Ki67在肺原位腺癌合并2型糖尿病患者中的应用及临床意义

陈 科，陈逸洋，朱 燕，周颖异

（1.苏州大学附属第一医院胸外科，江苏 苏州 215006；2.苏州大学法医学专业，江苏 苏州 215006；3.苏州大学附属第一医院内分泌科，江苏 苏州 215006）

根据中国国家癌症中心统计资料显示，肺癌仍然是中国最常见的癌症，并且在中国癌症死亡率中，肺癌仍然排名第一[1]。2型糖尿病（type 2 diabetes, T2DM）是一种常见的代谢障碍疾病，糖尿病患者发生肿瘤的风险明显增加，研究显示糖尿病患者比非糖尿病患者发生肿瘤的风险增加20%～25%，肺癌在T2DM病人恶性肿瘤的发病中位居前三位。随着T2DM发病率的增加，带动肺癌的发生率及死亡率也随之增高。

Ki67是一种存在于增殖细胞中核抗原，定位于人类基因组10q25，由分子质量为345 kD和395 kD的2 条多肽链构成[2]。目前的研究认为它的功能与染色质相连，与细胞有丝分裂有密切关系，在有丝分裂中起着维持DNA规则结构的重要作用，是一个反映细胞增殖的敏感指标，也是目前应用广泛的增殖细胞指标之一。Ki67作为一种核增殖抗原，在肺癌中的研究中有广阔的前景，目前对Ki67在肺原位腺癌（adenocarcinoma in situ, AIS）合并T2DM患者中的研究极少，本文旨在研究Ki67在AIS合并T2DM患者中的应用。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2021年06月—2022年01月我院胸外科及内分泌科收治的60 例AIS合并T2DM患者为A组，其中男30例，女30 例，年龄50～83 岁。同期胸外科收治的70 例AIS患者为B组，其中男35 例，女35 例，年龄47～84 岁；以上AIS患者均经术后病理确诊为腺癌，按2011年国际肺癌研究协会（International Association for the Study of Lung Cancer,IASLC）、美国胸科学会（American Thoracic Society, ATS）以及欧洲呼吸学会（European Respiratory Society, ERS）共同提出的肺腺癌TNM分期标准分为TIS（AIS）[3]。T2DM患者均依据1999年WHO糖尿病诊断标准确诊为T2DM[4]。排除标准：T2DM与AIS同时诊断或晚于AIS诊断的患者、其他部位转移至肺部导致的肺转移瘤、1型糖尿病、特殊类型糖尿病、妊娠糖尿病、心脑血管疾病、高血压、自身免疫性疾病、急慢性感染、严重肝肾疾病及其他内分泌系统疾病者等。所有研究对象均知情同意。

1.2 方法 所有研究对象空腹12 h后采集晨起静脉血10mL，其中5 mL送检生化全套，5 mL送检肿瘤异常蛋白。生化全套使用日立7600全自动生化分析仪；糖化血红蛋白（HbA1C）采用日本TOSOH G8糖化血红蛋白检测仪高效液相色谱法测定。取所有研究对象肿瘤组织的石蜡标本，4 mm切片，采用免疫组化ABC法进行Ki67染色。以正常血清代替一抗，以抗扁桃体阳性染色切片为阳性对照组。

1.3 评价指标

1.3.1 生化指标：总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、空腹血糖（FBG）、HbA1C。

1.3.2 Ki67：无明显着色或阳性细胞数＜10%为阴性（-），阳性细胞数1 0%～2 5%为弱阳性（+），阳性细胞数25%～50%为中度阳性（++），阳性细胞数＞50%为强阳性（+++）。

1.4 统计学分析 采用Prism 8软件进行统计学分析，计量资料以均数±标准差（±s）表示，两组间比较采用t检验，计数资料以[例(%)]表示，两组间比较采用卡方检验。Ki67与其他临床指标进行Pearson相关分析，利用Logistic回归模型分析AIS合并T2DM的危险因素。以P＜0.05为差异有统计学意义。高于B组（P＜0.01），A组阳性表达率76.67%，其中弱阳性率为41.67%，中等阳性率为20.00%，强阳性率为15.00%。B组中阳性表达率67.14%，其中弱阳性率为50.00%，中等阳性率为8.57%，强阳性率为8.57%。A组中等阳性率表达高于B组（P＜0.05）。（表1，表2）

表1 两组一般临床资料

2 结果

2.1 三组一般临床资料的比较 三组一般临床资料之间性别、年龄差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。方差分析结果显示，A组的TC、TG、LDL-C、FBG、HBA1c、Ins分别高于B组（P＜0.01）。A组Ki-67总阳性率

表2 两组Ki-67表达情况[例(%)]

