应用全自动血液细胞分析仪检测有核红细胞的临床价值

刘彬

(新安县第二人民医院 检验科,河南 洛阳 471800)

有核红细胞也被称为幼稚红细胞，泛指血液中尚未发育成熟的红细胞，根据其内部含有的细胞核大致可分为原始红细胞、早幼红细胞、中幼红细胞和晚幼红细胞四种。在正常情况下，成人外周血液中并不能检测到有核红细胞，若该细胞检测为阳性则提示人体出现病理性改变。显微镜镜检是临床测定有核红细胞计数最常见的方式，但鉴于其操作步骤复杂，耗时较长，计数结果的准确性容易受到技术人员主观因素的影响，因此临床始终致力于寻找一种快速且准确的检测方式取代传统镜检法在有核红细胞检测中的应用。近年来，随着检测技术的不断发展，越来越多的全自动生化检测设备在临床广泛应用，全自动血液细胞分析仪也成为外周血有核红细胞计数检测的新方式，该设备检测便捷性也备受临床操作技师认可，但机械化的实验操作能否保障检测结果的准确性临床始终存在争议。基于此点，本研究选择84 例行有核红细胞检测患者的血液标本进行研究，以显微镜检查法为金标准，分析全自动血液细胞分析仪有核红细胞检测中的应用价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2019年2月至2021年2月在新安县第二人民医院行有核红细胞检测的84 例受检者为研究对象，其中男性44 例、女性40 例；年龄1～55 岁、平均(38.94±5.45)岁；根据科室分布情况显示：84 例患者中血液科患者35 例、新生儿科15 例、肿瘤科23 例、其他科室11例。所有研究对象均需排除溶血和黄疸症状，无脂血的情况严格遵守《临床化学检验血液标本的收集与处理》(WS/T225-2002)的要求进行操作。标本的采集均在受检者知情同意的前提下进行，不涉及患者隐私和伦理问题。本研究已通过伦理委员会批准通过。

1.2 方法

1.2.1 仪器与试剂

检测设备选用HORIBA ABX SAS(法国)生产的全自动血液分析仪(国械注进：20142405820；型号：PENTRA DF NEXUS)、 奥林巴斯OLYMPUS生物显微镜(粤械注准：20152220084；型号：CX23LEDRFS1C)、山东省成武县华博医疗器械有限公司生产的一次性EDTAK2 抗凝管和采血针和珠海贝索生物技术有限公司生产的瑞氏染液。

1.2.2 检测方法

全自动血液细胞分析仪检测：在血液标本准备完好的情况下，技术人员严格损伤全自动血液分析仪操作说明书进行检测，所有检测均在血液标本采集后2 h 内完成。在检测期间NRBC 计数和百分比均应在通过有核红细胞通道在进行监测。

显微镜镜检：选择一只加入4 mL 稀释液的试管，利用校准过的微量吸量管取20 μg 的末梢血液，将其全部吹入稀释液中混匀；随后采用人工涂片和瑞氏染色的方式将盖玻片放置在计数板上，利用吸管将混匀的红细胞悬液充入计数室，静置2～3 min。最后采用高倍镜按照“ 计上不计下、计左不计右”的原则对中央大方格内四角和正中的5 个中方格的红细胞边线上的细胞进行计数。有核红细胞计数结果以白细胞计数与有核红细胞百分比相乘表示。

1.3 观察指标

(1)统计两种检测方式的检测结果，以血液标本中检测出有核红细胞视为阳性，未检测出有核红细胞则为阴性，以显微镜镜检结果为金标准，分析全自动血液分析仪的诊断效能，包括特异度、灵敏度、阳性预测值、阴性预测值和准确度。同时两种检测方式均为阳性的标本结果进行线性回归分析，以显微镜镜检法的测定值为Y，全自动血液分析仪的测定值为X，得出线性回归方程，分析两种检测方式间的关系。

(2)另外根据全自动血液分析仪测定有核红细胞计数的绝对值对血液标本进行低值、中值和高值的分类，其中低值绝对值≤10×10/L，中值绝对值在(10～20)×10/L，高值绝对值＞20×10/L，计算三个类别的均值、变异系数，评价标本批内精密度。

(3)分别在低值标本、中值标本和高值标本中随机抽取1 份标本为研究对象，将其放置在温室条件下，分别在放置1 h、2 h、4 h、6 h、8 h、12 h、24 h 和48 h 后，采用全自动血液分析仪测定有核红细胞，记录各阶段试验结果，计算平均值和批内变异系数值，全自动血液分析仪测定结果的稳定性。

1.4 方法

2 结果

2.1 两组检测方式阳性检出结果比较

全自动血液分析仪检出阳性标本46 份、占比54.76%，阴性标本38 份、占比45.24%；显微镜镜检法检出阳性标本49 份、占比58.33%，阴性标本35 份、占比41.67%；两种检测方式对比，差异无统计学意义(χ=0.218，=0.641)。以显微镜镜检法为金标准，全自动血液分析仪诊断特异度97.14%(34/35)、灵敏度91.84%(45/49)、阳性预测值97.83%(45/46)、阴性预测值89.47%(34/38)、准确度94.05%(79/84)，见表1。

表1 两组检测方式阳性检出结果比较

对45 例阳性标本测定值进行线性回归分析显示，显微镜镜检法与全自动血液分析仪测定值之间存在线性关系，得出回归方程Y=0.7483X+1.8191，差异有统计学意义(=0.7618，＜0.05)，见图1。

图1 阳性标本显微镜镜检法与全自动血液分析仪测定值线性回归曲线图

2.2 三组全自动血液分析仪测定标本批内精密度比较

全自动血液分析仪测定低值标本、中值标本和高值标本有核红细胞批内变异系数值(3.059%、3.429%、3.711%)均小于性能要求变异系数(5%)，测定结果合格，见表2。

