苏华,刘果,曾宪彪
(1.广西中医药研究院,广西 南宁 530022;2.桂林医学院,广西 桂林 541000)
蒽贝素是从紫金牛科酸藤子属植物酸藤子[Embelialaeta(Linn.)Mez][1~2]夏季采收果实提取的纯结晶,分子式为:C17H26O4,分子量294.39,化学结构式见图1。
图1 蒽贝素化学结构式
经植物学家鉴定,广西民间壮族医生用的“炮子”和西藏多地的藏医院使用的“夏嘎子”或“铁仔”实际上就是紫金牛科酸藤子属植物酸藤子[Embelialaeta(Linn.)Mez]的干果。据《广西药用植物名录》《南宁市药物志》《常用中草药手册》《海南岛常用中草药手册》记载,酸藤子有补血调经,收敛止血之功效,用酸藤子煎汤内服,主治闭经、血虚,产后虚弱等。蒽贝素有着广泛的开发利用前景,但是目前对该物质的药用研究尚少,极大地限制了蒽贝素药用资源开发。本文就近年来蒽贝素在理化性质和药理毒理作用方面的研究成果进行系统综述,以助于此植物药用资源的开发利用。
1.1 蒽贝素的物理性质 由Mahendram等[3]报道可知蒽贝素为橙红色结晶,熔点为mp141~143溶于乙醇、甲醇,微溶于石油醚,不溶于水。无旋光性,在290 nm具有紫外吸收。
1.2 蒽贝素的化学性质 蒽贝素为弱酸性物质,具有氧化性。
2.1 紫外光谱 比较目的样品与蒽贝素标准品在紫外-可见光吸收扫描,观察扫描图谱最大吸收峰于290 nm处位置一致则可判断该物为蒽贝素。
2.2 薄层色谱 从刘布鸣等[4]研究可知:将目的样品与蒽贝素标准品溶于甲醇,制成1 mg·mL-1的溶液,采用硅胶板G(3%的草酸溶液浸泡)进行点板,以甲苯-乙酸乙酯(10∶1)作为展开剂,观察目的样品与蒽贝素标准品展开位置是否一致,并计算Rf值。Rf值在误差允许范围内一致则可判断该样品为蒽贝素。
2.3 高效液相色谱 刘布鸣等[4]研究可知:将目的样品与蒽贝素标准品溶于甲醇,进行过滤、脱气后准备进样。使用Agilent pursuit C18色谱柱,以甲醇-水(80∶20)为流动相,在波长290 nm,流速1 mL·min-1的条件下进样20 μL,在相同时间出峰后用面积比较法或面积归一化法进行判断比较,分析得蒽贝素纯度均为98%以上。
为了了解蒽贝素体内毒性,曾宪彪等[5]进行了蒽贝素小鼠体内急性毒性实验。给药剂量对数与死亡概率单间呈S形曲线关系,当给药剂量在60~448 mg·kg-1时,剂量对数与死亡概率单位之间呈近似线性关系,经计算显示小鼠半数致死剂量为 153.525 mg·kg-1,其 99%平均可信限为(153.525±40.815)mg·kg-1。小鼠死亡多集中出现在给药后30~60 min,且死前症状多为神经系统症状,病理检查死亡小鼠主要脏器未见明显的致死性病理变化,脑组织也未见明显出血或血管阻塞病变。
国外传统医学也见用酸藤子治月经不调[6]。国内研究见杜元冲等[7]于60年代分离得蒽贝素用于驱绦虫,效果良好。后经现代药理研究发现蒽贝素具有较好的抗炎、抗肿瘤、阻碍肝细胞有丝分裂作用。
4.1 蒽贝素的抗炎作用
4.1.1 抗关节炎 余纳等[8]通过研究显示CIA大鼠经过蒽贝素灌胃治疗,动物体质量上升,炎症评分降低,血清TNF-α、IL-β水平均低于CIA动物模型组,且蒽贝素高剂量组中的IL-β明显比甲氨蝶呤组少,提示蒽贝素可通过降低抑制异常分泌而增多的TNF-α、IL-β炎症细胞因子来发挥抑制CIA炎症的作用。由该实验可以看出蒽贝素于甲氨蝶呤的抗炎机制不同,蒽贝素主要通过降低炎症细胞因子的表达水平来发挥CIA大鼠的抗炎作用。
