新疆小枝玫瑰花中木犀草素含量的测定

周鑫涛，王 莹，兰 卫

(1.新疆医科大学中医学院，新疆 乌鲁木齐 830017；2.新疆医科大学附属中医医院，新疆 乌鲁木齐 830002)

维药小枝玫瑰花为蔷薇科植物玫瑰(RosarugosaThunb.)中小枝玫瑰(branchlet rose)的干燥花蕾，属国家药典收载品种[1]。其制剂玫瑰花口服液、玫瑰花糖膏已作为单方制剂收载于《中华人民共和国卫生部药品标准(维吾尔药分册)》[2]。小枝玫瑰花在新疆和田已有约2 000年的栽培历史，现有栽培面积约5.5万亩，产量大、质量优。经中科院检测，玫瑰精油中最主要的成分是香茅醇、香叶醇，而新疆小枝玫瑰精油中香茅醇含量是保加利亚攻瑰的8.3倍、法国玫瑰的5.6倍；香叶醇含量则更高，是保加利亚玫瑰的249.8倍、法国玫瑰的124.9倍[3]。研究表明，小枝玫瑰花具有芳香开窍、安神止痛、软肠通便、滋补肠胃、改善消化、驱风消炎、润肤生辉[4]等功效。木犀草素是小枝玫瑰花的主要活性成分。王清岑等[5]研究发现，木犀草素具有抗动脉粥样硬化、保护心肌缺血再灌注损伤、缓解心力衰竭、降低血压等作用；徐秋红等[6]研究发现，木犀草素具有抗肿瘤、抗炎、抗氧化、抗菌、抗病毒等作用。测定木犀草素含量对小枝玫瑰花进行质量控制具有重要意义。鉴于此，作者采用HPLC法测定新疆小枝玫瑰花中木犀草素含量。

1 实验

1.1 材料、试剂与仪器

小枝玫瑰花(批号20181216)，新疆鸿德堂永盛药业有限公司。经新疆医科大学盛萍教授鉴定为蔷薇科植物玫瑰(RosarugosaThunb.)中小枝玫瑰(branchlet rose)的干燥花蕾。

木犀草素标准品(批号20180224)，北京谱析科技有限公司；磷酸(批号20180516)，郑州中天泓达化工科技有限公司；甲醇(批号20171215，分析纯)，山东千贝化工有限公司；甲醇、乙腈，色谱级，Fisher公司；甲酸(批号L1807102，色谱级)，赛默飞公司；实验用水为超纯水。

高效液相色谱仪(LC-20AT泵，SIL-20A自动进样器，CBM-20A 控制器，SPD-M20A 检测器，CTO-20AC柱温箱，LC-solution色谱工作站)、AUW120D型电子分析天平，日本岛津；KQ-500DE型数控超声清洗器(40 kHz)，昆山超声仪器有限公司；AL204电子分析天平，METTLER TOLEDO；ZY-1004型超声波清洗机，上海早盈精密清洗机械有限公司；Millipore Elix 5型超纯水系统，Millipore公司。

1.2 标准溶液的制备

精密称取木犀草素标准品 2.04 mg，置于 25 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，即得0.081 6 mg·mL-1木犀草素标准溶液。

1.3 供试溶液的制备[7]

称取小枝玫瑰花药材 5 g，粉碎，置于50 mL带塞锥形瓶中，加入50 mL甲醇，称重，100 Hz下超声提取30 min，放冷，用甲醇补足质量，过滤，即得供试溶液。

1.4 色谱条件

XB C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，柱温25 ℃，流动相为甲醇-0.2%磷酸(50∶50，体积比，下同)，流速1.0 mL·min-1，检测波长350 nm，进样量 10 μL[8]。

在该色谱条件下木犀草素保留时间约为18 min，理论塔板数大于3 000(以木犀草素峰计)，木犀草素峰与相邻峰分离度大于1.5。木犀草素标准溶液、供试溶液的HPLC图谱见图 1。

