脑胶质瘤ABCC3、PEBP4及Anxa7的表达及与病理特征和预后的关系

赵树鹏 马继伟 王向阳 胡朝帅 梁甲宁 葛立可 赵新利

脑胶质瘤起源于神经上皮，且大多数属于恶性肿瘤，发病率占颅脑肿瘤的36%～63%［1］。早期脑胶质瘤患者可无明显症状，容易延误最佳治疗时机；且该病恶性程度高，临床治疗难度大，生存率低，严重威胁患者的生命安危［2］。随着细胞与生物分子研究的开展，脑胶质瘤与转移的分子机制及肿瘤治疗新靶点引起广泛关注［3］。据相关文献报道，磷脂酰乙醇胺结合蛋白4（phosphati⁃dylethanolamine⁃binding protein⁃4，PEBP4）与ATP结合盒转运蛋白3（ATP binding cassette subfamily C member⁃3，ABCC3）被证实表达于肺癌、胰腺癌、胶质瘤等多数肿瘤细胞中；膜联蛋白7（Annexin⁃7，Anxa7）具有抑癌作用，广泛存在于细胞中，在肿瘤细胞中呈现低表达［4⁃6］。本文主要研究脑胶质瘤患者ABCC3、PEBP4 及Anxa7 的表达与病理特征、预后的关系，旨在为脑胶质瘤的临床诊疗及疾病预后提供参考思路。报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2016年5月至2018年6月于新乡医学院第一附属医院行肿瘤切除术的88 例脑胶质瘤患者的胶质瘤组织作为实验组，同时收集瘤旁组织（距离肿瘤5 cm 处）作为对照组。其中男性49 例，女性39 例，平均年龄（47.35±6.23）岁；平均病程（12.16±5.84）个月。纳入标准：①均符合脑胶质瘤的诊断标准［7］，且经CT、MRI 检查及术后病理检查确诊；②均为原发脑胶质瘤且未行放化疗；③病历资料完整无缺漏；④本研究已通过医院伦理委员会批准，受试者或家属已签署知情同意书。排除标准：①有血液系统疾病者；②有其他恶性肿瘤者；③合并脑脓肿等颅内感染性疾病者；④风湿免疫或结缔组织病变者；⑤拒绝检查或未完成相关检查的患者。

1.2 方法

山羊抗PEBP4 多克隆抗体、山羊抗ABCC3多克隆抗体、兔抗人Anxa7 多克隆抗体、链酶菌抗生物素蛋白⁃过氧化物酶连接（streptavidin⁃perosi⁃dase，SP）免疫组化超敏试剂盒、DAB 显色试剂均选自北京中杉金桥生物技术公司。采用S⁃P 免疫组化染色，将标本经常规石蜡切片、脱水。根据S⁃P 免疫组化染色法对ABCC3、PEBP4 及Anxa7 进行检测，整个实验操作过程严格按照说明进行。

1.3 判定标准

由病理科医师在光学显微镜下随机观察5个视野，要求每个视野至少计数100 个完整的肿瘤细胞。ABCC3、PEBP4 及Anxa7 免疫组化阳性判定标准［8］：肿瘤细胞胞质或细胞核中出现棕黄色或棕褐色颗粒为阳性，反之则为阴性。阳性细胞比例评分：<25%为1 分，25%～50%为2 分，>50%为3分；染色强度评分：未染色为0 分，淡黄色为1 分，棕黄色为2 分，棕褐色为3 分。染色指数=阳性细胞比例评分＋染色强度评分。染色指数>3 分为阳性；染色指数≤3 分为阴性。阳性率=（阳性例数/总例数）×100%。

1.4 随访

患者出院后均进行为期3年的随访，随访直至随访期结束（截止时间2021年6月）或者患者死亡，根据预后情况分为生存组及死亡组，并分析影响脑胶质瘤患者预后的危险因素。

1.5 统计学处理

采用SPSS 22.0 统计软件处理，计量资料以（±s）表示，采用t检验；计数资料以n（%）表示，采用χ2检验；采用Logistic回归模型分析影响脑胶质瘤患者预后的独立危险因素；以P<0.05 为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 两组ABCC3、PEBP4 及Anxa7 表达情况比较

实验组ABCC3、PEBP4 阳性率及Anxa7 阴性率较对照组高，差异有统计学意义（P<0.05）。见表1、图1。

图1 脑胶质瘤中ABCC3、PEBP4 及Anxa7 表达情况（SP，×400）Figure 1 The expression of ABCC3，PEBP4 and Anxa7 in brain glioma（SP，×400）

表1 实验组、对照组ABCC3、PEBP4 及Anxa7 表达情况比较［n（%）］Table 1 Comparison of ABCC3，pebp4 and anxa7 expression between experimental group and control group［n（%）］

