庆阳市引种栽培柴胡含量研究进展

贾佳琳 孙花丽 板小琪 熊懿华 张宏伟

摘要：目的：通过高效液相色谱法（HPLC）测定柴胡中柴胡皂苷a、柴胡皂苷d的总含量，分析庆阳不同地域、不同生长年限对柴胡质量的影响。方法：收集庆阳市不同地域不同生长年限的栽培柴胡药材20批次，根据《中国药典》2020年版一部中柴胡方法测定柴胡皂苷a、柴胡皂苷d的含量。结果：庆阳市内不同种植区域，套种品种对柴胡中柴胡皂苷a、柴胡皂苷d总量影响不大，生长年限两年半的柴胡含量明显高于栽培一年半的柴胡。结论：为保证柴胡药材的质量，建议药农把柴胡的栽培年限提高到两年半为宜，同时育种时应避免与其他品种柴胡及野生柴胡发生杂交，引起质量下降。

关键词：柴胡;中药材;高效液相色谱法

【中图分类号】 R282.2 【文献标识码】 A      【文章编号】2107-2306（2022）12--02

ABSTRACT：OBJECTIVE：To determinethe total content of the saponins a and saponins d in Radix Bupleuri by HPLC，and the influence of quality difference and growth years of introduced Radix bupleurum in different areas of Qingyang were analyzed.METHODS：Twenty batches of Introduced Radix bupleurum with different growth years were collected from different areas of Qingyang，and the content of saponins a and saponins d were determined by Radix bupleurum method in Chinese Pharmacopoeia（2020 edition）.RESULTS：In Qingyang，different planting areas and interplanting varieties had little effect on the total content of Saponin a and saponin d.The content of Radix bupleurum grown for two and a half years was significantly higher than that of Radix bupleurum grown for one and a half years.CONCLUSION：In order to ensure the quality of Radix Bupleuri，it is suggested that the growth years of Radix Bupleuri should be increased to two and a half years.At the same time，the quality of Radix Bupleuri taxocline should be avoided when breeding.

《中國药典》2020年版收载柴胡为伞形科植物柴胡（Bupleurum chinense DC.北柴胡）、狭叶柴胡（Bupleurum scorzonerifolium Willd.南柴胡）的干燥根，性微寒，味苦，具有疏散退热，疏肝解郁，升举阳气的作用。[1]柴胡始载于《神农本草经》，在我国已有两千多年的药用历史。各地供以药用的除南、北柴胡外还有同属20余个品种。[2]根据研究报道，柴胡含有多种化学成分，包含皂苷、挥发油、植物甾醇、木脂素、香豆素和脂肪酸等，其中柴胡皂苷、挥发油为柴胡的主要活性成分，也是目前评价柴胡质量的主要指标成分。[3]

历代记载柴胡的主要产区为陕西、河南，道地产区为陕西省榆林市。后柴胡产区逐渐扩大至华东、华北、江南一带。因柴胡野生资源减少，20世纪80年代初国内已经开展野生变家种试验，主要选用北柴胡B.chinense栽培，河北、甘肃、山西、陕西成为主要种植区，但各地柴胡质量差异较大。[4]甘肃省庆阳市位于甘肃省最东部，陕甘宁三省交汇处，柴胡很早就开始引种。目前庆阳市柴胡品种主要有北柴胡、藏柴胡、红柴胡、黑柴胡，其中北柴胡种植面积最大。2018年以来，柴胡药材价格不断上涨，市场价格约每公斤100-120元。经济效益明显，种植量也日益增大，现庆阳市种植量可达到10万亩，亩产60-80公斤，质量优良。同时，庆阳境内不同产地的柴胡之间，由于品种、产地、种植方式之间的差异，其质量参差不齐。因此，对庆阳市柴胡进行产量及质量评价，分析柴胡、药材质量现状，对指导庆阳市大面积种植，保障人民用药安全具有非常重要的现实意义。

1. 仪器与材料

安捷伦1260高效液相色谱仪，超声波清洗仪（昆山KQ-600KDE）。乙腈（优级纯，德国默克、甲醇（色谱纯，科密欧）、水为超纯水（摩尔纯水机制备）。

柴胡皂苷a（批号：110777-201510;来源：中检院;含量：93.2%）柴胡皂苷d（批号：110778-201912;来源：中检院;含量：96.3%）。柴胡样品20批次，收集于西峰、环县、华池、镇原、宁县、合水、庆城、正宁，均为个子药材，所有柴胡品种均经张宏伟主管中药师会同何登文主任药师鉴定，具体情况见表1。