4.1.2 抑制NF-κB表达,保护心肌 张兵[9]使用新西兰雄兔建立心肌损伤后心脏复苏(CPR)模型,并将成功复苏的30只兔子随机分为3组,分别为假手术组,CPR组,蒽贝素组。实验过程[9]中蒽贝素组分别给蒽贝素10 mg·kg-1,CPR组给予等量生理盐水。成功恢复自主循环的动物连续检测6小时血流动力学,并采集血清和心肌组织样本进行血液分析,心肌细胞坏死率以及炎性细胞浸润与凋亡的检测等[2]研究结果显示假手术组的心肌细胞排列整齐,比较完整且没有中性粒细胞浸润。蒽贝素组心肌细胞形态明显好于CPR组,凋亡指数和坏死率也明显降低。此外蒽贝素组和CPR组血液中的中性粒细胞比假手术组多,但蒽贝素组的明显低于CPR组。蒽贝素组的炎性细胞因子的表达和NF-κB水平也明显低于CPR组,稍高于假手术组。心脏骤停会引起全身缺血,恢复后的再灌注会损伤心肌导致炎症,严重时甚至会导致脓毒血症。该实验证明蒽贝素可以通过降低中性粒细胞,抑制的NF-κB因子和其他炎症因子的表达减少心肌再灌注时的损伤,起到保护心肌的重要作用。
4.1.3 对肝细胞有丝分裂产生影响 何平等[10]观察弱碱性蒽贝素氨水溶液灌胃对小鼠肝细胞有丝分裂的影响,发现0.02、0.01 mg·mL-1碱性蒽贝素氨水溶液对肝细胞有丝分裂有影响,可破坏核质在胞核两极或两子代细胞核中的均等分配,终止肝细胞分裂或使肝细胞死亡。
4.2 蒽贝素的抗肿瘤作用
4.2.1 抗乳腺癌作用 乳腺癌为女性高发癌症之一,李宗祥等[11]探讨了蒽贝素与阿奇霉素联合对荷瘤裸鼠肿瘤生长和对乳腺细胞增殖的影响。其先将培养好的乳腺癌细胞MCF-7接种于96孔板中并分为4组,分别为生理盐水组,阿奇霉素组,蒽贝素组,阿奇霉素+蒽贝素联合组,实验过程中分别注射相应的无菌溶液后放置合适条件下培养,并进行细胞凋亡检测和肿瘤球生长变化检测。他们还建立了肿瘤异位模型:将MCF-7细胞经处理后皮下接种于裸鼠背部,观察肿瘤生长情况,选择肿瘤生长良好的40只裸鼠分为4组,分别腹腔注射等量生理盐水,蒽贝素溶液,阿奇霉素溶液,阿奇霉素+蒽贝素溶液,每3天给一次药,给药至第12天后观察,第21天后处死裸鼠,解剖取下肿瘤称重并观察组织切片。这两个实验结果都显示阿奇霉素组和蒽贝素组都有抑制肿瘤生长的作用,但联合干预组细胞凋亡率和肿瘤生长抑制率更高,抑制肿瘤生长的效果更好。阿奇霉素是较常见的抗肿瘤药物之一,但由于心脏毒性较大,使用较少。蒽贝素为近年来引起广泛关注的比较有效的XAIP抑制剂,具有很好的抗肿瘤活性。该实验也证明其能增加乳腺细胞的凋亡和抑制肿瘤的生长,而且与阿奇霉素联合用药还能大大增加对乳腺癌治疗效果。
除了上述阿奇霉素外,肿瘤坏死因子的相关诱导配体TRAIL也可用于抗肿瘤,研究发现TRAIL对乳腺肿瘤细胞等一些肿瘤易产生耐药性,大大降低治疗效果,为了增强TRAIL治疗效果,张敏康等[12]进行了蒽贝素对肿瘤坏死因子的相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导乳腺癌细胞凋亡协同作用的相关研究。他们将培养好的乳腺癌细胞MDA-MB-231分别用适量TRAIL,蒽贝素,TRAIL+蒽贝素联合处理。使用MTT法检测药物处理后的细胞毒性并测定肿瘤细胞凋亡率等[3]。研究结果显示TRAIL单独用药时杀死肿瘤细胞不超过50%,由于有耐药性作用效果不佳,但联合用药组肿瘤凋亡率明显升高,致使肿瘤坏死的效果显著加强。蒽贝素单独使用也能有效杀死乳腺癌细胞,并且从研究中也可以看出蒽贝素在“亚毒性”的环境下还能增强肿瘤坏死因子的凋亡诱导配体的作用。从上述两个实验可以看出蒽贝素不仅自身具有一定抗乳腺癌作用,还能与其他抗癌药物例如阿奇霉素、TRAIL类药物联合用药增强小鼠抗乳腺癌作用。这为乳腺癌的治疗拓宽了道路,对乳腺癌的治疗具有重要意义。
