甲状腺微小乳头状癌血浆和组织circRNA-102002的表达及其临床价值

符国宏，王连臣，陈 旭，郑扬慈（三亚中心医院/海南省第三人民医院普外科，海南三亚572000）

甲状腺微小乳头状癌（papillary thyroid microcarcinoma，PTMC）是一种常见的低度恶性肿瘤，在全球范围内发病呈年轻化趋势且速度在逐年递增，部分PTMC患者出现转移、复发甚至死亡，给患者生命健康带来巨大的冲击[1]。PTMC病灶隐匿，对其诊断较为困难，常规超声检查方法已不能满足临床的需求。近年来研究认为，环状核糖核酸（circRNA）作为一种新出现的具有相对稳定结构的非编码RNA，参与肿瘤细胞的增殖、侵袭、迁移和凋亡等过程，circRNA可能为PTMC的诊断和治疗提供新思路[2-3]。有研究发现，circRNA-102002在PTMC患者中存在异常表达，参与PTMC的发生发展，可能为PTMC的诊疗提供重要的帮助[4]。本研究通过检测PTMC 患者circRNA-102002的表达情况，分析circRNA-102002表达对PTMC诊断及预测颈部淋巴结转移的价值，以期为PTMC的诊疗提供帮助。

1 材料与方法

1.1 研究对象 选取2018年1月～2020年12月三亚中心医院/海南省第三人民医院收治的PTMC患者97例，其中男性25例，女性72例，年龄26～68（47.15±11.32）岁。纳入标准：①PTMC经病理组织检查确诊，均行甲状腺切除术；②年龄≥18岁，首次确诊PTMC。排除标准：①术前已接受放疗、化疗或其他抗肿瘤治疗者；②有颈部手术，头颈部放射史，并发其他恶性肿瘤者。根据97例PTMC患者淋巴结转移情况分为颈部淋巴结转移56例和颈部无淋巴结转移41例。另招募45例健康体检正常者作为对照组，其中男性13例，女性32例，年龄27～64（45.80±10.16）岁。

1.2 仪器和试剂 ABI 7500型荧光定量PCR仪（ABI公司）；PCR试剂盒，逆转录试剂盒和TRIzol试剂盒（Qiagen公司），医用离心机（Eppendorf公司产品），紫外分光光度仪（上海光学仪器公司）。

1.3 方法 采集PTMC患者术中癌组织及相应癌旁正常组织，进行实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）。PCR总反应体系为20μl：1μl引物及探针Mix，10μlTaqMan通用混合物溶液，1.33μl反转录脱氧核糖核酸，7.67μl双蒸水。以油醛3-磷酸脱氢酶（GAPADH）为内参基因，采用2-△△Ct法计算circRNA-102002水平。另在术前采集所有研究对象的空腹静脉血3 ml于EDTA抗凝管中，离心分离血浆，检测血浆circRNA-102002水平。

1.4 统计学分析 采用SPSS22.0统计软件分析，符合正态分布的计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用t检验。应用受试者工作特征（ROC）曲线分析circRNA-102002对 PTMC诊断及预测淋巴结转移的价值。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 血浆和组织circRNA-102002表达水平情况PTMC癌组织circRNA-102002表达水平为2.42±1.06，明显高于癌旁组织（0.56±0.12），差异有统计学意义（t=17.390，P＜0.001）。PTMC组血浆circRNA-001059表达水平为2.08±0.93，明显高于对照组（0.31±0.08），差异有统计学意义（t=15.427，P＜0.001）。

2.2 PTMC患者淋巴结转移组和无淋巴结转移组circRNA-102002表达水平比较 淋巴结转移组血浆和组织circRNA-102002表达水平（2.95±1.17，3.46±1.51）均明显高于无淋巴结转移组（1.24±0.43，1.35±0.58），差异有统计学意义（t=15.382,17.964，均P＜0.001）。

2.3 circRNA-102002对PTMC的诊断价值 见表1和图1。血浆和组织circRNA-102002诊断PTMC的最佳截断值分别为1.37，1.58，其曲线下面积（AUC）为0.810（95%CI：0.752～0.870）和0.850（95%CI：0.790～0.907），与对照组0.500（95%CI：0.442～0.561）比较差异均有统计学意义（Z=6.107,6.925,均P＜0.001）。

