CD 4+ T细胞平衡失调与宫颈癌发生、进展及预后的关系研究

毛爱荣，李战飞，韩玉新，袁晓雁，陈静

1解放军联勤保障部队第988医院焦作院区妇科一区，河南 焦作 454150

2南方医科大学南方医院妇产科，广州 510515

宫颈癌是女性中常见的恶性肿瘤，全球发病率仅次于乳腺癌。随着不良生活习惯的影响，该病发病率逐年提高，且呈年轻化趋势。目前世界医学中关于宫颈癌的发病机制尚未明确，但有较多研究认为，初次性生活发生在18岁以前、性伴侣过多、人乳头瘤病毒感染等均为影响宫颈癌发病的相关因素[1-2]。相关研究报道，患者机体免疫应答平衡失调与女性宫颈癌的发生有着密切联系[3]。因此，近年来CD4+T淋巴细胞抗肿瘤免疫的作用受到了广大学者的关注，但CD4+T细胞亚群在宫颈癌患者体内的平衡状态与该病发生、进展及预后的研究较少。本文进一步分析宫颈癌患者CD4+T细胞平衡失调与宫颈癌发生、进展及预后的关系，旨在为临床诊治宫颈癌提供新思路，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2014年2月至2018年2月解放军联勤保障部队第988医院焦作院区收治的宫颈癌患者的病历资料。纳入标准：①均经手术或穿刺活检证实为宫颈癌；②年龄40～72岁；③临床资料无缺失。排除标准：①妊娠期、哺乳期女性；②合并其他系统恶性肿瘤及重要器官严重疾病；③接受过手术、化疗、激素等治疗。按照纳入、排除标准，共纳入48例宫颈癌患者，设为观察组，年龄40～72岁，平均（59.67±3.58）岁；国际妇产科联盟（International Federation of Gynecology and Obstetrics，FIGO）分期[4]：Ⅰ～Ⅱ期19例，Ⅲ～Ⅳ期29例；中～低分化20例，高分化28例；有淋巴结转移30例，无淋巴结转移18例；病理类型：鳞状细胞癌28例，腺癌20例。另选取同期在解放军联勤保障部队第988医院焦作院区进行健康体检的52例女性，设为对照组，年龄 39～71岁，平均（59.47±3.22）岁。两组研究对象年龄比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。取观察组患者的宫颈癌组织及对照组女性的正常宫颈组织。本研究经医院伦理委员会批准，所有患者均知情同意并签署知情同意书。

1.2 检测方法及评价标准

采用免疫组化法检测宫颈癌组织标本及正常宫颈组织标本CD4+T细胞亚群表达情况，包括γ干扰素（interferon-γ，IFN-γ）、白细胞介素-2（interleukin-2，IL-2）、白细胞介素-4（interleukin-4，IL-4）、白细胞介素-6（interleukin-6，IL-6）。检测过程严格按照说明书进行，对比检测结果。小鼠抗IFN-γ单克隆抗体及兔抗IL-2、IL-4、IL-6抗体均购自美国Beckman Coulter公司，DNA显色剂购自北京中杉金桥生物技术公司，抗体免疫组织化学试剂盒购自上海嵘葳达实业有限公司。

CD4+T细胞亚群（IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-6）阳性判断标准：肿瘤细胞的细胞质或细胞核中出现棕黄色或棕褐色颗粒为阳性细胞。阳性细胞百分比评分：无阳性细胞为0分，＜30%为1分，≥30%为2分。染色强度评分：无色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。两项评分相乘，≥3分为阳性。阳性率=阳性例数/总例数×100%。

1.3 随访

以电话随访及门诊复诊的方式对48例宫颈癌患者进行随访，回访率100%。记录宫颈癌患者治疗后预后情况。

1.4 统计学方法

采用SPSS 22.0软件进行统计分析，计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用t检验；计数资料以例数及率（%）表示，组间比较采用χ2检验；采用Kaplan-Meier法进行生存分析；影响因素分析采用Logistic回归模型；以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 IFN- γ、IL- 2、IL- 4、IL- 6表达情况的比较

观察组患者IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-6阳性表达率均高于对照组，差异均有统计学意义（P＜0.05）。（表1）

表1 两组患者IFN- γ、IL- 2、IL- 4、IL- 6表达情况的比较[ n（%）]