2. 方法与结果

2.1对照品的制备

分别精密称取柴胡皂苷a对照品0.01031g、0.00859g置20ml容量瓶中加甲醇定容至刻度，摇匀。分别精密称取柴胡皂苷d对照品0.01181g、0.01035g置20ml容量瓶中加甲醇定容至刻度，摇匀。

2.2供试品的制备

取药材粉末（过四号筛）约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入含5%浓氨试液的甲醇溶液25ml，密塞，30℃水温超声处理（300W，40KHz）30分钟，滤过，用甲醇20ml，分两次洗涤容器及滤渣，洗液与滤液合并，回收溶剂至干。残渣加甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品。

2.3色谱条件

色谱柱：安捷伦C18柱（4.6mm×250mm，5μm）;流动相：乙腈、水，梯度洗脱;流速1.0ml/min;检测波长210nm;柱温35℃。

2.4标准曲线的制备

分别精密量取柴胡皂苷a（0.4804mg/ml）、柴胡皂苷d（0.5687mg/ml）对照品溶液2μl、5μl、10μl、15μl、20μl注入高效液相色譜仪，按上述色谱条件测定峰面积。以峰面积为纵坐标，单体皂苷量为横坐标绘制标准曲线，得线性回归方程。柴胡皂苷a的线性回归方程为Y=6417.53X-2.24，R2=0.9997，在0.96～9.61μg范围内线性关系良好;柴胡皂苷d的线性回归方程为Y=6705.34X+0.36，R2=0.9992，在1.14～11.37μg范围内线性关系良好。

3. 方法学考察

3.1精密度实验

分别精密吸取胡皂苷a（0.4804mg/ml）、柴胡皂苷d（0.5687mg/ml）对照品溶液品10μl，重复进样5次，测定峰面积，两种皂苷峰面积RSD均小于2%，结果表明色谱系统精密度良好。

3.2重现性实验

精密称取柴胡样品粉末约0.5g，平行制备5份样品溶液，进样量10μl，测定柴胡皂苷a、d的含量，两种成分的RSD均小于2%，表明方法重现性良好。

3.3稳定性实验

取供试品溶液（序号6），按0、2、4、6、8、10、12小时进样，测定样品溶液中柴胡皂苷a、d在12小时内的峰面积变化，结果两种成分的RSD均小于2%。表明样品在12小时内稳定性良好。

3.4加样回收率实验

取已知含量的柴胡样品（序号6，柴胡皂苷a含量0.77%，柴胡皂苷d含量0.91%）5份，分别加入柴胡皂苷a（0.4804mg/ml）对照品4ml和柴胡皂苷d（0.5687mg/ml）对照品4ml，进样量10μl，测定柴胡皂苷a和d含量，结果平均加样回收率分别为100.6%和98.7%，RSD分别为1.20%，1.87%。

4. 样品测定

按照样品溶液的制备方法分别制备不同样品溶液，进样量10μl注入高效液相色谱仪。测定结果见表1，对照品色谱图见图1，供试品色谱图见图2。

实验结果表明，在同等栽培年限下，北柴胡所含柴胡皂苷a和d的总量为最高。且庆阳市所产栽培北柴胡外皮红棕色，个大、气香，外观质量较其他栽培柴胡品种良好，产量也较为理想。栽培品不仅销往全国各地，而且销往国外，显示了极好的推广前景。

5. 讨论

栽培柴胡显示了极好的药用和商品前景。今后，应进一步考察各种生态因素对标示成分含量的影响，并观察3代以后柴胡的质量变化，制定出相应的药材质量标准。同时，还要考察栽培北柴胡与其他柴胡品种杂交引起的质量降低情况，以便引导药农在留种时，避免把北柴胡和其他品种栽培柴胡、野生柴胡的杂交种子当作种子种植的情况发生。

6. 结论

庆阳市境内不同分布区域对含量的影响亦不大，各种套种农作物对含量的影响不大，经过研究栽培年限两年半的柴胡，皂苷含量明显高于栽培年限一年半的柴胡。为保证柴胡药材的质量，建议药农把柴胡的栽培年限提高到两年半为宜。

国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].北京：中国医药科技出版社，2020，293.

潘胜利，李颖，戴克敏，云南省柴胡属药用植物的分类及其化学成分的研究[J].上海第一医学院学报，1984，11（1）：1.

赵香妍，刘长利.中药柴胡的研究概况与发展趋势[J].时珍国医国药，2015，26（4）：963-966.

于丹，吴军凯，谢海龙，等.不同产地柴胡商品药材的质量评价研究[J].化学工程师，2020（2）：25-27.

基金项目：甘肃省2020年度药品安全监管科研项目（2020GSMPA029）

作者简介：贾佳琳（1989），女，主管中药师，中药质量标准研究。

通讯作者：张宏伟（1968），男，主管中药师，中药鉴定与资源。