2.2 分析脑胶质瘤组织中ABCC3、PEBP4、Anxa7表达与病理特征的关系

ABCC3、PEBP4阳性患者的分化程度、远处转移、TNM分期高于ABCC3、PEBP4阴性患者，Anxa7阴性患者的分化程度、远处转移、TNM 分期高于Anxa7 阳性患者，差异具有统计学意义（P<0.05）。见表2。

表2 分析脑胶质瘤组织中ABCC3、PEBP4、Anxa7 表达与病理特征的关系［n（%）］Table 2 Analysis of the relationship between the expression of ABCC3，pebp4，anxa7 and pathological features in gliomas［n（%）］

2.3 生存组、死亡组ABCC3、PEBP4 及Anxa7 表达情况比较

据预后情况分为生存组（n=51）及死亡组（n=37）。死亡组ABCC3、PEBP4 阳性率及Anxa7 阴性率较生存组高，差异有统计学意义（P<0.05）。见表3。

表3 生存组、死亡组ABCC3、PEBP4 及Anxa7 表达情况比较［n（%）］Table 3 Comparison of ABCC3，pebp4 and anxa7 expression in survival group and death group［n（%）］

2.4 影响脑胶质瘤患者预后的独立危险因素分析

Logistic回归模型分析显示，组织分化程度（中低分化）、远处转移（有）、TNM 分期（Ⅲ～Ⅳ期）、ABCC3（阳性）、PEBP4（阳性）、Anxa7（阴性）为影响脑胶质瘤患者预后的独立危险因素（P<0.05）。见表4。

表4 影响脑胶质瘤患者预后的独立危险因素Table 4 independent risk factors affecting the prognosis of patients with glioma

3 讨论

研究显示，不同级别胶质瘤的生物学行为均具有恶性表现，虽然临床上通过手术能够取得一定治疗效果，但由于胶质瘤发病机制复杂，与正常组织边界不清晰，会影响手术切除效果［9］。因此，对脑胶质瘤的致病机制及靶点进行深入了解具有重要意义。国内外研究证实，胶质瘤的发生、发展是许多蛋白基因及细胞因子共同作用的结果，故开发脑胶质瘤早期诊断的标记物成为目前治疗胶质瘤研究的方向［10⁃11］。

ABCC3 是ATP 结合盒转运蛋白的超家族成员，能够通过细胞外膜和细胞内膜转运各种分子，其表达与细胞粘附、血管生成、趋药性等生物学过程有关［12］。研究证实ABCC3 表达于多种肿瘤细胞中，可运转长春新碱等抗癌药物，从而影响肿瘤的多重耐药，在介导抗肿瘤药物外排中具有重要作用［13］。本文研究结果中，ABCC3 在瘤旁组织中的阳性表达率高于胶质瘤组织，说明ABCC3 在脑胶质瘤中呈现高表达状态；且在死亡组患者中其阳性表达率高于生存组，说明ABCC3 高表达的脑胶质瘤患者预后可能更差。

PEBP4 作为一种胞质可溶性蛋白，其结构高度保守，能够促进肿瘤细胞的增殖、浸润与转移［14］。本研究结果说明患者机体的PEBP4 表达越高，病情越严重，从而影响预后。分析个中缘由，PEBP4 具有促进胆碱乙酰转移酶分泌的作用，而胆碱乙酰转移酶参与了多种肿瘤疾病的发生发展，对患者的预后造成严重影响。

Anxa7 是一种钙依赖的磷脂结合蛋白，具有维持细胞膜受体功能、调节细胞免疫的作用，还可以通过抑制表皮生长因子受体的活性控制肿瘤细胞增殖扩散［15］。本文研究结果显示，Anxa7 在胶质瘤组织中的阳性表达率低于瘤旁组织，考虑为Anxa7基因突变及DNA 甲基化，使得Anxa7 水平下降，这与既往研究结果报道相一致［16］。并且Anxa7 在死亡组患者中的阳性表达率低，考虑为Anxa7 抑制表皮生长因子受体活性的能力减弱，表皮生长因子受体高表达，促进了脑胶质瘤的病变。

本文分析结果显示：ABCC3、PEBP4 阳性患者的分化程度、远处转移、TNM 分期高于ABCC3、PEBP4 阴性患者，Anxa7 阴性患者的分化程度、远处转移、TNM 分期高于Anxa7 阳性患者。经Logistic回归模型分析得出，组织分化程度（中低分化）、远处转移（有）、TNM 分期（Ⅲ～Ⅳ期）、ABCC3（阳性）、PEBP4（阳性）、Anxa7（阴性）为影响脑胶质瘤患者预后的独立危险因素。提示临床治疗中需加强对伴随高危因素患者的干预，在治疗后进行针对性预防有利于改善患者预后、提高患者生存时限。

综上所述，脑胶质瘤中ABCC3、PEBP4 阳性表达高，Anxa7 阴性表达高，三者参与了脑胶质瘤的临床生物学进展，可作为脑胶质瘤患者病情预后有效评估指标。