4.2.2 抗结肠癌作用 蒽贝素具有广泛抗肿瘤活性,不仅可以用于治疗乳腺癌,经蒋正财等[13-14]研究其还具有抗结肠癌作用。结肠癌也是很常见的一种肿瘤,易发生耐药性并且副作用较大。为改变这种情况,有研究显示蒽贝素可以改变抗结肠癌药的耐药性,还能增强药物疗效。选用5-氟尿嘧啶药物与蒽贝素联合用药,研究其抗乳腺癌效果,与单独使用5-氟尿嘧啶,蒽贝素进行比较。其先培养结肠癌SW480细胞并建立动物模型,然后选40只肿瘤发育良好的小鼠(荷瘤小鼠)分为4组,分别用生理盐水,5-氟尿嘧啶,蒽贝素,5-氟尿嘧啶+蒽贝素联合处理后,检测NF-κB活性(炎性癌症中常见因子)、caspase-3活性(引起细胞凋亡的因子)、结肠癌细胞活性,结肠癌细胞凋亡情况等[10]以及观察记录小鼠肿瘤体积大小和生存时间。实验结果显示联合用药组的caspase-3活性明显高于生理盐水组和单独用药的两组。但NF-κB活性明显更低,原因是蒽贝素在一定条件下可以阻断NF-κB的信号传导,控制肿瘤的生长。4组小鼠中联合用药组存活时间最长,肿瘤体积下降率最高,高达21%。4组肿瘤细胞经过24 h处理后联合用药组凋亡率最高。这一系列结果可以证5-氟尿嘧啶与蒽贝素联合用药可以增强小鼠抗结肠癌作用,大大促进临床上联合应用抗结肠癌药的研究。
4.2.3 抗肺癌作用 蒽贝素是近年来较受关注的X连锁凋亡抑制蛋白,为了解其更多的临床用途,张春辉等[15]进行了紫杉醇联合蒽贝素对肺癌A549增殖的影响。其研究方法与李宗祥用荷瘤裸鼠研究蒽贝素抗乳腺癌作用一致。将肺癌A549细胞合适条件下进行培养后接种于96孔板,当细胞处于对数生长期时分贝用无菌的紫杉醇溶液,蒽贝素溶液,紫杉醇+蒽贝素联合溶液处理,处理后将孔板加入MTT溶液并移置合适条件再培养4 h以及其他一系列操作[2]后检测细胞凋亡情况。A549细胞经处理后皮下接种于裸鼠后背,选肿瘤生长情况较好的24只随机分为四组,分别为生理盐水组,紫杉醇组,蒽贝素组,紫杉醇+蒽贝素联合组。采用腹腔注射给药,期间不断观察肿瘤大小,第21天处死解剖观察病理切片。实验结果显示联合用药比单独用药细胞凋亡率更高,4组荷瘤裸鼠相比较,联合用药组体积减小效果最明显,能显著抑制肺癌细胞A549的增殖。蒽贝素自身也有一定的抑制肺癌的功效,但联合用药效果更加显著,能大大提高紫杉醇的功效。
4.2.4 抗肝癌作用 为了进一步了解蒽贝素在临床上抗肝癌的作用,王世兵等[16]对蒽贝素影响肝癌细胞的增殖机制进行了研究。该实验为体外实验,研究对象是人肝癌Bel-7404细胞株。主要采用了RT-PCR方法检测蒽贝素在肝癌细胞中mRNT的表达,还用MTT法检测细胞增殖情况,并使用流式细胞术检测细胞凋亡率。在实验中不断观察细胞形态。实验结果显示蒽贝素抑制肝癌细胞Bei-470效果显著,主要机制是通过启动caspase-3通路阻断NF-κB信号的传导诱导肝癌细胞凋亡,抑制肿瘤生长。
综上所述蒽贝素可通过薄层色谱、紫外光谱、高效液相色谱进行检测。其具有抗炎、保护心肌细胞、以及抗乳腺癌,肝癌等肿瘤的作用,并且蒽贝素毒性较小,可与肝肾毒性较大的药物如上述的阿奇霉素等联合用药,增强药效,减少副作用。但蒽贝素毒性作用以及药理作用机制还需进行深入研究,不断完善临床用药资料。