酒制对女贞子主要化学成分的影响

韦小敏，马亚宣，李先芳

(河南牧业经济学院 动物医药学院，河南 郑州 450046)

女贞子为木犀科植物女贞LigustrumlucidumAit.的干燥成熟果实，其性凉，味甘、苦，归肝、肾经，有滋补肝肾、明目乌发的功能。常用于治疗肝肾阴虚、眩晕耳鸣、腰膝酸软、须发早白、目暗不明、内热消渴、骨蒸潮热等症[1]。女贞子历代应用的炮制方法有10 余种，但临床上以生品和酒制品的应用最为广泛[2]。其酒制方法主要有酒蒸、酒炖和酒炙，具体实践中酒制的时间长短有着很大的差异，有2 h、3 h、4 h、8 h，甚至有3 d者[3]。

女贞子经过不同炮制后，其临床功效会发生变化。生女贞子饮片以清肝明目、滋阴润燥为主，酒制后滋补肝肾作用显著增强[4]。这些改变必然与其内在物质基础的变化密切相关。女贞子化学成分主要有萜类、环烯醚萜苷类、苯乙醇苷类、黄酮类、挥发油、脂肪酸等几大类，此外还有多糖、微量元素；其中最具活性成分和药用价值的属三萜类、环烯醚萜苷类、苯乙醇苷类，其各自代表成分为齐墩果酸、特女贞苷和红景天苷[5,6]。女贞子中齐墩果酸含量较大且药理作用丰富，在抑制肿瘤细胞增长、抗炎、降脂、提高免疫等方面都有很好的疗效[7]，2005年版《中国药典》[8]将齐墩果酸作为质量控制标准。环烯醚萜类化合物是单萜类化合物的代谢产物，特女贞苷是其中的主要成分，具有保肝利胆、降血糖、调血脂、抗衰老以及调节免疫等功效[9]，自2010年后一直被《中国药典》[1，10]定为质量控制标准。本实验以不同的酒制(酒蒸、酒炖)方法和时间为影响因素，以特女贞苷、齐墩果酸的含量为指标，考察不同炮制工艺对女贞子主要成分变化的影响，为整体评价女贞子质量提供依据。

1 材料与方法

1.1 女贞子药材

冬季，女贞子果实成熟后，在河南牧业经济学院校园采摘，除去杂质和病虫害果实，洗净，置沸水中略烫后，置阴凉通风处干燥，得净女贞子原药材。

本品经河南牧业经济学院中药教研室程茂高老师鉴定，确为木犀科植物女贞LigustrumlucidumAit.的干燥成熟果实。

1.2 主要仪器

高效液相色谱仪；电子天平；高速万能粉碎机；电子恒温不锈钢水浴锅；电热鼓风干燥箱；圆底烧瓶；回流冷凝管等。

1.3 实验方法

1.3.1 女贞子的炮制[11]取女贞子原药材200 g，等份置于4个烧杯中，加20%的黄酒拌匀，用铝箔纸盖严，闷润至酒被完全吸尽后，置不锈钢锅内蒸2 h、4 h、8 h、10 h，取出干燥。

取女贞子原药材200 g，等份置于4个烧杯中，加20%的黄酒拌匀，用铝箔纸盖严，闷润至酒被完全吸尽后，置于不锈钢锅内隔水炖2 h、4 h、8 h、10 h，取出干燥。

1.3.2 样品的预处理 将上述净女贞子和用不同酒制方法炮制过后的女贞子饮片，用万能粉碎机粉碎至能通过三号筛，而后称取各样品粉末约2 g，放置于干燥后的称量瓶中，精密称定。把瓶盖打开后，在105 ℃的干燥箱内干燥5个小时，然后把瓶盖盖好转移置干燥器中，放冷约三十分钟后精密称定，再在上述温度下干燥1小时，放冷，再次称重，直到连续两次称重的差异不大于5 mg为止[12]。以此干燥后的粉末作为供试品，分别测定其中的齐墩果酸和特女贞苷含量。

1.3.3 齐墩果酸的含量测定[13]精密称取5.25 mg齐墩果酸标准品，放到25 mL的容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度后，配成浓度为0.210 mg/mL的齐墩果酸对照品溶液，摇匀，用0.45微米微孔滤膜滤过，作为对照品溶液。精密吸取上述齐墩果酸对照品溶液0.4 mL、0.8 mL、1.2 mL、1.6 mL、2.0 mL，然后用甲醇定容到10mL的容量瓶中。选用色谱柱Kromasil C 18 (5 μm，4.6 mm×200 mm)；流动相为甲醇-水(86∶14)；柱温30 ℃；流速1.0 mL/min；进样量10 μL；在波长208 nm下检测其峰面积。以浓度(X)为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程为Y=2184.2X+240.4，R2=0.9992。表明齐墩果酸在 0.0084 ～0.042 mg/mL 浓度范围内呈良好的线性关系。

准确称取各样品粉末1 g，放到100 mL的圆底烧瓶内，依次用20 mL、15 mL、10 mL无水乙醇在80 ℃的恒温水浴锅中进行回流提取，每次提取3 min，而后用滤纸滤过，再将3次滤过后的滤液合并到100mL的容量瓶中并稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，取续滤液备用。分别取上述制得的供试品溶液 10 μL，注入液相色谱仪，测定峰面积，计算各样品的齐墩果酸含量。

