粉背南蛇藤药材质量标准研究*

赵婷婷，徐 艳，胡成刚，唐 娟，陈桃香，胡家震

(贵州中医药大学，贵州 贵阳 550025)

粉背南蛇藤(Celastrushypoleucus(Oliv.)Warb.ex Loes.)为卫矛科南蛇藤属多年生藤状灌木植物，又名博根藤、落霜红、绵藤、麻妹条、来阿片等。据记载，其在贵州分布于梵净山、松桃、印江、石阡、施秉、遵义、雷公山等地，以根入药，有化瘀消肿、止血生肌之功效，民间常用来治疗跌打肿痛、刀伤等[1～5]。研究报道[6～8]，粉背南蛇藤主要含萜类、黄酮类等化合物，其中雷公藤红素与扁蒴藤素抗炎、抗肿瘤、免疫活性作用显著。粉背南蛇藤作为《贵州省中药材、民族药材质量标准》(2003版)收载品种南蛇藤根药材的法定来源之一[3]，地标下的质控标准较低，难以质控，目前有关粉背南蛇藤的研究报道主要集中在化学成分方面，尚未见生药学鉴别方面的报道。为此，本课题组按现行贵州省地方药材标准(2015年修订)的相关要求，对粉背南蛇藤药材进行了较为系统的生药鉴定研究；并检查了粉背南蛇藤药材的水分、总灰分、酸不溶性灰分和浸出物；以南蛇藤素为对照品，采用薄层色谱法对其进行定性鉴别，为粉背南蛇藤药材初步建立相应的质量控制方法。

1 仪器和试药

仪器：MODEL BX43F光学显微镜和显微显像系统、载玻片、盖玻片、镊子、小刀、烧杯、量筒、AG285电子分析天平(Mettler toledo)、ZF-20D暗箱式紫外分析仪、毛细管、硅胶G薄层板、展开缸、DZF-6050型真空干燥箱、KQ5200DB型数控超声清洗器。

试剂：乙酸乙酯、甲醇、石油醚(30～60)、三氯甲烷、环己烷、甲苯、二氯甲烷均为分析纯，磷钼酸；南蛇藤素对照品(北京中科质检生物技术有限公司，17101710)、扁蒴藤素对照品(北京中科质检生物技术有限公司，批号：YO4J6Wl)。

药材：粉背南蛇藤药材于2018年采自贵州省贵阳、龙里等3个不同地区。原植物与药材均经贵州中医药大学生药实验室孙庆文教授鉴定，凭证标本存放于贵州中医药大学中药标本馆。药材产地信息见表1。

表1 药材收集信息Tab.1 Information of the medicinal materials

2 方法与结果

2.1 鉴别

2.1.1 粉背南蛇藤药材的性状鉴别

本品呈圆柱形，细长弯曲，直径1～2.5 cm，少数直径可达3 cm。表面棕黄色或棕褐色，具细纵皱纹，可见横长的椭圆形的皮孔样凸起。质坚硬，不易折断，断面不平坦，淡黄白色或灰白色，纤维性，有放射状纹理，有排列不规则的小孔。气香，味微苦。见图1。

图1 粉背南蛇藤药材和饮片图Fig.1 Celastrus hypoleucus medicinal materials anddecoction pieces

2.1.2 显微鉴别

2.1.2.1 粉背南蛇藤根横切面

通过观察粉背南蛇藤根横切片，归纳其显微鉴别特征如下：横切面呈圆形，木栓层为10～15列扁平细胞，皮部较宽，占横切面半径的1/3，皮层为薄壁细胞，内含有大量淀粉粒，并有石细胞成群或单个散在，中央形成层环纹呈类圆形，射线明显，木质部细胞均木化，由导管和木纤维组成，大型导管多单个或2～3个成群，周围有管胞及多数木纤维；木纤维宽4～6列细胞(图2)。

图2 粉背南蛇藤根横切面显微图Fig.2 Micrograph of the cross section of Celastrus hypoleucus root

