黑木耳菌种培养基优化

王旭，胡志强，亢学平，杜忠伟，李健，王鑫

(延边朝鲜族自治州农业科学院，吉林 延吉 133000)

黑木耳 [Auriculariaauricula-judae(Bull.) Quél.]，别名木耳、黑耳、细耳、木蛾，隶属于真菌界真菌门异担子菌纲木耳目木耳科木耳属[1-2]。黑木耳味道鲜美、营养丰富，享有“素中之荤”、“菌中瑰宝”的美誉；《本草纲目》中记载木耳性平、味甘、补气血、止血活血，有滋润、润肺、通便之功能，也是一种价值很高的药用菌[3]。

近年来，食用菌已成为农业产业结构调整的主力军，是脱贫攻坚的抓手，也是乡村振兴的推手[4]。由于黑木耳具有可食、可药的特点，其市场需求量日益增长，黑木耳栽培规模不断扩大。随着食用菌栽培品种和栽培方式多元化发展，品牌发展与种质资源的不断创新，以及设施化、集约化程度的提高，优质的“中国造”菌种和质量标准已成为限制企业、合作社以及菇农发展的首要因素[5-7]。为此，通过对黑木耳菌种培养基配方进行筛选、优化，为黑木耳菌种培养和种质资源保育[8-10]及深层发酵提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 供试菌种

供试菌种为“延农科1号”，由延边州农业科学院食用菌研究所提供。

1.2 供试培养基

配方1. PDA培养基(CK)：马铃薯200 g(用浸出液)，葡萄糖20 g，磷酸二氢钾3 g，硫酸镁1.5 g，水1000 mL，pH自然。

配方2. CPDA培养基：马铃薯200 g(用浸出液)，葡萄糖20 g，磷酸二氢钾2 g，硫酸镁0.5 g，维生素B110 mL，水1000 mL，pH自然。

配方3. 黄豆粉、麦麸培养基：黄豆粉5 g(用浸出液)，麦麸10 g(用浸出液)，葡萄糖20 g，水1000 mL，pH自然。

配方4. 木屑浸出液培养基：马铃薯200 g(用浸出液)，阔叶树木屑50 g(用浸出液)，葡萄糖20 g，水1000 mL，pH自然。

配方5. 黑木耳菌丝培养基：马铃薯200 g(用浸出液)，黑木耳废菌包(配方：78%木屑，20%豆粕，1%石灰，1%石膏，用浸出液)50 g，葡萄糖20 g，磷酸二氢钾3 g，硫酸镁1.5 g，水1000 mL，pH自然。

1.3 试验方法

使用 PDA 培养基对供试菌种进行活化培养。分别以PDA、CPDA、黄豆粉、麦麸浸、木屑、黑木耳菌丝为试验材料，开水煮30 min，纱布过滤，留其浸出液备用。

1.3.1 固体菌种培养方法。固体培养基按上述配方加入琼脂20 g，煮至琼脂溶化。分别将供试培养置于三角瓶中，121 ℃高压灭菌30 min。将不同试验培养基分别倒入培养皿(0～9 cm)中，每个培养皿装 15 mL，冷却后接种(接种块大小 0～0.7 cm)，置于恒温培养箱中暗光培养10天，每组 5 个重复。

1.3.2 液体菌种培养方法。液体菌种培养基制作时，按上述配方制做供试培养基，250 mL三角瓶中灌装150 mL培养基，121 ℃高压灭菌30 min。冷却后接种5块接种快(接种块大小 0～0.2 cm)，置于 25 ℃摇床中培养7天，每组5个重复。

1.3.3 测量、分析方法。固体培养自接种24 h后，间隔24 h观察、记录菌丝长势、菌落颜色及菌落边缘整齐度，利用游标卡尺十字交叉法测量，并记录菌落的生长直径；液体培养自接种24 h后，间隔24 h观察、记录培养液颜色、菌落颜色、菌丝球均匀度，测定不同培养基配方黑木耳液体培养基菌丝体生物量。将培养好的菌丝体用蒸馏水洗涤、沉淀3次，真空抽滤，收集菌丝体，置于85 ℃烘箱中干燥，至恒重用电子天平称重,记录分析。相关数据采用 Excel 2007、SPSS进行数据处理和统计分析。

2 结果与分析

2.1 固体培养基对黑木耳菌丝生长的影响

固体培养基对黑木耳菌丝生长情况的影响见表 1。由表1可知，黑木耳菌丝对供试培养基有较好的适应性，菌落边缘整齐、洁白；黑木耳菌丝对黑木耳废菌包及黄豆粉、麦麸浸出液培养基的长势较快，且稠密、粗壮，木屑浸出物和CPDA次之(较密)，均高于对照；且黑木耳菌丝生长速度结果与菌丝长势结果相似。综合对比，配方4和配方5，黑木耳菌丝生长优于其它。

表1 固体培养基对黑木耳菌丝生长的影响

2.2 液体培养基对黑木耳菌丝生长的影响

液体培养基对黑木耳菌丝生长情况的影响见表 2。由表可知，黑木耳菌丝体在不同培养基质中略有差别，配方1、2、5菌丝培养液颜色澄清，菌丝球颜色洁白，配方3、4略有浑浊，配方4菌丝球颜色浅黄，配方3菌丝球颜色洁白，各培养基菌丝球均匀；黑木耳菌丝体对黑木耳废菌包及黄豆粉、麦麸浸出液培养基的菌丝体生物量高于其它对照。结果表明，配方3和配方5综合表现良好，黑木耳液体菌丝生物量和菌丝球均匀度及颜色略好于其它配方。

表2 液体培养基对黑木耳菌丝生长的影响

3 结论与讨论

黑木耳菌种的固体和液体培养过程中，不同配方对黑木耳菌丝及菌丝体的生长略有不同。试验结果表明，配方3和配方5黑木耳菌丝综合长势更好，为黑木耳菌种培养的最佳培养基。

黑木耳废弃菌包仍具有充分营养物质，供黑木耳菌丝利用；黄豆粉、麦麸浸出液为黑木耳菌丝生长提供充足的营养物质。供试菌种的菌丝对黄豆粉、麦麸、木屑等物质的吸收效果较好，黑木耳废菌包和黄豆粉、麦麸浸出液对黑木耳菌种培养效果最佳。同时，其它配方下黑木耳菌丝长势略有差别，但也是值得参照的黑木耳菌种培养的配方。

通过对比实验表明，培养条件和培养物质也是黑木耳菌种制作与培养的重要因素，研究不同接种量、温度、湿度、pH对黑木耳菌种培养的共同作用，对黑木耳的种质资源保育提供参考，也是今后研究“中国造”优质菌种和质量标准及深层发酵等相关工作的重点和方向。