箭叶淫羊藿药材等级质量研究*

覃春叶，何佳佳，陈子愉，陈志琳，李 玮，杜洪志

(贵州中医药大学，贵州 贵阳 550025)

箭叶淫羊藿Epimediumsagittatum(Sieb.et Zucc.)Maxim.是小檗科淫羊藿属植物，药用部位为叶，其味辛甘，性温，具有补肝肾，强筋骨，祛风湿的作用[1]。主要含有黄酮及其苷类、生物碱、多糖、木脂素等成分，具有抗骨质疏松、延缓衰老、抗肿瘤[2-8]等药理作用，临床上多用于治疗骨质疏松、更年期综合征等疾病[9-10]。市场上，箭叶淫羊藿药材使用广，是很多中成药的主要原料之一，如仙灵骨葆胶囊、益肾灵颗粒、抗骨增生片等。中药材质量优劣直接影响到中成药的质量，药材不同采收期、不同部位、不同产地、不同商品规格等级都与中药材的质量息息相关[11-12]。目前，《中药材商品规格等级(226)种》中按照传统分级方法，即叶片占比和碎叶占比和色泽将箭叶淫羊藿分为一等、二等和统货，没有结合现代质量控制指标综合评价该药材商品规格等级质量，已不符合当前中药材的生产、流通、使用，制约了箭叶淫羊藿药材产业的发展。因此，制定科学、全面的箭叶淫羊藿药材商品规格等级质量评价方法，对于保证临床疗效、合理利用药材、优质优价都具有重要意义。

研究表明，淫羊藿的不同药用部位中，淫羊藿苷以及总黄酮类成分的含量有所差异，含量最高的部位在叶片，叶柄和茎含量较低[13]；同时，叶类药材的等级划分较为简单，主要按照药材的外观性状、颜色、含杂质率等划分[14]。基于此，笔者将箭叶淫羊藿药材外观性状与内在品质相结合，建立该药材等级质量评价方法，以期为箭叶淫羊藿药材商品规格等级质量标准的修订提供参考。

1 仪器与试药

1.1 仪器

TU-1810型紫外分光光度仪(北京普析通用仪器有限责任公司)、ME204E型万分之一电子分析天平(上海梅特勒托利多仪器有限公司)、HH-2型数显恒温水浴锅(上海况胜实业发展公司)、HS10260D型超声波清洗仪(上海易净超声波仪器有限公司)。

1.2 试药

淫羊藿苷对照品(批号：110737-200414，购于中国药品生物制品检定所，纯度≥99%)、甲醇和乙醇均为分析纯、实验用水为蒸馏水。

16批箭叶淫羊藿药材均由国药集团同济堂(贵州)制药有限公司提供。由贵州中医药大学魏升华教授鉴定，为小檗科植物箭叶淫羊藿Epimediumsagittatum(Sieb.et Zucc.)Maxim.的全草。具体信息见表1。

表1 箭叶淫羊藿药材产地及批号Tab.1 Origins and batch numbers of Epimedium sagittatum medicinal materials

2 方法与结果

2.1 分级要点

根据2020版《中国药典》对箭叶淫羊藿的质量要求，结合叶片颜色、叶片所占比例(重量比)、其他非药用杂质、含量测定指标总黄酮进行等级划分。

一等：全部为三出复叶(小叶)，叶片绿色，完整，无虫蛀，不含叶柄(叶枝)，叶片所占比例为100%，无杂质。

二等：有一部分为三出复叶(小叶)，叶片绿色，完整，无虫蛀，含叶柄(叶枝)，含较短的叶枝，无杂质。

三等：有一部分为三出复叶(小叶)，叶片绿色，完整，无虫蛀，含叶柄(叶枝)比例较二等品多，含较长叶枝和较短叶枝，无杂质。

统货：原药材。

2.2 分级方法

每一个批次根据叶片颜色，有无杂质，虫蛀，是否完整，划分为3个等级和统货，并计算各批次各等级叶片占比和叶柄占比。

2.3 药材颜色测定

采用主观结合客观方法综合评价药材颜色。主观方法即感官观察药材未打粉之前叶片的颜色；客观方法即是用色度测量仪测定箭叶淫羊藿药材打粉之后样品粉末的颜色，以L、a、b表示色度值，其中L为亮度值，值越大表示亮度越高；a为色度值，“+”表示红色，值越大颜色越红，“-”表示绿色，值越小颜色越绿；“b”为彩度值，“+”表示黄色，值越大颜色越黄，“-”表示蓝色，值越小颜色越蓝。

2.4 水分测定

照2020版《中国药典》第四部通则0832项下“水分测定法”烘干法测定药材水分含量。

2.5 浸出物测定

照2020版《中国药典》第四部通则2201项下“浸出物测定法”，分别以水和50%乙醇为溶剂，按热浸法测定药材水溶性和醇溶性浸出物含量。

2.6 总黄酮测定

2.6.1 对照品溶液的制备

精密称取2.5 mg的淫羊藿苷对照品置于25 mL的容量瓶中，加甲醇定容，摇匀。取1 mL该溶液置于10 mL容量量瓶中，加甲醇定容，制成每1 mL含0.01 mg的溶液，4 ℃下保存备用。

2.6.2 供试品溶液的制备

取供试品粉末(过三号筛)约0.2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%乙醇20 mL，称定重量，超声处理1 h，取出，补重，摇匀，滤过，取续滤液0.35 mL加甲醇定容到25 mL即得供试品溶液，4 ℃下保存备用。

