一次性使用体腔热灌注治疗管道组件（BR-TRG-V型）的药物相容性和邻苯二甲酸二（2-乙基）己酯（DEHP）溶出量测定研究

阮强 王进 唐鸿生 关天培 王佳泓 方润娅 黄狄文

1 广州医科大学附属肿瘤医院胃肠外科二区 （广东 广州 510095）

2 广州保瑞医疗技术有限公司 （广东 广州 518055）

内容提要：目的：通过对一次性使用体腔热灌注治疗管道组件（BR-TRG-V型）与不同类型药物的相容和邻苯二甲酸二（2-乙基）己酯（DEHP）溶出试验研究，为BR-TRG-V型管道的临床应用提供安全性依据。方法：试验选取三种化疗药物（紫杉醇、奥沙利铂、氟尿嘧啶），通过模拟临床使用的条件，检测上述药液流经BR-TRG-V型管道后药物含量、pH值、有关物质、不溶性微粒、澄清度和颜色变化以及DEHP溶出情况。结果：三种药物通过BR-TRG-V型管道后，其药物含量、pH值、有关物质、不溶性微粒、澄清度和颜色变化无统计学差异（P＞0.05）。紫杉醇和乙醇溶液作为浸提介质DEHP溶出量分别为（1.83±0.06）μg/mL、（6.10±0.30）μg/mL；奥沙利铂、氟尿嘧啶、盐酸和氢氧化钠溶液未检测出。结论：BR-TRG-V型管道的药物相容性良好，DEHP在紫杉醇和乙醇溶液中有少量溶出，但都在安全范围内，临床应用是安全的。

体腔热灌注治疗是治疗恶性肿瘤的有效手段之一，通过治疗管道组件将含有化疗药物的液体加热后持续循环灌注入患者体腔内，用于治疗肿瘤体腔种植转移和恶性胸腹水[1-3]。体腔热灌注治疗管道组件（BR-TRG-V型）是一次性医疗耗材，是一种经无菌处理的PVC材料，为保证其韧性和延展性，常规加入了增塑剂邻苯二甲酸二（2-乙基）己酯（DEHP）。本研究选取了紫杉醇、奥沙利铂和氟尿嘧啶三种化疗药物进行药物试验，检测三种药物的相容和DEHP溶出情况，为BR-TRG-V型管道的临床应用提供安全性依据。

1.材料与方法

1.1 主要仪器和材料

高效液相色谱仪（HPLC）：戴安U-3000；气相色谱质谱联用仪（GC/MS）：Thermo Trace 1310+ISQ LT；液体密度天平：METTLER TOLEDO XPE205；酸度计（pH计）：梅特勒SG-8；微粒分析仪：GWF-3J；真空干燥箱：德国MMM公司Vacucell 55L；甲醇、乙腈、乙醇、正己烷等均为色谱纯。

紫杉醇标准品（30mg/支，中国食品药品检定研究院，批号：100382-201603）；奥沙利铂标准品（100mg/支，中国食品药品检定研究院，批号：100584-201804）；氟尿嘧啶标准品（100mg/支，中国食品药品检定研究院，批号：100187-201203）；紫杉醇注射液（5mL:30mg，北京双鹭药业股份有限公司，批号：20190301）；奥沙利铂注射液（50mg/瓶，海南锦瑞制药有限公司，批号：190301）；氟尿嘧啶注射液（10mL:0.25g，天津金耀药业有限公司，批号：1806071）；邻苯二甲酸二（2-乙基）己酯（DEHP）标准品（l.0g/支，aladdin公司，批号：J1413093）。试验用一次性使用体腔热灌注治疗管路，型号规格：BR-TRG-V型，批号分别为171101、171102、171103，生产企业：广州保瑞医疗技术有限公司。

1.2 方法

1.2.1 检验液制备

常温配置0.12mg/mL紫杉醇溶液、0.1mg/mL奥沙利铂溶液、1.0mg/mL氟尿嘧啶溶液、0.1 mol/L盐酸溶液、0.1 mol/L氢氧化钠溶液、0.9373～0.9378g/mL乙醇溶液各3000mL。将药液加入一次性使用体腔热灌注治疗循环管路储液袋中，以600mL/min的速度循环，在0min、15min、30min、60min、90min、120min各时间点收集一定量的紫杉醇、奥沙利铂和氟尿嘧啶溶液检测药物含量及pH，循环2h后收集药液检测有关物质、不溶性微粒、澄清度与颜色变化。以紫杉醇、奥沙利铂、氟尿嘧啶、盐酸、氢氧化钠和乙醇溶液作为浸提液，收集流出的所有液体用于检测DEHP溶岀量。