1.3.4 特女贞苷的含量测定[1]精密称取6.25 mg特女贞苷标准品，放到25 mL的容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度后，配成浓度为0.250 mg/mL的特女贞苷对照品溶液，摇匀，用0.45微米微孔滤膜滤过，精密吸取特女贞苷对照品溶液0.4 mL、0.8 mL、1.2 mL、1.6 mL、2.0 mL，用甲醇定容到10 mL的容量瓶中。选用色谱柱Kromasil C 18 (5 μm，4.6 mm×200 mm)；流动相为甲醇-水(40∶60)；柱温30 ℃；流速1.0 mL/min；进样量10 μL；在波长224 nm下检测其峰面积。以浓度(X)为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标，绘制标准曲线，得到特女贞苷的回归方程为：Y=11881X-46.226，R2=0.9998，表明特女贞苷在0.01～0.05 mg/mL浓度范围内呈良好线性关系。

准确称取各样品粉末0.5 g，放到圆底烧瓶中，加入50%的乙醇50 mL，再次称定其重量，在80 ℃的恒温水浴锅中回流提取1 h，取出放冷后，再称定重量，并用50%的乙醇补足减失的重量，后用滤纸滤过后转移到锥形瓶中，摇匀，再用0.45 μm的微孔滤膜滤过，得续滤液[13]。分别取上述制得的供试品溶液10 μL，注入液相色谱仪，测定峰面积，计算各样品的特女贞苷含量。

2 结果与分析

2.1 酒蒸对女贞子中齐墩果酸和特女贞苷含量的影响

女贞子酒蒸不同时间后，饮片中的齐墩果酸含量见图1。结果显示，女贞子酒蒸后齐墩果酸的含量与生品相比较明显增加，并且在酒蒸4个小时的时候达到最高，其后随着蒸制时间的延长又呈下降趋势。女贞子酒蒸不同时间后，饮片中的特女贞苷含量见图2。从图2可以看出，女贞子酒蒸后，特女贞苷含量与生品相比较有所降低，且随着酒蒸时间的延长，特女贞苷的含量逐渐降低。

图1 不同酒蒸时间齐墩果酸含量变化

图2 不同酒蒸时间特女贞苷含量变化

2.2 酒炖对女贞子中齐墩果酸和特女贞苷含量的影响

结果显示，女贞子经酒炖后，其主要有效成分齐墩果酸含量较生品明显增加，并且在酒炖4小时的时候，齐墩果酸含量达到最高，其变化趋势见图3。女贞子经酒炖后，其主要有效成分特女贞苷含量与生品相比较有所减少，且随着酒炖时间的延长，特女贞苷的含量逐渐降低。其变化趋势见图4。

图3 不同酒炖时间齐墩果酸含量变化

图4 不同酒炖时间特女贞苷含量变化

2.3 女贞子酒制工艺的综合评价分析

徐维统等[13]以齐墩果酸和特女贞苷为综合评判指标，优选了酒蒸女贞子的最佳炮制工艺。他们根据齐墩果酸和特女贞苷这两个指标成分在工艺选择中的主次地位，分别给予了齐墩果酸 60% 和特女贞苷40% 的加权系数，求出综合质量评分，分值最高的即为最佳炮制工艺。本实验参考该方法来综合评价女贞子的炮制工艺。根据Y=(各样品中齐墩果酸含量÷9个样品中齐墩果酸最高含量)×60%+(各样品中特女贞苷含量÷9个样品中特女贞苷最高含量)×40%，将所得到的实验数据进行计算，求出综合评价值Y，其结果见表1。

表1 女贞子炮制工艺的综合评价

根据计算结果看出，在酒蒸4 h的时候，其综合评价值最高。因此，本实验显示，女贞子较佳的酒制工艺为酒蒸4 h。

3 讨论

中药有效成分受炮制方法的影响。采用不同炮制方法处理，会对女贞子化学成分的含量产生一定影响[14，15]。本实验通过对女贞子生品和不同酒制品中齐墩果酸和特女贞苷含量比较, 研究酒制对女贞子的影响。结果表明，女贞子经酒制后，其有效成分齐墩果酸的含量增加，这是因为酒制改变了细胞壁的通透性，产生了某些助溶和脱吸附作用，从而提高了齐墩果酸的溶出效率[13]。本实验所测得的每个样品中的特女贞苷含量变化趋势和前人研究结果一致，都是随着酒制时间的延长，炮制品中特女贞苷含量逐渐降低[16]，但是均达到了药典0.70%的要求[1]。特女贞苷含量之所以降低，是因为其性质不稳定，经较长时间加热酒制后，在高温及水蒸气的作用下会水解生成红景天苷，红景天苷进一步水解生成酪醇所致[4，6]。

女贞子中有多种不同类型的化学成分。其中最具活性成分和药用价值的属齐墩果酸和特女贞苷[5]。虽然特女贞苷的药理作用强大且专属性较强[16]，但是前人的研究发现，酒女贞子中特女贞苷的含量因炮制方法和时间不同而差异较大，因此本实验以齐墩果酸和特女贞苷的含量变化作为综合指标加以评判，并分别给予60%和40%的加权系数，求出综合质量评分，以考察女贞子不同炮制工艺之间的差别，更具科学性。根据综合质量评分，得出女贞子较佳的酒制工艺为酒蒸4 h。此结果可为酒制女贞子工艺条件提供参考。