2.6.3 标准曲线制备

精密量取不同体积的淫羊藿苷对照品溶液，配置成浓度分别为0.006 mg/mL、0.01 mg/mL、0.014 mg/mL、0.016 mg/mL、0.02 mg/mL、0.03 mg/mL一系列对照品溶液。在270 nm处测定其吸光度。以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，求得回归方程Y=31.801X+0.0118(r=0.9998)，淫羊藿苷浓度在0.006～0.03 mg/mL的范围内线性关系良好。

2.6.4 精密度试验

取浓度为0.01 mg/mL淫羊藿苷对照品溶液，在270 nm处下连续测定6次，分别测定吸光度，计算其RSD为0.25%，表明仪器精密度良好。

2.6.5 重复性试验

取箭叶淫羊藿药材样品6份，每份约0.2 g，精密称定，按2.6.2项下方法制备供试品溶液，在270 nm波长下测定其吸光度，计算总黄酮含量的RSD为2.1%，表明方法重复性良好。

2.6.6 稳定性试验

取同一份箭叶淫羊藿药材样品，约0.2 g，精密称定，按2.6.2项下方法制备供试品溶液，在270 nm波长下测定其吸光度，每隔1 h测定吸光度，连测6次，吸光度RSD为0.60%，说明该药材溶液在5 h内稳定性良好。

2.6.7 加样回收率试验

取同一已知含量的箭叶淫羊藿药材粉末6份，每份约0.1 g，精密称定，加入约等量的淫羊藿苷对照品溶液(1 mg/mL淫羊藿苷)，按2.6.2项下方法制备溶液，进行含量测定，其6份供试品的回收率范围为94.29%～98.10%，平均回收率为96.51%，RSD值为1.6%，说明该方法准确度良好。

2.6.8 样品含量测定

取箭叶淫羊藿药材样品，分别按2.6.2项下方法制备供试品溶液，在270 nm处测定其吸光度，采用标准曲线法，计算干燥品药材中总黄酮的含量。

2.7 统计方法

16批箭叶淫羊藿药材叶片占比、叶柄占比、颜色、水分、水溶性浸出物、醇溶性浸出物、总黄酮含量测定结果见表2，采用SPSS23.0软件进行主成分分析，系统聚类分析和K-均值聚类分析。

表2 箭叶淫羊藿相关指标测定结果(n=3)Tab.2 Measurement results of related indexes of Epimedium sagittatum(n=3)

续表2

2.7.1 主成分分析

采用SPSS23.0软件对16批箭叶淫羊藿药材各指标进行主成分分析，根据不同主成分的贡献率及线性组合的相关系数，通过指标权重归一化，得到各项指标综合得分系数与指标权重，结果见表3。由结果可知，叶片占比、醇溶性浸出物含量和总黄酮含量的指标权重占比较大，为主要的影响因素。

表3 指标权重分析结果Tab.3 Results of index weight analysis

2.7.2 系统聚类分析

根据主成分分析的结果，以叶片占比、醇溶性浸出物含量和总黄酮含量为指标，采用SPSS23.0软件进行系统聚类分析，结果见图1。由图可知，各批次的一等、二等和三等之间基本可以有效、有规律的聚为一类，说明各批次的相同等级之间相似性比较大。

图1 系统聚类分析结果Fig.1 System cluster analysis results

2.7.3 K-均值聚类分析

根据主成分分析和系统聚类分析的结果，以叶片占比、叶柄占比、颜色、水溶性浸出物、醇溶性浸出物和总黄酮含量进行K-均值聚类分析，结果见表4。由结果可知，除统货外将箭叶淫羊藿药材分成三类，第一类箭叶淫羊藿各方面的指标优于第二类箭叶淫羊藿，第二类优于第三类。

表4 K-均值聚类最终聚类中心Tab.4 Final cluster centers of K-means clustering

3 结论与讨论

3.1 结论

根据箭叶淫羊藿样品K-均值聚类分析结果，以叶片、叶柄占比，颜色，总黄酮含量为重要指标，水分、浸出物含量为对应指标，将箭叶淫羊藿药材分为一等、二等、三等和统货。结果见表5。

表5 箭叶淫羊藿药材商品规格等级划分结果Tab.5 Grading results of Epimedium sagittatum medicinal materials

3.2 讨论

《中药材商品规格等级(226)种》中按照传统分级方法，即叶片占比、碎叶占比和色泽将箭叶淫羊藿分为一等、二等和统货，本文在此基础上，与现代质量控制指标相结合，测定水分、浸出物、总黄酮含量，旨在探究外在指标与内在指标的相关性以及按照传统的分级方法进行该药材等级划分是否合理。由SPSS23.0数据分析，可知外在指标和内在指标有相关性，并且呈正相关，说明传统分级方法具有合理性。通过外在指标和内在指标相结合制定箭叶淫羊藿药材商品规格等级质量评价方法，既是对原有商品规格的传承，也是一种现代补充，满足了市场的变化和需求，可以有效控制箭叶淫羊藿药材的质量，制定的质量评价方法更加科学、全面。

目前，基于性状-成分-药效模式评价中药材的商品规格等级已是很多研究者认可的方法，陈虹宇对羌活不同商品规格抗炎、镇痛药效进行对比，研究结果表明，不同商品规格的羌活药材抗炎、镇痛效果有差异，蚕羌和疙瘩羌的抗炎镇痛效果比竹节羌、尾羌的效果好[15]；曹旭林按照传统分级方法，以天冬药材外观性状指标颜色、断面等将天冬药材分为一等、二等和三等，研究不同等级天冬药材止咳、祛痰作用强弱，发现一等品较三等品止咳祛痰作用显著[16]。然而，箭叶淫羊藿药材不同等级之间是否存在药效学差异，还有待进一步研究。