1.2.2 药物相容性检测方法

药物含量检测：紫杉醇溶液色谱柱（ZORBAX SB-C18 4.6mm×150mm 5-Micron），甲醇-水-乙腈（23:41:36）为流动相，检测波长为227nm。奥沙利铂溶液色谱柱（依利特Hypersil ODS25μm ID4.6mm×250mm），磷酸溶液（用0.006%磷酸溶液调节pH至3.0）-乙腈（99:1）为流动相，检测波长为210nm。氟尿嘧啶溶液色谱柱（依利特Hypersil ODS25μm ID4.6mm×250mm），水（用0.05 mol/L磷酸溶液调至pH3.5）-甲醇（95:5）为流动相，检测波长为265nm。取各时间段采集的试样10μL，注入液相色谱仪检测，记录色谱图。按外标法以峰面积计算，检测各个时间点的药物浓度及相对百分含量。

pH检测：循环15min、30min、60min、90min、120min分别收集一定量药液，用酸度计测定其pH，每个时间点选取3份样品，每份样品重复测定2次。

有关物质检测：取20μL流出液，注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的5倍，选取3份样品，每份样品重复测定3次。

不溶性微粒检测：取流出液5mL，按照微粒分析仪检测步骤操作，测定药液中≥10μm和≥25μm微粒数，选取3份样品，每份样品重复测定3次。

澄清度与颜色检测：取适量流出液，按照药典规定方法检测澄清度与颜色，选取3份样品。

1.2.3 DEHP溶出量检测方法

参考DEHP含量检测标准，气相色谱/质谱测定条件如下[4]：色谱柱：HP-5MS石英毛细管柱（30m×0.25mm×0.25μm）；柱温：150°C保持0.5min，以20°C/min的速度升温至280°C，保持7min；进样口温度：280°C；EI离子源温度：230°C；辅助加热温度：280°C；电子能量：70 eV；进样体积：1μL；分流比：5:1；载气：氮气，纯度≥99.99%；流量：1.5mL/min；测定方式：全扫描总离子图（TIC）定性，选择离子检测（SIM）定量[5]。

2.结果

2.1 药物含量检测方法学验证

取紫杉醇、奥沙利铂、氟尿嘧啶标准品各25mg，用流动相溶解并定容制备成标准品贮备液。规定色谱条件下进行检测，以信噪比3:1时的浓度为检出限。紫杉醇的线性方程为y=375.4982x+0.0354（R= 99.9955%）。奥沙利铂的线性方程为y=212.6059x+0.0526（R= 99.9940%）。氟尿嘧啶的线性方程为y=1.0521x+0.1441（R=99.9939%）。HPLC重复进样6次检测精密度（见表1）。制备一定浓度的三种药物溶液，分别加入低、中、高浓度的标准液，HPLC检测加标回收率（见表2）。

表1.精密度试验结果

表2.回收试验结果

2.2 药物试验结果

2.2.1 药物含量

以初始药物含量为100%，紫杉醇溶液在15min、30min、60min、90min、120min各个时间点的药物含量分别为（99.50±0.02）%、（99.41±0.14）%、（99.53±0.27）%、（99.56±0.12）%、（99.48±0.14）%；奥沙利铂溶液在各个时间点的药物含量分别为（99.66±0.19）%、（99.31±0.22）%、（98.97±0.51）%、（98.53±0.66）%、（97.97±0.45）%；氟尿嘧啶溶液在各个时间点的药物含量分别为（100.01±0.05）%、（100.02±0.04）%、（99.98±0.11）%、（99.80±0.08）%、（99.88±0.12）%，见图1a。统计结果显示三种药物经管道循环15min、30min、60min、90min、120min后药物含量与初始药物含量相比无统计学差异（P＞0.05）。

图1.三种化疗药物浓度相对含量及pH值检测结果

2.2.2 pH值

紫杉醇溶液在0min、15min、30min、60min、90min、120min各时间点的pH值分别为3.98±0.01、3.97±0.01、3.98±0.01、3.99±0.02、3.99±0.01、3.99±0.01；奥沙利铂溶液在各个时间点的pH值分别为5.86±0.02、5.85±0.01、5.87±0.01、5.89±0.01、5.90±0.01、5.92±0.01；氟尿嘧啶溶液在各个时间点的pH值分别为8.65±0.01、8.65±0.01、8.65±0.01、8.65±0.01、8.65±0.02、8.64±0.01， 见 图 1b。统计结果显示三种药物经管道循环15min、30min、60min、90min、120min后pH值与初始药物pH值相比无统计学差异（P＞0.05）。