2.1.2.2 粉背南蛇藤粉末显微鉴别

通过对3批粉背南蛇藤药材的粉末制片进行观察，总结了其粉末显微鉴别特征：本品粉末呈深棕色。淀粉粒众多，单粒呈类圆形，脐点点状或裂缝状；复粒由2～3分粒组成，有的可见层纹。无草酸钙簇晶，具少数草酸钙方晶。棕色块随处散在，形状、大小及颜色不一。导管主为具缘纹孔，多呈碎片状，纹孔排列紧密，较多为网纹导管，也有少数螺纹导管。纤维众多，多成束或散在，长条形，末端渐尖，具纹孔，木纤维常见，壁厚。木栓细胞棕色，壁稍厚。石细胞淡黄绿色，呈类方形、类长方形或一边斜尖，层纹明显，纹孔及孔沟明显。见图3。

图3 粉背南蛇藤根粉末显微鉴别Fig.3 Microscopic identification of the root powder of Celastrus hypoleucus

2.1.3 薄层鉴别

取粉背南蛇藤药材粉末2 g，于50 mL具塞锥形瓶中，加入20 mL乙酸乙酯，于30 ℃下超声30 min，静置放冷，过滤，即得供试品溶液。另取南蛇藤素对照品适量，用甲醇溶解配制成 1.1 mg/mL 的溶液，即得对照品溶液。参照《中国药典》2015版四部通则薄层色谱法(通则0502)试验，分别吸取供试品溶液和南蛇藤素对照品溶液3 μL，点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-石油醚-丙酮(2∶1∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%的磷钼酸显色剂，加热至斑点清晰，进行检视。在此试验条件下，在供试品色谱中与南蛇藤素对照品色谱相同的位置上，显示相同颜色的斑点，分离度较好，斑点显色清晰(图4)。

图4 3个批次粉背南蛇藤药材的薄层色谱图Fig.4 TLC of the three batches of Celastrus hypoleucus

2.2 检查

2.2.1 水分

按照2015版《中国药典》四部通则0832水分测定法项下第二法(烘干法)测定。取本品粉末各4 g，平铺于恒重的扁形称量瓶中，厚度不超过10 mm，精密称定，打开瓶盖在105 ℃下干燥5 h，将瓶盖盖好，移置干燥器中，冷却30 min，精密称定，再在上述温度干燥1 h，冷却，称重，直至连续两次称重的差异不超过5 mg为止。根据减失的重量，计算供试品中的含水量(%)。每批做三个平行样，结果见表2。

表2 粉背南蛇藤药材的水分测定结果(单位：%)Tab.2 Moisture measurement results of Celastrus hypoleucus

实验数据表明，3批粉背南蛇藤药材中的水分含量的差异性较小，平均含量为10.58%。含水量较高的批次(20180828033)是采自花溪高坡石门村的粉背南蛇藤药材，为11.38%；较低的批次(20180823032)是采自花溪高坡扰绕村的粉背南蛇藤药材，为9.65%。

2.2.2 灰分测定2.2.2.1 总灰分测定

照2015版《中国药典》四部通则2302灰分测定法项下总灰分测定法测定。取药材粉末3 g，于炽灼至恒重的坩埚中，称定重量，缓缓炽热，于200 ℃炭化2 h，注意避免燃烧，完全炭化时，渐升高温度至600 ℃，保持600 ℃炽灼4 h，使完全灰化并至恒重。根据残渣重量，计算供试品中总灰分的含量(%)。结果见表3。

表3 粉背南蛇藤药材总灰分测定结果(%)Tab.3 Total ash measurement results of Celastrus hypoleucus

结果表明，3批粉背南蛇藤药材中的总灰分存在比较大的差异，平均含量为4.94%。含量最高的批次(20180828033)是采自花溪高坡石门村的粉背南蛇藤药材，为6.80%；最低的批次(20180719031)是采自龙里羊场镇的粉背南蛇藤药材，为2.81%。

