阴道镜活检、Ki-67、VEGF、OLFM4在子宫颈癌与癌前病变中的诊断价值

曾妍

【摘要】 目的：分析阴道镜活检、细胞增殖核抗原67（Ki-67）、血管内皮生长因子（VEGF）、牛嗅素4（OLFM4）在子宫颈癌与癌前病变中的诊断价值。方法：回顾性分析2019年1月-2021年1月湖北六七二中西医结合骨科医院收治的278例子宫颈病变患者的临床资料，均经阴道镜活检，并采用免疫组织化学SP法检测Ki-67、VEGF、OLFM4在不同子宫颈病变患者中的表达，以术后组织病理检查为金标准，分析阴道镜活检、Ki-67、VEGF、OLFM4诊断子宫颈病变的价值。结果：组织病理结果显示，278例宫颈病变患者中，慢性子宫颈炎72例，CINⅠ 46例，CINⅡ 60例，CINⅢ 40例，子宫颈癌60例。与组织病理結果对照，阴道镜活检诊断慢性子宫颈炎的符合率为95.83%;诊断CINⅠ的符合率为71.74%;诊断CINⅡ的符合率为75.00%;诊断CINⅢ的符合率为72.50%;诊断子宫颈癌的符合率为86.67%。Ki-67、VEGF、OLFM4的阳性表达率均随病变级别的升高而升高，差异均有统计学意义（P<0.05）。Ki-67、VEGF、OLFM4在子宫颈癌中的阳性表达率均高于慢性子宫颈炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论：阴道镜活检、Ki-67、VEGF、OLFM4诊断子宫颈癌与癌前病变具有一定价值，可作为筛查子宫颈癌的辅助方法，值得临床推广应用。

【关键词】 子宫颈癌 癌前病变 阴道镜活检 细胞增殖核抗原67 血管内皮生长因子 牛嗅素4

Diagnostic Value of Colposcopy Biopsy， Ki-67， VEGF and OLFM4 in Cervical Cancer and Precancerous Lesions/ZENG Yan. //Medical Innovation of China， 2022， 19（10）： -127

[Abstract] Objective： To analyze the diagnostic value of colposcopy biopsy， cell proliferation antigen 67

（Ki-67）， vascular endothelial growth factor （VEGF） and bovine OLFM4 （OLFM4） in cervical cancer and precancerous lesions. Method： The clinical data of 278 patients with cervical lesions treated in Hubei 672 Orthopaedic Hospital of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine from January 2019 to January 2021 were retrospectively analyzed. All of them were biopsied by colposcopy， and the expressions of Ki-67， VEGF and OLFM4 in patients with different cervical lesions were detected by immunohistochemical SP method. The value of colposcopy biopsy， Ki-67， VEGF and OLFM4 in the diagnosis of cervical lesions was analyzed using postoperative histopathological examination as the gold standard. Result： Histopathological results showed that among the 278 patients with cervical lesions， there were 72 patients with chronic cervicitis， 46 patients with CINⅠ， 60 patients with CINⅡ， 40 patients with CINⅢ， and 60 patients with cervical cancer. Compared with histopathological results， the coincidence rate of chronic cervicitis diagnosed by colposcopy biopsy was 95.83%; the coincidence rate of CINⅠ diagnosis was 71.74%; the coincidence rate of CINⅡ diagnosis was 75.00%; the coincidence rate of CINⅢ diagnosis was 72.50%; the coincidence rate of cervical cancer diognosis was 86.67%. The positive expression rates of Ki-67， VEGF and OLFM4 increased with the increase of lesion grade， the differences were statistically significant （P<0.05）. The positive expression rates of Ki-67， VEGF and OLFM4 in cervical cancer were higher than those in chronic cervicitis， CINⅠ， CINⅡ and CINⅢ， with statistical significance （P<0.05）. Conclusion： Colposcopy biopsy， Ki-67， VEGF and OLFM4 have certain value in the diagnosis of cervical cancer and precancerous lesions， and can be used as an auxiliary method for cervical cancer screening， which is worthy of clinical application.

[Key words] Cervical cancer Precancerous lesion Colposcopy biopsy Proliferating cell nuclear antigen 67 Vascular endothelial growth factor Olfactomedin 4

First-author’s address： Hubei 672 Orthopaedics Hospital of Integrated Chinese and Western Medicine， Wuhan 430000， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2022.10.029

