贵州香猪保种场主要疫病的血清学抗体检测分析

陆涛峰， 吴延军， 赵 海， 李 倩， 王士勇， 吴曙光

(贵州中医药大学，贵州贵阳550025)

畜禽种质资源是畜牧业发展最基本的生产资料，也是人类生存发展最根本的物质基础和进行科学研究的宝贵素材，关系到国家安全以及经济的可持续发展。贵州香猪是贵州省特有的动物遗传资源，集中分布在贵州从江、剑河、榕江等地。贵州香猪具有肉质鲜美、抗逆性强、体型小、性成熟早、基因纯合度高等优点，不仅有重要的经济价值，而且可以作为良好的实验动物素材用于生命科学研究[1～3]。随着我国经济社会的快速发展，交通条件不断改善，养殖动物的流动性日益频繁，与此同时也给动物疫病防控工作带来巨大挑战。我国生猪疫病流行情况复杂，具有病种多、病情复杂、流行范围广等特点，防控形势异常严峻[4，5]。猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪O型口蹄疫病毒(FMDV-O)、非洲猪瘟(ASFV)是猪的重要传染性病毒，一旦猪群发生感染会对贵州香猪资源带来毁灭性打击。目前除了非洲猪瘟尚无有效疫苗进行免疫外，疫苗免疫是猪疫病防控的主要手段，及时接种疫苗并开展免疫水平监测可以为猪疫病防控提供精准的决策依据[6，7]。另外，对动物资源群体及时开展重要疫病的血清抗体监测，可以及时了解病原感染状况，特别是对于非免疫群体具有更重要的意义。因此，本研究对贵州香猪资源保种场开展主要疫病的血清抗体监测，以了解贵州香猪主要疫病的免疫或感染状况，为贵州香猪资源疫病防控提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 样品来源根据贵州香猪资源保种场的规模，按照我国农业行业标准《实验用猪微生物学等级及监测》(NY/T 3466—2019)对样品采集数量的要求，于2021年6月采集贵阳(A场)、从江(B场)、榕江(C场)、剑河(D场)4个贵州香猪资源保种场的香猪血清样品分别为19、16、12、20份，共计67份。疫苗免疫情况：贵阳(A场)于2021年3月集中免疫了PRRSV、CSFV、FMDV-O疫苗；从江(B场)于2021年4月免疫了PRRSV疫苗；榕江(C场)、剑河(D场)于2021年3月免疫了PRRSV、CSFV疫苗；各场均未免疫ASFV疫苗。

1.1.2 主要试剂和仪器PRRSV、CSFV血清抗体ELISA检测试剂盒，购自爱德士(IDEXX)生物公司；FMDV-O、ASFV血清抗体ELISA检测试剂盒，购自北京金诺百特科技有限公司；生物安全柜(HR40-IIA2)，购自青岛海尔公司；多功能冷冻离心机(ALLegra X-30R)，购自德国贝克曼公司；酶标仪(ReadMax 1900)，购自上海闪谱生物科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1 血清分离在动物空腹情况下采集前腔静脉血10 mL，放入盛有冰袋的保温箱中(约4 ℃)，运输到实验室，1 500 r/min离心10 min分离血清，分装后置于-80 ℃冰箱中保存备用。所有实验室操作均在生物安全柜中进行。

1.2.2 抗体检测检测前将待检血清置于60 ℃恒温金属浴中20 min进行病原灭活。PRRSV、CSFV、FMDV-O、ASFV血清抗体检测按照各ELISA试剂盒说明书进行，用酶标仪读取数值，按照各试剂盒判定标准对结果进行判定。若已免疫相关疫苗，则检测抗体为免疫抗体；若未免疫相关疫苗，则检测抗体为病毒感染抗体。

1.2.3 数据统计采用Excel 2010软件统计阳性个体数，计算各场阳性率和总阳性率。

2 结果

2.1 贵州香猪群体4种病毒血清抗体由表1可见：4个贵州香猪资源保种场的PRRSV、CSFV、FMDV-O 免疫抗体合格率(阳性率)分别为100%、74.6%、28.4%，ASFV抗体阳性率为0%。其中PRRSV、CSFV的免疫抗体合格率达到农业农村部规定≥70%的要求，FMDV-O的免疫抗体合格率未达到规定要求；在贵州香猪群体中未检测到ASFV抗体，表明没有ASFV感染情况。

表1 贵州香猪群体4种病毒血清抗体检测结果 %

2.2 不同保种场4种病毒血清抗体分析结合免疫情况分析不同贵州香猪资源保种场4种病毒血清抗体情况：贵阳(A场)保种场均免疫了PRRSV、CSFV、FMDV-O疫苗，且免疫效果良好；从江(B场)保种场只免疫了PRRSV疫苗，没有免疫CSFV和FMDV-O疫苗，抗体检测结果与免疫情况一致；榕江(C场)、剑河(D场)保种场只免疫了PRRSV和CSFV疫苗，没有免疫FMDV-O疫苗，抗体检测结果与免疫情况一致。除贵阳(A场)外，其他3个贵州香猪资源保种场对猪主要疫病的免疫不够重视，特别是列入《2021年国家动物疫病强制免疫计划》的FMDV-O均没有进行免疫。

3 讨论

3.1开展动物免疫抗体水平监测是检验疫苗免疫效果及动物机体免疫状况的重要手段，也是养殖场进行补充免疫和防疫措施落实的重要依据，并可以为政府主管部门科学制定动物疫病预防控制规划和疫病预警提供决策依据[8～10]。贵州香猪作为贵州特有的动物遗传资源，逐渐成为贵州特色养殖对外交流合作的名片[11]。本次监测结果表明，各香猪资源保种场均能按要求开展PRRSV疫苗免疫，且免疫合格率均为100%，但其他疫病的免疫情况参差不齐。从江(B场)没有免疫CSFV疫苗，抽检没有发现CSFV抗体阳性样品，表明香猪群体没有发生CSFV感染。从江(B场)、榕江(C场)、剑河(D场)未免疫FMDV-O疫苗，抽检没有发现FMDV-O抗体阳性个体，表明香猪群体没有发生FMDV-O感染。所有贵州香猪资源群体中均没有检测到ASFV抗体，表明香猪群体没有发生ASFV感染，防控效果良好。

3.2本次对贵州香猪资源保种场的监测结果发现最突出的问题是：列入《2021年国家动物疫病强制免疫计划》的FMDV-O疫苗免疫情况不理想，4个香猪资源保种场中有3个场存在未及时免疫的现象。建议相关保种场及时进行补免，调整免疫程序或者重新设计合理的免疫程序，并定期对猪群开展检测，提高群体免疫效果。随着贵州香猪资源保种场防疫意识增强和防疫水平的提高，再加上贵州山区天然的隔离屏障，个别贵州香猪资源保种场已具备开展非免疫实验动物猪生产的基本条件，因此贵州香猪实验动物化将是贵州香猪产业的1个增长点。

4 结论

本次监测结果表明，贵州香猪资源群体中没有ASFV感染；PRRSV、CSFV的免疫抗体水平达到国家规定的要求；部分贵州香猪资源保种场对猪主要疫病的免疫不够重视，特别是对FMDV-O应重视和加强免疫工作。