表2 三组全自动血液分析仪测定标本批内精密度比较

2.3 三组全自动血液分析仪测定标本的稳定性比较

全自动血液分析仪测定低值标本、中值标本和高值标本的有核红细胞值无明显变化，批内变异系数(1.685%、1.421%和2.007%)均低于性能要求变异系数(5%)，测定结果稳定较好，见表3。

表3 三组全自动血液分析仪测定标本的稳定性比较

3 讨论

经研究表明，当人体血液中出现有核红细胞时提示其机体正处于病理状态中，当它在儿童和成人外周血液中出现时提示患者可能存在骨髓损伤或潜在的严重疾病，因此对该项指标测定在临床具有重要意义。既往，人工显微镜计数一直被视为有核红细胞判定的金标准；但经大量临床实践发现，显微镜镜检法存在操作复杂的特点，在检测过程中容易受到推片、细胞染色、细胞分布差异以及人为主观判断等因素的影响，难以实现检测过程标准化。近年来，随着检测技术的不断发展，全自动血液分析仪在临床应用范围愈加频繁，它虽然提高临床多项指标检测的便捷性，但也同样存在漏诊和误诊情况。经研究发现，采用自动血液分析仪测定有核红细胞时会因其大量的存在增加仪器检测过程中的白细胞数量，部分仪器会对此生产可疑标记，帮助识别异常的细胞，最终的判定还需依赖手动检查。此外，还有部分分析仪无法检测出低水平的有核红细胞，导致细胞分类错误，白细胞计数的假阳性增高，因此准确的计数有核红细胞尤为重要。但目前，市场上可见的全自动血液分析仪琳琅满目，品质方面也参差不齐，因此临床对于该仪器的应用价值始终存在争议。

在本研究中，对84 例行有核红细胞测定患者的血标本依次给予全自动血液细胞分析仪和显微镜镜检法检测，结果显示，两种检测方式在有核红细胞阳性检出结果方面对比差异无统计学意义(＞0.05)；而在黄海丽的研究结果中也证实，仪器法阳性检出结果与镜检法阳性检出结果对比差异无统计学意义(＞0.05)，由此可以证实，两种检测方式在有核红细胞检出方面均有较高的应用价值。以显微镜镜检法为金标准，可以得出全自动血液细胞分析仪特异度97.14%、灵敏度91.84%、阳性预测值97.83%、阴性预测值89.47%、准确度94.05%，进一步证实，该检测方式的可靠性和有效性。分析其原因可以发现，本研究选用的PENTRA DF NEXUS 全自动血液分析仪是由法国生产的五分类血液分析仪，其基本原理是基于阻抗法、光学法和流式细胞术技术人体全血样本中的被分析物进行定量检测。其中阻抗法即为电阻抗法，它可以将细胞巡夜置于不导电的容器中，插入传感器，接通电源后可以使两侧电极产生稳定电流，帮助稀释的细胞巡夜经传感器外侧向内部流动，感应区内电阻因此增高，引起电压瞬间变化并形成脉冲信号，脉冲振幅越高，细胞体积越大，脉冲数量越多，细胞数量越多，进而得出血液中血细胞数量和体积值。利用光学法在进行检测时，其主要试剂是鞘液，鉴于人体红细胞的渗透压要略高于鞘液，使得红细胞中的血红蛋白从细胞中扩散开，让鞘液中的水分进入细胞中，在此情况下即使红细胞膜仍保持完好，但其也已与鞘液之间形成相同的折射指数，确保其可以清楚地呈现在激光下，而白细胞则始终保持在其最原始的结构形态下，利用光学流动通道进行分类和计数。流式细胞技术则是在细胞分子的水平上通过单克隆抗体对单个细胞及其他生物粒子进行多参数、快速的定量分析，不仅可以高速分析上万个细胞，还可以从一个细胞中测得多项参数，在临床实际用于过程中始终具备速度快、精确度高和准确性好的优势。通过对三项技术的融合，该型号的全自动血液细胞分析仪具备较高的检测性能，在有核红细胞的检测中可以快速有效地对其进行判定。

经本研究发现，全自动血液分析仪测定低值标本、中值标本和高值标本有核红细胞批内变异系数(3.059%、3.429%、3.711%)均小于性能要求变异系数(5%)；而利用全自动血液分析仪测定低值标本、中值标本和高值标本的有核红细胞在放置1 h、2 h、4 h、6 h、8 h、12 h、24 h 和48 h 后的水平发现无明显变化，批内变异系数(1.685%、1.421% 和2.007%)均低于性能要求变异系数(5%)，由此可见，全自动血液细胞分析仪在有核红细胞检测具有稳定性强、精密度高的优势。除此以外，对阳性标本两种方式测定值的线性分析发现，显微镜镜检法与全自动血液分析仪测定值之间存在线性关系，得出回归方程Y=0.7483X+1.8191，差异有统计学意义(R2=0.7618，＜0.05)，进一步证实，全自动血液细胞分析仪与显微镜镜检法之间有效良好的相关性，检测结果准确可靠。

综上所述，全自动血液细胞分析仪在有核红细胞检测具有性能良好，稳定性强及可重复操作等优势，并且其测定结果与显微镜镜检法相比具有良好的线性关系，在保障检测结果准确可靠方面效果突出，临床应用价值显著。但本研究仍存在研究样本较少的劣势，受研究条件限制，未对标本的携带污染率进行评估，未能进一步展现仪器的性能的一致性，导致检测结果的差异可能受仪器性能方面的影响，检测结果可能存在偏颇，期待在今后的研究中可以进一步扩大样本容量，完善研究方案。