奶牛隐性乳房炎诊断方法的研究进展

李桂伟

摘要：奶牛隐性乳房炎是奶牛中的常见疾病之一，对奶牛健康生产危害很大。文章对奶牛隐性乳房炎的诊断方法进行了总结，对乳汁体细胞诊断方法、酶学诊断方法和血清学炎性蛋白指标诊断方法等3种常见的诊断方法进行了详细的分析，可使各奶牛养殖场根据实际情况选择相应的检测方法，更好地控制奶牛群中隐性乳房炎的发生，减少经济损失。

关键词：奶牛;隐性乳房炎;诊断方法

中图分类号：S857.2+6文献标志码：A

乳房炎是造成奶牛养殖业经济损失最为严重的疾病之一。奶牛发生乳房炎后不仅其产奶量、乳汁品质均有不同程度的下降，治疗费用增加，而且炎性乳汁还危害着公共卫生和消费者的健康，重症乳房炎患牛因产乳量的明显减少甚至失去泌乳能力而被淘汰，因此，做好奶牛乳房炎精确诊断与早期预警对乳房炎防控具有重要意义。长期以来，一些学者一直致力于奶牛乳房炎的诊断研究，一些新的诊断方法不断涌现，文章综合了近年来有关奶牛乳房炎诊断的研究成果，为奶牛乳房炎诊断提供参考。

1 乳汁体细胞诊断方法

乳腺内体细胞（somatic cell，SCC）为免疫细胞及其它细胞的统称。健康奶牛乳汁中的体细胞数较少，主要由巨噬细胞（macrophage cell）、淋巴细胞（lymphocyte）、嗜中性白细胞（Neutrophil，PMN）和乳腺上皮细胞等组成，其中，巨噬细胞约占60%～88%，主要起保护功能并发起炎性反应，淋巴细胞约占10%～30%，中性白细胞约占1%～15%，上皮细胞约小于7%。当奶牛发生乳腺感染时，炎症因素能够导致乳汁中的体细胞数急剧增多，而且乳汁内的体细胞种类及其数量发生很大的变化[1]，其中中性粒细胞占绝大多数，占95%～99%。由于乳腺炎病原、病症，以及感染阶段的不同，乳汁中体细胞种类与数量也存在着明显的差异，其中，尤为嗜中性白细胞、淋巴细胞和巨噬细胞的变化明显[2，3]。一般情况下，乳汁中巨噬细胞的增多预示乳房发生慢性炎症、非化脓性炎症;淋巴细胞的增多预示为慢性炎症或发生病毒性感染;嗜中性白细胞增多则预示为急性炎症及炎症早期[4，5]。

奶牛乳汁体细胞数能相对准确地反映乳腺炎症的严重程度，并被广泛作为奶牛乳腺炎的诊断指标。IDF推荐使用体细胞检测和细菌学检测作为判定奶牛乳房炎的方法。随着DHI技术在国内牧场的逐渐普及，体细胞数的快速检测在奶牛乳房炎诊断，特别是隐性乳房炎诊断中发挥了重要作用。在十二烷基磺酸钠（C12H25SO3Na）等阴离子表面活性剂和碱性物质的作用下，脂类物质乳化，乳中体细胞的细胞膜被破坏，并释放出细胞DNA，DNA与其作用使乳汁产生沉淀或形成凝胶状。根据沉淀或凝胶的多少，能够间接判定体细胞数的数量[1]，从而诊断乳房的感染严重程度。根据此原理相继建立了显微镜直接计数法、体细胞仪计数法、荧光电子细胞计数法、粒子计数法、白细胞分类计数法等直接计数检验法，以及加利福尼亚乳房炎试验、苛性钠凝乳试验法、过氧化物酶试验等体细胞间接检验法，并用于隐性乳房炎的诊断。

随着研究深入，一些新的诊断方法相继出现。体细胞分型指数（DSCC）是指淋巴细胞与嗜中性粒细胞总数占体细胞数的比例，安朋朋等[5]研究了DSCC的变化规律，以及乳房炎致病菌对DSCC的影响，结果表明：体细胞评分与DSCC存在极显著相关性，且随着体细胞评分值的升高，DSCC波动范围逐渐减小;头胎牛、四胎以上奶牛的DSCC值显著高于二至三胎牛;细菌感染阳性样品DSCC（77.21%）极显著高于阴性样品（69.33%），但传染性致病菌感染与环境性致病菌感染的样品间DSCC无显著差异。由此表明，DSCC对于诊断乳房炎具有一定价值。

2 酶学诊断方法

在奶牛乳腺发生病原性感染后，致病病原会引起乳腺组织发生一系列的炎性变化，并动员大量免疫细胞至乳腺组织内，其中90%为嗜中性多形核白细胞，大量嗜中性多形核白细胞进入炎性乳腺，并吞噬入侵的病原，致使体细胞数持续升高。奶牛发生乳房炎时，乳腺内的炎性细胞释放的炎性成分将造成乳腺微血管的通透性增加，破坏血乳屏障，血液中的体细胞、溶酶体酶和急性期蛋白等成分渗入至牛乳中，并导致N-乙酰-β-氨基葡萄糖苷酶（NAG）等一些酶的生物活性升高。NAG存在于乳腺组织和白细胞中，当乳腺细胞受到损伤或白细胞数升高时，NAG活性会显著升高[6]，因此，NAG活性与奶牛隐性乳房炎发生密切相关，其活性能够反应乳腺是否存在感染的风险。NAG能够预示分泌型细胞的状态及乳腺炎发病程度，目前，已有商业化的NAG测定试剂盒，并用于隐性乳房炎的诊断中[7-9]。