图1 木犀草素标准溶液(a)、供试溶液(b)的HPLC图谱

2 结果与讨论

2.1 标准曲线的绘制

分别精密吸取木犀草素标准溶液2 mL、4 mL、6 mL、8 mL、10 mL置于10 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，得浓度(μg·μL-1)分别为 0.016 32、0.032 64、0.048 96、0.065 28、0.081 60木犀草素溶液，按1.4色谱条件进样测定，得木犀草素峰面积分别为1 137 441、2 269 943、3 403 971、4 599 967、5 758 670。以木犀草素进样质量(x，μg)为横坐标、峰面积(y)为纵坐标绘制标准曲线(图2)，拟合得线性回归方程为：y=7090981.62x-37746.20，R2=0.9999，表明木犀草素质量在 0.163 2～0.816 0 μg范围内与峰面积线性关系良好。

图2 木犀草素的标准曲线

2.2 精密度

精密吸取0.081 6 mg·mL-1木犀草素标准溶液，按1.4色谱条件连续进样 6 次。测得峰面积分别为5 758 670、5 771 706、5 781 687、5 767 742、5 786 160、5 764 239，RSD 值为 0.18%。表明仪器精密度良好。

2.3 重复性

称取小枝玫瑰花药材 6 份，按1.3方法制备供试溶液，按1.4色谱条件进样 20 μL。测得峰面积分别为1 204 946、1 227 730、1 215 521、1 214 732、1 228 546、1 208 965，进样质量分别为0.175 2 μg、0.178 5 μg、0.176 7 μg、0.176 6 μg、0.178 6 μg、0.175 8 μg，平均进样质量为0.176 9 μg，计算得到木犀草素含量为 88.45 μg·g-1，RSD值为 0.78%。表明该方法重复性良好。

2.4 稳定性

按1.3方法制备供试溶液，分别于 0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、10 h 按1.4色谱条件进样 20 μL。测得峰面积分别为1 206 532、1 226 598、1 227 321、1 204 569、1 259 632、1 249 325，进样质量分别为0.175 5 μg、0.178 3 μg、0.178 4 μg、0.175 2 μg、0.183 0 μg、0.181 5 μg，平均进样质量为0.178 6 μg，计算得到木犀草素含量为 89.3 μg·g-1，RSD 值为 1.75%。表明供试溶液在10 h 内稳定性良好。

2.5 加标回收率

称取小枝玫瑰花药材 6 份，每份 2.5 g，分别加入木犀草素标准品0.225 mg，参照文献[9]操作方法，按1.4色谱条件进样 20 μL，结果见表1。

由表1可知，木犀草素平均加标回收率为101.45%，RSD 值为 1.71%。

表1 加标回收率结果(n=6)

2.6 小枝玫瑰花中木犀草素含量的测定

按1.3方法制备供试溶液3份，按1.4色谱条件进样 20 μL，测得木犀草素峰面积分别为1 204 946、1 227 730、1 213 888，进样质量分别为0.175 2 μg、0.178 5 μg、0.176 5 μg，平均进样质量为0.176 7 μg，计算得到小枝玫瑰花中木犀草素含量为88.35 μg·g-1，RSD值为 0.92%。

2.7 讨论

配制标准溶液和供试溶液时应保持实验室和操作台的洁净，避免其它物质污染，同时，应现配现用，避免放置时间过长，影响测定结果的准确性。

李鹏等[10]采用HPLC法测定芦丁和木犀草素的含量，选择乙腈-磷酸为流动相，梯度洗脱；许赞杉等[11]采用HPLC法同时测定鼠曲草中槲皮素与木犀草素的含量，以甲醇-4%磷酸(42∶58)为流动相，检测波长为360 nm；谭小明等[12]采用HPLC法测定广西不同产地壮药夜香牛中木犀草素的含量，以甲醇-乙腈(1∶1)为流动相A，0.5%磷酸为流动相B，检测波长为350 nm。作者以甲醇-0.2%磷酸为流动相，根据色谱峰的分离程度，确定流动相体积比为50∶50，所得HPLC图谱出峰效果最好。

3 结论

建立了测定新疆小枝玫瑰花中木犀草素含量的HPLC法。结果表明，木犀草素质量在0.163 2～0.816 0 μg范围内与峰面积线性关系良好；平均加标回收率为101.45%，RSD值为1.71%；小枝玫瑰花中木犀草素含量为88.35 μg·g-1。该方法准确可靠，可用于小枝玫瑰花中木犀草素含量的测定。