2.2 不同IFN- γ、IL- 2、IL- 4、IL- 6表达情况宫颈癌患者预后的比较

IFN-γ阳性表达患者的平均生存期为（20.14±2.10）个月，短于阴性表达患者的（24.75±2.54）个月（t=26.547，P=0.027）；IL-2阳性表达患者的平均生存期为（10.50±2.12）个月，短于阴性表达患者的（21.56±2.78）个月（t=18.751，P=0.013）；IL-4阳性表达患者的平均生存期为（19.08±1.68）个月，短于阴性表达患者的（23.36±2.25）个月（t=21.160，P=0.025）；IL-6阳性表达患者的平均生存期为（19.74±2.08）个月，短于阴性表达患者的（23.91±2.38）个月（t=18.542，P=0.021）。

2.3 宫颈癌患者预后影响因素的单因素分析

不同年龄、病理类型宫颈癌患者2年生存情况比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）；不同FIGO分期、分化程度、淋巴结转移情况及IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-6表达情况的宫颈癌患者的2年生存情况比较，差异均有统计学意义（P＜0.01）。（表2）

表2 宫颈癌患者预后影响因素的单因素分析

2.4 宫颈癌患者预后影响因素的Logistic回归分析

经非条件多因素Logistic回归模型进一步分析得出，FIGO分期为Ⅲ～Ⅳ期、分化程度为中～低分化、有淋巴结转移、IFN-γ阳性、IL-2阳性、IL-4阳性、IL-6阳性均为宫颈癌患者预后的独立危险因素（P＜0.05）。（表3）

表3 宫颈癌患者预后影响因素的Logistic回归分析

3 讨论

宫颈癌具有较高的病死率，患者预后不佳。既往研究表明，中国宫颈癌每年新发病例约13万，随着宫颈癌普查普治工作的开展，该病发病率有所下降，但宫颈癌的诊治仍不理想[5]。相关流行病学资料指出，宫颈癌的发生与人乳头瘤病毒感染有着密切联系，同时还与行为因素、宿主因素的协同作用有关[6]。

随着对宫颈癌发病机制的不断深入研究，宫颈癌患者机体免疫系统状态逐渐受到广大学者的关注，T淋巴细胞对肿瘤的作用成为了研究热点。T淋巴细胞是免疫系统中最重要的细胞群之一，其对杀伤、控制肿瘤细胞生长有重要意义。CD4+T细胞于20世纪80年代首次被Suzukawa等[7]学者发现，其主要有两类细胞，即Th1、Th2细胞，两类细胞分别产生IFN-γ、IL-2及IL-4、IL-6等因子。

目前，关于Th1与Th2细胞在宫颈癌中的研究较少，本研究采用免疫组化法检测Th1、Th2细胞中的细胞因子在宫颈癌中的表达情况，并分析其与宫颈癌患者预后的关系。本研究结果显示，宫颈癌组织中IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-6阳性表达率均高于正常宫颈组织（P＜0.05），这一研究结果与既往文献报道结果相似[8]。可见Th细胞的调节因子会影响Th细胞的功能，其相关的细胞因子影响着宫颈癌细胞的损伤及肿瘤的发生、进展，可为宫颈癌患者的治疗提供新的靶点[9]。

本研究通过非条件多因素Logistic回归模型进一步分析得出，FIGO分期为Ⅲ～Ⅳ期、分化程度为中～低分化、有淋巴结转移、IFN-γ阳性、IL-2阳性、IL-4阳性、IL-6阳性均为宫颈癌患者预后的独立危险因素（P＜0.05）。分析其原因：FIGO分期反映疾病的严重程度，可作为预后判断的重要参考因素，随着临床分期的增高，宫颈癌患者死亡风险增大。有研究指出，有淋巴结转移的宫颈癌患者3年生存率为55%[10]，本研究中有淋巴结转移的宫颈癌患者2年生存率仅为33.33%（10/30），考虑与本研究纳入样本量过少有关。健康人体内Th1、Th2细胞亚群内相关因子处于平衡状态，一亚群阻碍另一亚群的增殖功能，维持机体内正常免疫功能，而宫颈癌患者机体Th1、Th2细胞亚群平衡失调，使机体免疫功能紊乱[11-13]。有研究报道，IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-6表达水平的变化为患者Th1/Th2平衡失调的主要原因，且上述因子在食管癌、肝癌患者中均有相似表达，相关因子阳性表达患者预后更差[14-15]。

综上所述，FIGO分期为Ⅲ～Ⅳ期、分化程度为中～低分化、有淋巴结转移、IFN-γ阳性、IL-2阳性、IL-4阳性、IL-6阳性不利于宫颈癌患者预后。Th1、Th2相关因子表达可作为判断宫颈癌发生、进展的标志物，对评估患者预后有重要意义。由于本研究纳入样本量较少，且目前类似研究较少，导致本研究存在一定局限性，未来有待进一步扩大样本量，以便对宫颈癌患者肿瘤组织中CD4+T细胞平衡失调与患者预后的关系进行深入研究。