子宫颈病变是妇科常见病，包括子宫颈炎、子宫颈上皮内瘤变（CIN）及子宫颈癌等，其中子宫颈癌是妇科常见恶性肿瘤，近年来其发病率上升，且年轻化，在女性恶性肿瘤中排第2位，仅次于乳腺癌[1]。据统计，全球每年子宫颈癌发病率为45万，我国每年新增病例约10万[2]。而CIN是癌前病变阶段，因此及时干预可降低子宫颈癌风险[3]。临床常采用阴道镜检查，对子宫颈癌及癌前病变的早诊断及治疗与预后有一定价值。但其对操作者要求较高，且无法取得子宫颈管内病变组织，从而限制了其准确性，导致误诊[4]。近年来生物标记物逐渐用于子宫颈癌与癌前病变筛查中，抗原67（Ki-67）是核抗原蛋白，常用于辅助子宫颈癌及其癌变前的早期诊断[5]。血管内皮生长因子（VEGF）能促进淋巴管新生，对CIN临床治疗、预后有一定价值[6]。牛嗅素4（OLFM4）是抗细胞凋亡的糖蛋白，参与癌细胞黏附和转移[7]。鉴于临床采用阴道镜活检联合Ki-67、VEGF、OLFM4诊断子宫颈癌与癌前病变的诊断价值相关报道较少，因此本研究进一步分析。旨在提高子宫颈病变检出率。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 回顾性分析2019年1月-2021年1月湖北六七二中西医结合骨科医院收治的278例子宫颈病变患者的临床资料，年龄30～65岁，平均（38.46±6.22）岁。（1）纳入标准：①经术后组织病理检查确诊;②有性生活史;③临床资料完整。（2）排除标准：①合并其他恶性肿瘤者;②合并器质性疾病者;③盆腔放疗等相关病史。本研究经医院伦理学委员会批准

1.2 方法

1.2.1 组织病理学检测 行常规病理组织制片，即于移行带3、6、9、12点依次取材，同时应用甲醛溶液10%固定选取的子宫颈组织，通过常规的包埋法将其制备成蜡块同时送至病理科检测。诊断标准，子宫颈癌：具有鳞状上皮分化（即角化），细胞间桥，而无腺体分化或者黏液分泌;癌前病变：慢性子宫颈炎，表现为白细胞、淋巴细胞浸润;CINⅠ，輕度非典型增生，细胞异型性轻，排列不整齐，异常增生的子宫颈细胞仅限于上皮层的下1/3;CINⅡ，中度上皮内瘤变，中度非典型增生，细胞异型性明显，排列较紊乱，异常增生的子宫颈细胞占据上皮层的下2/3;CINⅢ，高度上皮内瘤变，重度非典型增生，细胞异型性显著，失去极性，异常增生的子宫颈细胞扩展至上皮层的下2/3以上。

1.2.2 阴道镜活检 阴道镜采用XD-6000Y型。避开月经期，窥器放入阴道后呈半开状，暴露阴道穹窿，用棉球擦去分泌物，调整焦距，用5%醋酸的棉球浸湿子宫颈，反应3 min后用5%复方碘液棉球浸湿子宫颈，对病变面积较大者采用Leep术活检;对可疑部位行3、6、9、12点作活检。进行组织学检查。阴道镜图像诊断：（1）正常转化区，柱状上皮小岛，腺开口和纳氏腺囊肿;（2）子宫颈湿疣;（3）醋白上皮;（4）白嵌二联征;（5）白嵌三联征;（6）子宫颈癌：移行区有醋白上皮、粗镶嵌、粗点状血管及其他异型血管同时出现或单独出现并可伴有猪油状、微小脑回状上皮改变;（7）阴道镜检查不满意：移行带上移至子宫颈管内或因接触性出血严重无法检查。（1）为阴道镜阴性诊断，（2）～（7）为阳性诊断。其中阴道镜阴性诊断为慢性子宫颈炎;子宫颈湿疣、醋白，上皮组织学预测为CINⅠ;二联征组织学预测为CINⅡ;三联征组织学预测为CINⅢ;子宫颈癌组织学预测为子宫颈癌。

1.2.3 Ki-67、VEGF、OLFM4检测 鼠抗人Ki-67单克隆抗体及鼠抗人VEGF单克隆抗体均为福州迈新生物技术开发公司产品。OLFM4兔抗人多克隆抗体为英国Abcam公司。均采用免疫组化SP法染色。免疫组织化染色：切片脱蜡，梯度酒精水化;行微波修复。将切片放入含柠檬酸盐缓冲液的容器内，微波炉加热13 min，温度98 ℃取出容器，自然冷却，PBS冲洗3 min×3次;阻断内源性过氧化物酶：滴加3%过氧化氢，室温下孵育10 min，PBS冲洗3 min×3次;滴加非免疫动物血清，室温下孵育10 min。除去血清，滴加即用型Ki-67的一抗，4 ℃孵育过夜，PBS冲洗3 min×3次;滴加生物素标记的二抗，室温下孵育10 min，PBS冲洗

3 min×3次;滴加过氧化物酶溶液，室温下孵育10 min，PBS冲洗3 min×3次;滴加DAB溶液显色;苏木素复染、脱水，二甲苯透明，中性树脂封片。结果判读：Ki-67、VEGF、OLFM4阳性产物为棕黄色颗粒，表达强度按阳性细胞比例及分布情况判读：阴性（-）：阳性细胞数<5%;弱阳性（+）：阳性细胞数为5%～24%;中度阳性（++）：阳性细胞数为25%～50%;强阳性（+++）：阳性细胞数>50%。