2.2.3 有关物质

色谱图分析显示，三种药液循环2h后最大杂质峰面积与初始药液主峰面积比值分别为0.46±0.04、0.35±0.05、0.46±0.04。按照检测标准色谱图中如有杂质峰，单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的2倍（0.5%），各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的3倍（0.75%），表明药物经管道循环前后三种药物有关物质无统计学差异（P＞0.05）[6]。

2.2.4 不溶性微粒

微粒分析仪检测显示紫杉醇溶液经管道循环2h前后≥10μm微粒数分别为（36.00±1.00）、（37.33±1.15）个/5mL，≥25μm微粒数分别为（6.67±0.58）、（7.33±0.58）个/5mL；奥沙利铂溶液灌注前后≥10μm微粒数分别为（34.67±0.58）、（35.67±1.15）个/5mL，≥25μm微粒数分别为（7.00±0.00）、（7.33±0.58）个/5mL；氟尿嘧啶溶液灌注前后≥10μm微粒数分别为（32.67±0.58）、（32.67±1.53）个/5mL，≥25μm微粒数分别为（6.33±0.58）、（6.67±0.58）个/5mL，见图2。统计结果显示三种药物不容微粒个数在经管道循环前后无统计学差异（P＞0.05）。

图2.三种化疗药物不容微粒检测结果

2.2.5 澄清度和颜色变化

三种药液经管道循环2h后上机检测为无色澄明液体，无可见异物。

2.2.6 DEHP溶出量

在0～24μg/mL的线性范围内，DEHP工作曲线线性方程为：Y=5.983e7x-2.15e7（R2=0.9994），DEHP的检出限为0.01μg/mL。紫杉醇溶液作为浸提介质DEHP溶出量为（1.83±0.06）μg/mL；0.9373～0.9378g/mL乙醇溶液作为浸提介质DEHP溶出量为（6.10±0.30）μg/mL；奥沙利铂、氟尿嘧啶、盐酸和氢氧化钠溶液未检测出。

图3.紫杉醇及乙醇溶液DEHP溶出量峰面积

3.讨论

体腔热灌注治疗是一种有效控制恶性肿瘤体腔转移的方法，早期由于设备和灌注方法差别很大，控温不准确，安全性得不到保证。目前，国内主流所采用的体腔热灌注治疗技术为高精度恒温持续循环灌注法，其管道组件曾获得实用新型专利一项（专利号：ZL201020106213.X）。本研究选用的BR-TRG-V型一次性使用体腔热灌注治疗管道组件是在既往管道组件材质上的改进和升级，其主要成分是无菌处理的PVC材料，DEHP的加入是为了增加管道的柔软性。作为一种脂溶性物质，DEHP增塑剂会部分从PVC材质中迁移出来[7]。同时DEHP具有生殖毒性，需要严格控制DEHP加入量，以控制产品中DEHP的溶出量[8]。为了验证BR-TRG-V型临床应用安全性作者开展了本项研究。

吸附研究结果显示，紫杉醇、奥沙利铂、氟尿嘧啶三种化疗药物经BR-TRG-V型管道循环前后药物含量、pH值、有关物质、不溶性微粒、澄清度和颜色变化无统计学差异。三种药物是临床最常用的体腔热灌注治疗药物，其流经BRTRG-V型管道后药物自身无明显变化，证实BR-TRG-V型管道的药物的相容性良好，临床应用是安全的。迁移研究结果显示，奥沙利铂、氟尿嘧啶、盐酸和氢氧化钠溶液未检测出DEHP溶出，紫杉醇和乙醇溶液DEHP有少量溶出。在强酸和强碱中未溶出，提示BR-TRG-V型管道中加入DEHP是很稳定的，不会因为遇到恶劣环境而发生很大的变化。紫杉醇和乙醇溶液作为脂溶性药物，DEHP有少量溶出符合相似相溶原理，溶出量都在安全范围内，进一步证实BR-TRG-V型临床应用是安全的。

综上所述，BR-TRG-V型体腔热灌注治疗管道组件的药物相容性良好，DEHP在紫杉醇和乙醇溶液中有少量溶出，但都在安全范围内，临床应用是安全的。