髓过氧化物酶（myeloperoxidasedeficiency，MPO）是氧依赖性杀菌系统的重要组成部分。碱性磷酸酶（AKP）是机体防御感染的因子之一[10]。刘小倩等[6]在研究长期饲喂高精料可否致奶牛发生内源性乳房炎的试验中，应用ELISA试剂盒测定了乳及乳腺组织中NAG、AKP、MPO、NAG及LPS炎性指标，试验表明，牛乳中NAG、AKP活性显著上升，LPS含量极显著升高，其它指标差异不显著，结果说明NAG、LPS和AKP可作为隐性乳房炎的诊断指标。印度学者建立了一种斑点试验，根据奶样中胰蛋白酶抑制剂的检测结果诊断隐性乳房炎，该方法敏感性和特异性分别为88.2%和89.8%。Ball等通過检测N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶检测隐性乳房炎;黄权利等认为乳房炎乳的LDH、ACP、GOT和GPT活性均增加。葛影影等[11]也证实，奶牛血清ALB水平及NAG活性的显著变化与乳房炎的感染和发生关系密切，故这些指标可作为诊断奶牛乳房炎和乳腺组织损伤程度的血清学敏感指标。

髓过氧化物酶是PMN、单核细胞、巨噬细胞释放的嗜天青颗粒的主要成分，已经证实，MPO可作为乳房炎的诊断指标。瑞典学者制备了奶牛MPO单克隆抗体，建立了针对牛乳MPO的MPO-ELISA方法。牛国庆等[12]选取隐性乳房炎牛，进行奶样MPO测定试验。结果奶样中SCC和MPO浓度的相关系数值为0.257，随着SCC增高，MPO水平也增高，两者具有正相关性。MPO与CMT的相关系数为0.546，相关显著。结果表明，奶液中MPO可作为隐性乳房炎指示物，利用ELISA方法检测奶样中MPO的方法快速、简便，可对奶牛隐性乳房炎作出早期诊断。40766C9D-955F-457E-A670-A79A9F94D75C

3 血清学炎性蛋白指标诊断方法

炎症会激发动物机体产生急性炎性反应。在炎症过程中急性期蛋白含量将显著升高。奶牛发生隐性乳腺炎后，结合珠蛋白（haptoglobin，Hp）、α1-酸性糖蛋白（α1-accelerated graphics port，AGP）、淀粉样蛋白 A（serum amyloid A protein，SAA）等会随着炎症的发展而增加，且C-反应蛋白（C-creative protein，CRP）也与SCC具有一定相关性。在急性炎症反应期，动物在肝脏中血合成清淀粉样A蛋白、结合珠蛋白（Hp）等急性期蛋白抵御感染。Eckersall等报道，急性反应期最显著的特征是肝脏中合成急性期蛋白水平升高，其中SAA、Hp是目前认为最敏感的指标。

结合珠蛋白（Haptoglobin，Hp），又称触珠蛋白，是一种酸性糖蛋白。健康牛血清Hp浓度低于20mg/L，乳房炎牛2d内升至2 g/L。Hp还可作为子宫炎、肠炎、肺炎等指征。血清淀粉样蛋白A（Serum amyloid，SAA）在急性炎症刺激下，血清SAA1、SAA2水平在5hrs～6hrs升高约1000倍。α1-酸性糖蛋白（α1-Acid，glycoprotein，α1-AGP），又稱类黏蛋白，蒋磊[13]选取健康奶牛和不同发病程度隐性乳房炎患牛，采用α1-酸性糖蛋白ELISA试剂盒测定各组乳清样品中α1-酸性糖蛋白的含量，结果显示，隐性乳房炎组奶牛乳清中α1-酸性糖蛋白的含量显著或极显著高于健康组奶牛，且随着奶牛隐性乳房炎病情的加重及乳中体细胞数的增加，乳清中α1-酸性糖蛋白的含量呈现出递增趋势。研究证实，乳腺炎症引发的乳腺损伤及乳中体细胞数增加与乳清中α1-酸性糖蛋白的含量呈正相关性。研究证实，乳房炎期间乳清中转铁蛋白和白蛋白含量升高，而α乳清蛋白和β乳球蛋白含量降低。程郁昕等研究表明，奶牛血清中α乳蛋白与体细胞计数相关性为0.60，血清中乳蛋白可作为乳房炎诊断依据。奶牛血清或乳汁中结合珠蛋白、血清淀粉样蛋白和α-酸性糖蛋白等在乳房炎诊断中具有重要价值[14]。

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[15]NY/T 2692-2015《奶牛隐性乳房炎快速诊断技术》[S].11.220-B41，农业农村部，2015-02-09，2015-05-01.

Research progress on diagnostic methods of recessive mastitis in dairy cows

LI Guiwei

（Animal Husbandry and Veterinary Branch， Heilongjiang Academy of Agricultural Sciences， Qiqihar 161005， Heilongjiang China）

Abstract：Recessive mastitis is one of the common diseases in dairy cows， which is very harmful to the healthy production of dairy cows. Articles on recessive mastitis cows diagnostic methods are summarized， the milk somatic cell diagnostics， enzymology diagnosis method and serological inflammatory protein diagnostic methods of three common methods of indicators has carried on the detailed analysis， can make each cow farms according to actual situation to choose the corresponding detection methods， better control the occurrence of recessive mastitis in dairy herd， reduce economic loss.

Keywords：dairy cow; Latent mastitis; Diagnostic methods第41卷第2期2022年4月 黑龍江水产Northern Chinese Fisheries研究报告The research report

作者简介：李桂伟（1979.3-），女，黑龙江省农业科学院畜牧兽医分院助理研究员。研究方向：预防兽医学。邮箱：lgwzll123@163.com。40766C9D-955F-457E-A670-A79A9F94D75C