1.3 观察指标 以术后组织病理检查为金标准，分析阴道镜活检对慢性子宫颈炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ及子宫颈癌诊断情况;并统计Ki-67、VEGF、OLFM4在慢性子宫颈炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ及子宫颈癌中的阳性表达率。

1.4 统计学处理 选用统计学软件SPSS 20.0对分析和处理，计数资料以率（%）表示，行字2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 阴道镜活检与组织病理诊断对照 术后组织病理结果显示，278例子宫颈病变患者中，慢性子宫颈炎72例，CINⅠ 46例，CINⅡ 60例，CINⅢ 40例，子宫颈癌60例。其中阴道镜活检诊断慢性子宫颈炎的符合率为95.83%;诊断CINⅠ的符合率为71.74%;诊断CINⅡ的符合率为75.00%;诊断CINⅢ的符合率为72.50%;诊断子宫颈癌的符合率为86.67%，见表1。

2.2 Ki-67在子宫颈病变中的表达 Ki-67的阳性表达率随病变级别的升高均有所升高，差异有统计学意义（P<0.05）;Ki-67在子宫颈癌中的阳性表达率高于慢性子宫颈炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ，差异均有统计学意义（P<0.05）。见表2。

2.3 VEGF在子宫颈病变中的表达 VEGF的阳性表达率随病变级别的升高均有所升高，差异有统计学意义（P<0.05）;VEGF在子宫颈癌中的阳性表达率高于慢性子宫颈炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ，差异均有统计学意义（P<0.05）。见表3。

2.4 OLFM4在子宫颈病变中的表达 OLFM4的阳性表达率随病变级别的升高均有所升高，差异有统计学意义（P<0.05）;OLFM4在子宫颈癌中的阳性表达率高于慢性子宫颈炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ，差异均有统计学意义（P<0.05）。见表4。

3 讨论

目前认为，CINⅡ、CINⅢ患者与高危型HPV密切相关，CINⅠ病理形态和阴道镜下改变与HPV感染无明显区别[8]。有学者认为，CINⅡ、Ⅲ是癌前病变，CINⅠ仅是自我限制的性传播感染的形态[9]。因此子宫颈癌可早期预防。但由于早期子宫颈癌很难用肉眼识别，常规子宫颈活检阳性率不高。而电子阴道镜分辨率较高，能够观察子宫颈柱状鳞状上皮边缘区域，观察子宫颈上皮及血管较小病变[10]。同时在检查中使用醋酸溶液可定位疑病变部位，从而提高诊断准确性和可靠性，且道镜可检测到肉眼无法检测到的亚临床病变，从而大大降低了漏诊率[11]。本研究显示，阴道镜活检诊断慢性子宫颈炎的符合率为95.83%;诊断CINⅠ的符合率为71.74%;诊断CINⅡ的符合率为75.00%;诊断CINⅢ的符合率为72.50%;诊断子宫颈癌的符合率为86.67%，与罗古坡等[12]研究相似，提示阴道镜活检诊断子宫颈癌与癌前病变中具有一定价值，但均具有一定误诊率，这是由于活检不能替代子宫颈锥术后的组织病理诊断，且阴道镜子宫颈管内的病灶难以暴露，因此存在一定误诊率。

研究表明，Ki-67与恶性肿瘤发展、转移、预后具相关性[13-14]。Ki-67是细胞分裂和增殖的蛋白，可反映细胞的增殖活性及异常增殖、恶性病变、新生血管等病理过程的程度，其高表达表明肿瘤细胞增殖活跃，是肿瘤增殖活性分级的指标[15]。而恶性肿瘤生长和转移依赖于血管生成，VEGF是肿瘤血管生成过程中最特异的促血管生成因子，能刺激内皮细胞的生长和血管的形成[16-18]。同时新生血管结构不完善和血管通透性的增加可导致细胞空间的扩大，致使癌细胞进入[19]。OLFM4是糖基化细胞外基质蛋白，分通过与凝集素和钙粘蛋白相互作用调节细胞黏附，调控细胞周期，促进细胞增殖，与肿瘤组织的分化相关[20]。本研究显示，Ki-67、VEGF、OLFM4的阳性表达率均随病变级别的升高而升高，差异均有统计学意义（P<0.05），提示Ki-67、VEGF、OLFM4阳性情况随子宫颈病变进展逐渐增高，能够反映正常子宫颈、CIN组织及子宫颈细胞增殖和分化，可成为高危人群筛查的指标。但由于本研究纳入例数较少，可影响结论，下一步可扩大样本量进一步论证，并分析阴道镜活检联合Ki-67、VEGF、OLFM4对子宫颈病变的诊断价值，为临床提供参考。

综上所述，阴道镜活检、Ki-67、VEGF、OLFM4诊断子宫颈癌与癌前病变具有一定价值，可成为高危人群筛查的指标，值得临床推广应用。

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（收稿日期：2021-07-20） （本文编辑：张爽）