物溶液（2×），1.33 μl反向转录脱氧核糖核酸，7.67μl双蒸馏水。采用2-△△Ct法计算miR-30a水平。

1.3.2 D-二聚体检测:采用贝克曼ACL 7000全自动凝血分析仪及配套试剂盒检测D-二聚体水平。

1.4 统计学分析 采用SPSS20.0统计软件，计量资料以均数±标准差（±s）表示，采用校正t检验（t’检验）。计数资料组间比较采用χ2检验。应用受试者工作特征曲线（ROC）分析血浆miR-30a及D-二聚体水平预测AAD死亡的价值。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 AAD组和对照组血浆miR-30a及D-二聚体水平比较 AAD组血浆miR-30a（1.93±0.78）及D-二聚体（6.28±1.72μg/ml）水平均明显高于对照组（0.72±0.25，0.36±0.08μg/ml），差异有统计学意义（t=13.758，16.814，均P＜0.001）。

2.2 死亡组和存活组血浆miR-30a及D-二聚体水平比较 死亡组血浆miR-30a（2.42±1.13）及D-二聚体（8.62±2.24μg/ml）水平均明显高于存活组（1.30±0.56，3.64±1.35μg/ml），差异有统计学意义（t=11.624，14.735，均P＜0.001）。

2.3 血浆miR-30a及D-二聚体水平预测AAD患者死亡的价值 见表1和图1。血浆miR-30a及D-二聚体水平预测AAD患者死亡的最佳截断值分别为1.97，6.36 μg/ml。两项联合预测AAD患者死亡的曲线下面积（0.936，95%CI：0.875～0.992）明显高于单项检测miR-30a（0.852，95%CI：0.793～0.913）及D-二聚体（0.824，95%CI：0.767～0.885），差异均有统计学意义（均P＜0.05），其敏感度和特异度分别为94.0%和88.6%。

图1 血浆miR-30a及D-二聚体水平预测AAD患者死亡的ROC曲线

表1 血浆miR-30a及D-二聚体水平预测AAD患者死亡的价值

3 讨论

急性主动脉夹层（AAD）是一种严重的致命性疾病，已成为严重危及人类生命健康的重要疾病之一。miRNA在不同生理或病理状态下呈现差异性表达，具有组织器官特异性，可作为AAD诊断或预后预测的潜在标志物[5-6]。LI等[7]研究发现，miRNA在主动脉夹层组织中表达下调，且与AAD患者的生存有关，miRNA的过表达促进血管平滑肌细胞增殖、抑制细胞凋亡，从而抑制AAD的发生发展。XUE等[8]研究认为，miRNA在主动脉夹层中的表达水平较对照组明显升高，miRNA的过度表达通过靶向SMAD4诱导血管平滑肌细胞增殖和迁移，可能参与主动脉夹层的发生发展。D-二聚体是反映机体内纤溶亢进、高凝状态的可靠标志物，在血栓性疾病的诊断中发挥了重要作用[9]。LI等[10]研究表明，主动脉夹层患者D-二聚体显著升高，不同病期主动脉夹层的二聚体存在显著差异，并可反映主动脉夹层的稳定情况，在主动脉夹层的早期筛查中具有较好的价值。

本研究显示，AAD组血浆miR-30a及D-二聚体水平均明显高于对照组，且死亡组血浆miR-30a及D-二聚体水平均明显高于存活组，提示血浆miR-30a及D-二聚体水平升高与AAD患者病情的严重程度有关，可能参与AAD的发生发展，有望作为判断AAD患者病情严重程度的生物学指标。分析其原因，一方面可能是miR-30a通过调控多个信号通路，如细胞增殖、迁移及血管炎症等，参与了AAD的发病机制；另一方面死亡的AAD患者主动脉中层撕裂程度较严重，激活凝血系统及后续的纤溶过程比较活跃，使血浆中D-二聚体水平升高。WANG等[11]研究发现，miRNA的过度表达显著降低了多囊蛋白-1和转化生长因子-β1下游靶蛋白的表达，对AAD的早期诊断具有较高特异度和敏感度，miRNA可作为AAD的诊断标志物，并可能参与AAD的发病机制。潘小高等[12]研究认为，D-二聚体水平升高是AAD患者院内死亡的独立危险因素(OR=1.04, 95%CI:1.00～1.08,P＜0.05)，是预测AAD预后的可靠指标。

本研究进一步应用ROC曲线分析，结果显示miR-30a及D-二聚体两项联合预测AAD死亡的AUC最大，其敏感度和特异度较好，说明miR-30a及D-二聚体可能是AAD预后判断的可靠指标，两项联合检测对AAD预后判断的价值较高。DONG等[13]研究显示，AAD患者miRNA表达水平明显高于对照组，与AAD严重程度相关，miRNA在诊断AAD中具有良好的临床应用价值。湛镇伊等[14]研究发现，miRNA的差异表达在AAD的发生及发展过程中起着重要作用，可能是AAD的潜在诊断标志物，同时也为了解AAD的发病机制及治疗提供新的指导。另有研究表明，AAD患者的D-二聚体水平升高，检测D-二聚体水平是排除AAD的良好预测指标，对AAD鉴别诊断具有重要的意义[15]。

综上所述，AAD患者血浆miR-30a及D-二聚体水平明显升高，其水平升高与AAD患者的病情严重程度及预后相关，两项联合检测弥补了单项检测的不足，对AAD预后判断具有较好价值，同时也为AAD的早期治疗提供了新的思路。但本研究仍存在一些不足，如病例来源较单一，缺乏多中心的研究结果，未来仍需更进一步深入研究。