2.2.2.2 酸不溶性灰分测定

照2015版《中国药典》四部通则2302灰分测定法项下酸不溶性灰分测定法测定。取上项所得的灰分，于坩埚中小心加入稀盐酸约10 mL并用表面皿覆盖坩埚，置于水浴上加热10 min，表面皿用热水5 mL冲洗，洗液并入坩埚中，用定量滤纸滤过，坩埚内的残渣用纯水洗于滤纸上，洗涤至洗液用硝酸银溶液检测不显氯化物反应为止，将滤渣和滤纸移置同一坩埚中，干燥，炽灼至恒重。根据残渣重量，算供试品中酸不溶性灰分的含量(%)。结果见表4。

表4 粉背南蛇藤酸不溶性灰分测定Tab.4 Acid-insoluble ash measurement resultsof Celastrus hypoleucus

结果表明，3批粉背南蛇藤药材中的酸不溶性灰分的差异性较大，平均含量为2.49%。含量较高的批次(20180828033)是采自花溪高坡石门村的粉背南蛇藤药材，为3.00%；含量较低的批次(20180719031)是采自龙里羊场镇的粉背南蛇藤药材，为2.05%。

2.2.3 浸出物

照2015版《中国药典》四部通则2201浸出物测定法分别进行水溶性浸出物和醇溶性浸出物测定。取同一批药材样品粉末，以水和溶解范围较广的70%乙醇为溶剂分别进行冷浸法和热浸法的条件考察，确定浸出物采用的方法。

表5 冷浸法和热浸法水溶性测定结果比较Tab.5 Comparison of water solubility determination resultsbetween cold leaching method and hot leaching method

结果表明，无论是水溶性浸出物还是醇溶性浸出物都是热浸法，浸出率比较高，因此选择热浸法，因粉背南蛇藤药材在《中国药典》中并无收载，照上述方法分别考察以0%(纯水)、10%乙醇、30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇、80%乙醇和95%乙醇作为溶剂对苦皮藤药材的浸出率。结果见表6。

表6 不同浓度乙醇的浸出物测定结果Tab.6 Determination results of extracts by differentconcentrations of alcohol

结果表明，乙醇浓度越高，浸出率越低，相反的醇浓度越低，浸出率越高，以水为溶剂时浸出率最高，因此以水为溶剂进行3批粉背南蛇藤药材的浸出物测定，结果见表7。

表7 粉背南蛇藤药材水溶性热浸出物测定结果Tab.7 Determination results of water-soluble extract inCelastrus hypoleucus by hot leaching method

结果表明，3批粉背南蛇藤药材的水溶性浸出物差异较大，平均值为15.52%，含量较高的批次(20180828033)是采自花溪高坡石门村的粉背南蛇藤药材，为17.38%；较低的批次(20180719031)是采自龙里羊场镇的粉背南蛇藤药材，为12.74%。

3 讨论

粉背南蛇藤在《贵州省中药材·民族药材质量标准》(2003年版)中仅记载了性状鉴别项，本研究对粉背南蛇藤药材及饮片进行性状观察、对性状鉴别项的描述更加具体，且在观察其饮片时发现其他特性，药材表面可见很长的椭圆形皮孔样凸起，断面有放射状纹理，有排列不规则的小孔；本实验还对粉背南蛇藤根药材进行薄层鉴别研究，结果表明，3批供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，分离度较好，斑点显色清晰。实验中对展开系统、提取溶剂、点样量等条件及方法耐用性进行了考察，结果重复性好，专属性强，该法鉴别粉背南蛇藤药材操作简单，快速准确，可作为粉背南蛇藤药材的质量控制方法之一。

本研究参照《中国药典2015版》(四部)(通则0832第二法、通则2302、通则2201)分别对粉背南蛇藤药材进行水分、灰分、浸出物的检查。3个批次粉背南蛇藤水分平均值为10.61%、总灰分平均值为4.95%、酸不溶性灰分平均值为2.50%、水溶性浸出物平均值为15.52%。该研究制定的方法操作简便，可有效控制粉背南蛇藤质量，该方法将为黔产粉背南蛇藤载入地方标准提供实验基础和科学依据。