乳腺癌患者改良根治术后核因子κB表达水平与生存时间及生活质量的关系

袁忠，王科军，马海南

(邵阳学院附属第一医院乳甲外科，湖南 邵阳 422000)

乳腺癌是发生于乳腺导管上皮组织的恶性肿瘤，约占女性常见恶性肿瘤的23%，近年来发病率、病死率有上升趋势，对女性生命健康、生活质量构成严重威胁[1]。乳腺癌根治术是治疗乳腺癌的常见术式，通过手术切除病灶及转移淋巴结的同时最大限度地保留胸大肌、胸小肌，并在切除乳腺的同时放入假体以保证乳腺外形与手术前基本相同，临床接受度较高[2-3]。乳腺癌发生机制复杂多样，有研究发现，乳腺癌的发生进展除与第13号染色体乳腺癌易感基因2、第17号染色体乳腺癌易感基因1突变密切相关外，还与多种转录因子密切相关[4]。核因子κB(nuclear factor-κB，NF-κB)作为哺乳动物重要的核转录因子，可调控血管生成蛋白的表达，影响细胞增殖分化、凋亡、癌变等进程，与肿瘤发生、转移等密切相关[5]。有研究发现，通过抑制NF-κB信号通路转导可阻碍乳腺癌进展，NF-κB有望成为乳腺癌潜在预后生物标志物和基因治疗的靶点[6]。本研究主要分析乳腺癌患者改良根治术后NF-κB表达水平与生存时间及生活质量的关系，旨在为改善乳腺癌患者预后提供理论依据，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2016年1月至2018年3月于邵阳学院附属第一医院接受改良根治术治疗的82例乳腺癌患者为研究对象，均为女性，年龄38～60岁，平均(48±6)岁；病程9～18个月，平均(14.1±3.5)个月。纳入标准：①符合《中国抗癌协会乳腺癌诊治指南与规范(2015版)》[7]中乳腺癌相关诊断标准且经术后病理证实为乳腺癌；②孕激素受体或雌激素受体呈阳性；③术后接受辅助内分泌药物治疗。排除标准：①合并严重肝肾功能异常、心脑血管疾病或造血系统疾病者；②合并糖尿病、酒精药物滥用史或其他恶性肿瘤者；③曾接受过系统放化疗、内分泌治疗或靶向治疗者；④存在认知功能障碍且依从性差者；⑤主动退出研究或失访者。入组患者均签署了知情同意书，本研究经邵阳学院附属第一医院伦理委员会批准。

1.2观察指标和检测方法 收集患者临床资料，包括年龄、肿块部位、肿瘤大小、肿瘤TNM分期、组织学分级、淋巴结转移情况，分析NF-κB不同表达水平与乳腺癌患者临床病理特征的关系；记录乳腺癌组织、癌旁组织NF-κB表达情况；随访3年，比较不同NF-κB表达水平的乳腺癌患者累积生存率和生活质量。

1.2.1NF-κB表达水平检测 改良根治术中取患者乳腺癌组织、相应癌旁组织，将癌组织、癌旁组织分别进行切片，厚度约为5 μm，于恒温箱烘烤2 h后常规脱蜡至水，然后依次采用蒸馏水、磷酸盐缓冲液冲洗，再采用柠檬酸缓冲液抗原热修复10 min，冷却至室温后采用3%过氧化氢作用10 min。过氧化氢作用完毕后分别滴加一抗(兔抗人单克隆抗体)，于4 ℃条件下孵育过夜，然后滴加二抗(辣根过氧化物酶)，于室温下作用20 min后再次使用磷酸盐缓冲液冲洗，最后滴加二氨基联苯胺染色、苏木精复染，依次经75%、95%、无水乙醇脱水，采用中性树脂封片，于显微镜下观察。一抗(批号：20160106)、二抗(批号：20160119)均购自上海酶连生物科技有限公司，二氨基联苯胺(批号：20160124)、苏木精(批号：20160116)、乙醇(批号：20160130)均购自上海楷洋生物技术有限公司。

1.2.2结果判定 按照切片中阳性细胞数所占百分比、癌细胞染色强度评估，切片中无阳性细胞计0分，阳性细胞数≤10%计1分，10%<阳性细胞数≤50%计2分，阳性细胞数>50%计3分；癌细胞未着色计0分，癌细胞呈浅黄色计1分，癌细胞呈棕黄色计2分，癌细胞呈棕褐色计3分[8]。切片中阳性细胞数所占百分比计分与切片中癌细胞染色强度计分相乘>3分判定为NF-κB高表达，≤3分判定为NF-κB低表达。

1.2.3随访 通过定期复诊记录乳腺癌患者术后生存情况，采用乳腺癌患者生活质量测定量表(functional assessment of cancer therapy-breast cancer，FACT-B)于每次复诊时评估乳腺癌患者术后生活质量，FACT-B从生理状况、情感状况、功能状况、社会/家庭状况、附加关注情况5个维度评估，共包含36个条目，采用Liken 5级评分法分为5个等级，分别赋值0～4分，量表总得分越高提示患者术后生活质量越好[9]。

2 结 果

2.1乳腺癌组织、癌旁组织NF-κB表达水平比较 乳腺癌组织中NF-κB高表达率高于癌旁组织[60.98%(50/82)比8.54%(7/82)](χ2=49.719，P<0.001)，见图1。

注：NF-κB为核因子κB

2.2改良根治术后患者NF-κB不同表达水平与癌临床病理特征的关系 NF-κB高表达组(50例)组织学分级Ⅲ级和淋巴结转移的比例高于NF-κB低表达组(30例)(P<0.05)，两组年龄、肿块部位、肿瘤大小、肿瘤TNM分期比较差异无统计学意义(P>0.05)，见表1。

