1 169例冻融胚胎移植周期的临床妊娠结局分析

李天凤，帅振虹，张婉菁，李雪梅

(南方医科大学附属深圳妇幼保健院 生殖医学中心，广东 深圳 518048)

冻融胚胎移植技术(frozen-thawed embryo transfer，FET)是指在超低温的液氮(-196 ℃)冷冻的胚胎解冻复苏后进行分期、分批、多次移植的技术，既能降低反复控制性超促排卵及穿刺取卵对患者的创伤，预防中重度卵巢过度刺激综合征(ovarian hyper-stimulate syndrome, OHSS)的发生，还可以保留放化疗肿瘤患者的生育力，提高临床妊娠率和降低多胎妊娠发生率[1-2]。FET妊娠结局受多种因素的影响，目前国内研究表明，FET妊娠成功率为38.6%～68.4%[3]。因此，分析FET妊娠成功率的影响因素，对于提高临床妊娠成功率具有十分重要的意义。多中心已开展关于FET妊娠结局影响因素的研究，但目前暂未形成统一定论。本研究旨在从临床和实验室以及随访资料探讨影响FET临床妊娠率的相关因素，为改善FET的临床结局提供理论依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

1.1.1 标本：回顾性分析2017年1月至2019年12月在深圳市妇幼保健院生殖医学中心1 169个FET的完整临床病例资料。纳入标准：胚胎均采用玻璃化冷冻技术冷冻；女性年龄20～46岁，不孕时间1～20年，解冻胚胎包括卵裂胚和囊胚。

排除标准：解冻后放弃的移植周期；多囊卵巢综合征患者；宫腔环境有问题患者；植入前胚胎遗传学检测技术周期；行激光辅助孵化的患者。

本研究经过深圳市妇幼保健院伦理委员会审核批准(深妇幼伦审【2018】165号)，并获得受试者签署的知情同意书。

1.1.2 试剂：冷冻液及解冻液试剂盒(KITAZATO公司)和G2+(Vitrolif公司)。

1.2 方法

1.2.1 胚胎冷冻、解冻和移植：胚胎冻融严格按照冷冻液及解冻液试剂盒的说明书进行操作。解冻后存活细胞数达到50%以上的胚胎用G2+完成移植。

1.2.2 内膜准备：共涉及自然周期、促排周期和人工周期3种方案。

1.2.3 妊娠评价标准：FET后4～5周见孕囊及原始心管搏动。

1.3 统计学分析

2 结果

2.1 一般资料

本研究共纳入FET周期1 169个。女性患者的平均年龄(33.8±4.8)岁；平均不孕时间(3.1±2.2)年，共解冻2 202个胚胎，复苏存活2 198个胚胎，解冻胚胎复苏率为99.82%；解冻存活的胚胎行当天移植，平均移植胚胎数(1.88±0.44)个/周期，种植成功的胚胎数756个，平均胚胎种植率34.39%；因此，本研究的胚胎种植率为，获得临床妊娠的共有586个周期，其临床妊娠率为50.13%。流产131个周期，流产率为11.20%。

2.2 影响FET临床妊娠率的临床因素分析

>35岁组的胚胎种植率和临床妊娠率明显低于另外两组(P<0.001)；>6年的不孕年限组的种植率和临床妊娠率明显低于≤6年组(P<0.001)；但子宫内膜厚度<7 mm组的临床妊娠率明显低于另外两组(P<0.05)(表1)。

表1 临床因素与FET临床妊娠率的相关性分析

2.3 影响FET临床妊娠率的实验因素分析

移植囊胚或优胚可显著提高胚胎种植率和临床妊娠率(P<0.001)。但移植单胚胎移植的胚胎种植率明显高于多胚胎移植(P<0.01)(表2)。

表2 实验因素与FET临床妊娠率的相关性分析

2.4 影响FET周期临床妊娠率的Logistic多因素回归分析

以妊娠结局为因变量，以年龄、不孕年限、内膜厚度、胚龄、移植胚胎数和移植优胚数目为协变量，进行多因素Logistic 回归分析。女方年龄对妊娠呈显著影响(P<0.01),年龄越大越不容易成功妊娠(OR=0.548，95%CI: 0.425，0.683)，即女方年龄增加是妊娠成功的危险因素(OR<1)；移植优胚数目对妊娠也有显著影响(P<0.01)，移植优胚数目越多越容易妊娠(OR=1.432，95%CI:0.302，1.546)，即移植优胚数目增加是妊娠成功的保护因素(OR>1)(表3)。

表3 影响FET临床妊娠率的相关因素的Logistic回归分析

3 讨论

FET既能避免患者胚胎浪费，降低治疗成本，还能提高累积临床妊娠率[4]。本研究以2017年至2019年在深圳市妇幼保健院行FET的1 169对夫妇的临床资料为基础分析FET临床妊娠率的相关因素。

>35岁的女性患者尽管有胚胎可行冷冻，但胚胎发育潜能欠佳，非整倍体率提高，线粒体数量减少，子宫内膜容受性降低，流产率增加和临床妊娠率降低[5]。提示女方年龄是影响FET临床妊娠率的重要因素。

不孕时间延长会相应降低胚胎移植的成功率。本研究发现女性不孕时间>6年组的FET临床妊娠率明显低于不孕时间<6年组，但多因素Logistic回归分析显示其并不是FET临床妊娠成功率的独立因素。提示不孕年限是影响FET妊娠成功率的因素之一，但并非其主要影响因素[6]。对于不孕时间较长者，FET仍有较高的临床应用价值。

以7 mm为界限，移植日子宫内膜厚度≤7 mm是FET临床妊娠成功的危险因素，但其成功率并不会随着子宫内膜厚度增加而提高。子宫内膜过厚或过薄都不利于胚胎植入，只有子宫内膜与胚胎发育同步才是最佳植入窗口期[7]，因此建立统一的子宫内膜检测体系并制定和胚胎移植的子宫内膜阈值对提高FET临床妊娠率具有重要意义。

自然生理状态下，只有囊胚才在宫腔着床，卵裂胚早期在输卵管发育。经过体外培养完成优胜略汰筛选，形成了更具发育潜能的囊胚，同时实现了胚胎发育和子宫内膜更好的同步化[8]，更加符合自然规律。因此必须慎重选择移植策略来提高临床妊娠结局，如正常获卵者可优先考虑移植D3卵裂胚，高获卵者争取优质囊胚移植。移植胚胎数目增加不仅不能有效增加临床妊娠成功率，反而带来高多胎率，增加妊娠风险[9]。一项224例FET周期的临床研究提示移植优质胚胎可更好的改善FET临床妊娠结局[10]。因此，选择性优质单囊胚移植才是提高临床妊娠率和降低多胎妊娠率的有效手段。

女性患者年龄和移植优胚数目均是影响FET周期临床妊娠结局的主要因素且年龄增加是临床妊娠的危险因素。但本研究也存在一定局限性，由于采用回顾性研究且数据有限，未能纳入男方因素对FET妊娠结局的影响，仍需后续研究。