图1 circRNA-102002诊断PTMC的ROC曲线

表1 circRNA-102002对PTMC的诊断价值

2.4 circRNA-102002预测PTMC患者淋巴结转移的价值 见表2和图2。血浆和组织circRNA-102002诊断PTMC患者淋巴结转移的最佳截断值为2.27，2.65，其AUC为0.857（95%CI：0.798～0.920）和0.891（95%CI：0.834～0.955），与无淋巴结转移组0.680（95%CI：0.621～0.743）比较差异均有统计学意义（Z=5.827, 7.164, 均P＜0.001）。

图2 circRNA-102002诊断PTMC患者淋巴结转移的ROC曲线

表2 circRNA-102002预测PTMC患者淋巴结转移的价值

3 讨论

甲状腺微小乳头状瘤（PTMC）是一种生长缓慢的内分泌肿瘤，发病隐匿，大多数患者早期无明显症状，但部分患者确诊时已存在淋巴结转移，这可影响PTMC患者的预后和加大发生死亡的风险[5]。因此，寻找一种方便、有效的肿瘤标志物，对PTMC进行早期诊断和早期发现淋巴结转移，是改善PTMC患者预后的关键所在。circRNA是一种广泛存在于生物体内新兴的内源性非编码RNA，具有稳定性、特异性及保守性等特点，在恶性肿瘤发生发展中起着重要作用，可为恶性肿瘤的诊断、预后判断及靶向治疗提供有效的指导作用[6-7]。QI等[8]研究表明，circRNA-0001666在甲状腺癌中异常高表达，其高表达与患者淋巴结转移高度关联，对甲状腺癌进展有重要的影响，可能是甲状腺癌预后判断及靶向治疗的潜在分子标志物。WANG等[9]研究认为，circRNA-0062389在调节肿瘤进展方面具有显著的作用，可促进肿瘤细胞增殖、侵袭和转移，为甲状腺乳头状癌提供了一种新的生物标记物和治疗靶点。既往的研究指出，circRNA-102002参与PTMC的发生发展，可能为PTMC的诊断及治疗带来很好的帮助。

本研究显示，PTMC癌组织circRNA-102002表达水平明显高于癌旁正常组织，PTMC组血浆circRNA-102002表达水平明显高于对照组，提示circRNA-102002在PTMC患者中存在异常高表达，其可能通过发挥癌基因的作用来参与PTMC发生。GUO等[10]研究发现，与邻近正常组织相比，circRNA在甲状腺癌中表达失调，其参与癌细胞增殖、迁移和侵袭，与甲状腺乳头状癌发病密切相关。本研究中与无淋巴结转移组比较，淋巴结转移组circRNA-102002表达水平明显升高，提示circRNA-102002高表达与PTMC患者的淋巴结转移有关，可能参与患者的恶性进展。GUO等[11]研究指出，与正常组织相比，肿瘤组织中circRNA存在异常表达，circRNA可能参与了肿瘤的发生和发展，可能是甲状腺乳头状癌诊断和进展评价的新型临床标记物。PAN等[12]研究证实，circRNA是肿瘤发生的关键调控因子, 促进癌细胞增殖、迁移和侵袭，抑制细胞凋亡，参与PTMC的发生及进展，对PTMC的诊断及预后判断具有很好的指导意义。

本研究ROC曲线显示，血浆和组织circRNA-102002表达水平诊断PTMC的曲线下面积均大于0.810，而且其预测患者淋巴结转移的AUC均大于0.850，说明无论采集血浆还是组织，circRNA-102002对PTMC诊断及预测淋巴结转移的价值均较好，circRNA-102002可能是PTMC诊断及预测淋巴结转移的有效标志物。由此可见，检测circRNA-102002表达情况对PTMC诊断及预测淋巴结转移有较好的帮助，同时也为患者治疗提供了新的手段。YANG等[13]研究显示，circRNA在PTMC淋巴结转移患者中异常表达，在淋巴结转移中发挥重要作用，可能是诊断PTMC淋巴结转移的可靠标志物。SUN等[14]研究发现，circRNA参与甲状腺癌的发生发展，其高表达与患者总生存期短有关，对甲状腺癌诊断和预后判断均具有很大的潜力。另有研究认为，circRNA参与调控细胞凋亡、细胞迁移和黏附，是一种有前途的甲状腺癌无创性分子标志物，为甲状腺癌治疗提供了一个有希望的治疗机会[15]。

综上所述，血浆和组织circRNA-102002表达水平在PTMC患者中明显升高，circRNA-102002在诊断PTMC及预测淋巴结转移的曲线下面积均较高，其敏感度和特异度均较好。因此，circRNA-102002可作为PTMC诊断及预测淋巴结转移的参考指标，应用于临床有助于早期发现PTMC。