2.2 Ki67与其他临床指标的相关分析 以Ki67为因变量，以性别、年龄、FPG、HBA1c、Ins、TC、TG、LDL-C、HDL-C为自变量进行Pearson相关分析，结果显示，Ki67与FBG（r＝0.192，F＝61.40，P＜0.01）、HBA1c（r＝0.251，F＝86.58，P＜0.01）呈正相关。

2.3 AIS合并T2DM患者多因素非条件Logistic回归分析 以是否合并T2DM为因变量，以Ki67、FBG、HBA1c、Ins、TG、TC、LDL-C、HDL-C为自变量，对T2DM合并AIS及AIS患者进行二分类Logistic回归分析，结果显示Ki67（OR＝0.870，95%CI0.796～0.950，P＝0.002）、FBG（OR＝1.923，95%CI1.216～3.043，P＝0.005）、HBA1c（OR＝11.563，95%CI2.165～12.016，P＜0.01）、INS（OR＝0.882，95%CI0.788～0.986，P＝0.027）、HDL-C（OR＝0.043，95%CI0.004～0.409，P＝0.006）、TC（OR＝3.116，95%CI1.135～8.556，P＝0.027）为AIS合并T2DM的独立影响因素。

3 讨论

1983年，Gerdes等[3]首次利用霍奇金淋巴系L428细胞核对小鼠进行免疫，制备出了Ki67抗体，由于此抗体所用的组织培养板编号是67号，故被命名为Ki67。Ki67为细胞增殖的一种标记，无论在正常细胞株或肿瘤细胞株中，其抗原性的表达都随细胞周期进展而增加，Ki67抗原依赖于细胞生长周期，位于染色质支架（scaffold）及核仁外层（sucleolar cortex）的周围，在有丝分裂中起着维持DNA结构的重要作用[4]。Ki67抗原的分布是细胞周期依赖的，Ki67不在G0期细胞表达，在G1期细胞中表达于核仁周边，在S期、G2期细胞中表达于整个细胞核内，在M早期细胞中表达于染色体上，在M期后的细胞中Ki67抗原迅速消失[5]。Ki67与肿瘤良恶性呈正相关，与肿瘤恶性程度亦呈正相关，它是判断肿瘤性质及侵袭力的重要标志，对预测肿瘤预后十分重要[6]。大量研究[7]结果显示，恶性肿瘤细胞中Ki67的表达水平越高其临床疗效及预后就越差，这一观点在关于宫颈癌、乳腺癌、白血病和肝细胞癌等的研究中得到证实，多数学者[8]认为Ki67可以用作判断肿瘤侵袭力和预后的标志。

本研究显示AIS合并T2DM组的Ki67总阳性率、中度阳性率及强阳性率高于AIS组，且在中度阳性率上两组差异具有统计学意义（P＜0.05）。同时本研究显示在2组中与FBG、HBA1c呈正相关。Ki67在细胞周期的G0期和G1早期Ki67均不表达，出现于G1中期到晚期，S期和G2期逐渐增加，有丝分裂期达高峰，分裂后迅速降解或丢失抗原决定簇，半衰期为1 h或更短。T2DM患者80%以上存在胰岛素抵抗，呈高胰岛素血症状态，胰岛素可增加Ras/MAPK活化，进而活跃细胞的有丝分裂、生长、细胞增殖，缩短细胞生长周期，引起肿瘤的发生[9]。另外高血糖可触发氧化反应，其产生的因子具有损伤血管内皮细胞的作用，促进内皮细胞的有丝分裂[10]。AIS合并T2DM中Ki67的高表达或与此有关。本研究显示Ki67为AIS合并T2DM的独立危险因素。细胞的过度分裂与增殖已被证实是肿瘤恶变的重要环节。作为增殖性细胞核的标记物，Ki67涉及肿瘤发生发展、分期、放疗敏感性、预后、复发和转移、死亡原因、肿瘤标志物等各个方面的相关性[11]，可以反映细胞增殖活性和评价肿瘤恶性潜能，与癌组织的侵袭、转移、复发密切相关。Ki67在肺癌中具有较高的表达水平，能够随着患者病程的进展逐渐升高，患者癌细胞分化及浸润作用越强则表达相应越高，因而能够作为癌症患者病情进展及预后情况的判断指标。

综上所述，同为AIS患者中，Ki67整体阳性率、中度阳性率在合并T2DM患者中明显升高，且Ki67为AIS合并T2DM的独立危险因素，提示Ki67的过表达可能与AIS合并T2DM患者癌细胞的转移和进展有关。对于胸外科及内分泌科医生，应关注AIS合并T2DM患者术后复查的结果，要求该类患者定期随访，以尽早发现肿瘤微转移及复发的可能性，改善患者预后及提高患者的长期术后生存质量。