表1 乳腺癌改良根治术后NF-κB不同表达水平与患者临床病理特征的关系

2.3改良根治术后患者NF-κB表达水平与生存时间的关系 随访3年，82例乳腺癌患者失访6例，其中癌组织NF-κB高表达4例、低表达2例。乳腺癌组织NF-κB高表达患者术后累积生存率低于NF-κB低表达患者[60.87%(28/46)比83.33%(25/30)](χ2=4.342，P=0.037)，见图2。

注：NF-κB为核因子κB

2.4乳腺癌改良根治术后NF-κB表达水平与生活质量的关系 乳腺癌组织NF-κB高表达患者FACT-B评分低于NF-κB低表达患者[(92±5)分比(101±6)分](t=6.945，P<0.001)。

3 讨 论

癌症是影响全球范围内疾病发病率、死亡率的重要原因，其中乳腺癌是引发女性癌症死亡的常见恶性肿瘤之一，相关统计数据显示，我国乳腺癌发病率、死亡率分别约占世界的12.2%、9.6%[10-11]。改良根治术是治疗乳腺癌的有效术式之一，Xiang等[12]研究发现，改良根治术对乳腺癌患者围手术期血清应激激素、炎症应激指标的影响较小，有助于患者术后恢复。但近年来研究发现，乳腺癌患者术后受到相关治疗引起的各种症状困扰，精神负担较重，易增加术后复发、转移风险，严重影响患者生活质量，甚至危及生命安全，改善乳腺癌患者预后是临床研究的重点[13]。

NF-κB信号通路与乳腺癌发生、疾病进展密切相关，不仅参与血管内皮生长因子、趋化因子受体等下游靶基因调控，还可促进癌细胞有丝分裂活动，是引发乳腺癌细胞转移的重要因素。Wilson等[14]研究核糖核苷酸还原酶亚基M2、NF-κB、突变体肿瘤蛋白p53的分子靶向治疗三阴性乳腺癌发现，体外NF-κB活性降低患者激素治疗效果优于NF-κB活性升高患者，且生存率高于NF-κB活性升高患者。也有研究在探讨钙蛋白酶小亚基1与NF-κB在乳腺癌中表达及与乳腺癌患者临床特征的关系时发现，乳腺癌组织NF-κB高表达率明显高于癌旁组织[56.12%(55/98)比8.16%(8/98)]，证实NF-κB蛋白在乳腺癌组织中高表达[15]。本研究结果显示，乳腺癌组织中NF-κB高表达率高于癌旁组织(P<0.01)，与上述文献观点相符，表明NF-κB表达与乳腺癌发生有关。NF-κB是转录蛋白家族成员之一，乳腺癌实体肿瘤微环境中含有的大量炎症细胞因子刺激NF-κB向细胞核内转移，继而调节下游靶基因转录、翻译等。Aktepe等[16]研究发现，许多致癌因素可通过活化NF-κB信号促进癌细胞生长、增殖分化、远处转移，同时可调控部分细胞周期基因而加速细胞周期循环，且NF-κB体外活性越高，癌细胞增殖越活跃。本研究结果显示，乳腺癌组织NF-κB高表达组组织学分级Ⅲ级和淋巴结转移的比例高于NF-κB低表达组(P<0.05)，且随访3年发现，乳腺癌组织NF-κB高表达患者术后累积生存率低于NF-κB低表达患者，证实NF-κB表达水平与乳腺癌患者改良根治术后生存时间有关。有研究认为，NF-κB表达水平影响乳腺癌患者术后生存时间的机制可能是NF-κB高表达激活机体相关炎症细胞因子后间接刺激第17号染色体乳腺癌易感基因1突变，继而改变血管通透性，癌细胞血行转移率升高，患者术后复发风险增加，从而影响乳腺癌患者术后生存情况[17]；也有研究认为，NF-κB通过与机体多种蛋白相互作用形成的结合物可调控下游靶基因表达，继而调节癌细胞生长增殖相关通路，使调节信号到达细胞核内，进一步活化后促进癌细胞迁移[18]。临床可进一步探索NF-κB表达水平与乳腺癌患者发生、疾病进展的关系。

生活质量是临床评估癌症患者健康及病情变化的常用指标，可全面反映机体健康状况，而乳腺癌患者术后常需内分泌药物治疗，躯体、心理、社会功能等方面均受到一定影响，评估乳腺癌患者术后生活质量具有重要临床意义[19]。大量研究显示，乳腺癌患者改良根治术后药物治疗过程中易产生焦虑、抑郁等负性情绪，从而引起一系列免疫、神经等系统功能紊乱，患者恶性心理应激状态风险升高，严重影响术后生活质量[20-21]。本研究结果还显示，乳腺癌组织NF-κB高表达患者FACT-B评分低于NF-κB低表达患者，表明NF-κB高表达患者术后生活质量较差。既往研究发现，术后化疗、术后放疗、部分核转录因子水平等均为影响乳腺癌术后生活质量的因素，而NF-κB作为调控细胞凋亡、恶性转化过程的重要转录因子，在癌细胞中高表达对肿瘤坏死因子介导的凋亡具有抵抗作用，可一定程度上促进癌症复发，这可能是NF-κB高表达乳腺癌患者改良根治术后生活质量降低的原因[22]。临床可进一步探索影响乳腺癌患者术后生活质量的危险因素，以改善患者预后。

综上所述，乳腺癌改良根治术后NF-κB低表达患者累积生存率和生活质量高于NF-κB高表达患者，乳腺癌患者改良根治术后远期预后与NF-κB表达相关，临床可进一步探讨NF-κB表达水平与乳腺癌进展的关系。但因本研究选取样本量有限，相关结论仍需大样本多中心临床试验进一步佐证。