HPLC同时测定女金片中3种成分的含量

李 佳，金 华，王 玉

（淮安市食品药品检验所，江苏 淮安 223300）

女金片由鹿角霜、陈皮、当归、白芷、川芎、延胡索、甘草、牡丹皮、黄芩、阿胶、益母草等23味中药按照一定制法制成，有调经养血，顺气化瘀的功效，现行标准号为WS3-B-3534-98[1]。女金片是一种妇科常用药物，成分复杂，但是现行标准仅包含性状和片剂通则项目的检查，检测项目专属性及准确性很低，无法完全满足女金片的质量控制要求。且已有的报道多以单一指标的含量控制女金片的质量[2-5]，而女金片处方中药味众多，成分复杂，君臣佐使不同药味均发挥着不可替代的作用，以单一指标是无法准确有效地反映女金片的内在质量状况，故本文研究建立了HPLC法同时测定芍药苷、橙皮苷和黄芩苷3种成分的含量，为提高和完善女金片的质量标准提供依据[6～8]。

1 仪器与试药

1.1 仪器

CAMAG TLC Visualizer 2（瑞士卡玛公司）；UltiMate 3000型高效液相色谱仪（DIONEX公司）；XS205-DU型电子天平（Mettler公司）；XP-6型电子分析天平（Mettler公司）。

1.2 试药

女金片（批号为20201101，20200104，20181001，吉林华侨药业）；芍药苷对照品（批号为110736-201943；含量95.1 %）、橙皮苷对照品（批号为110721-201818；含量96.2 %）、黄芩苷对照品（批号为110715-201821；含量95.4 %），均购自中国食品药品检定研究院；阴性对照制剂均为自制。乙腈为色谱纯，磷酸为分析纯，水为纯化水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件[9-12]

色谱柱：Eclipse Plus C18（5 μm，4.6 mm×250 mm）；检测波长：芍药苷（230 nm）、橙皮苷、黄芩苷（280 nm）；流动相：以乙腈为流动相A，0.05 %磷酸为流动相B，按表1进行梯度洗脱。柱温：30 ℃；流速：1.0 ml/min；进样体积：10 μl。

2.2 溶液的制备

对照品贮备液：精密称取芍药苷对照品6.312 mg、橙皮苷对照品6.066 mg、黄芩苷对照品11.838 mg，置入同一50 ml量瓶中，用稀乙醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得。

对照品溶液：精密吸取对照品贮备溶液15 ml，置入50 ml容量瓶中，用稀乙醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得。

供试品溶液：取样品20片，精密称定，研细，精密称取1 g，置入20 ml容量瓶中，加稀乙醇适量，超声处理30 min，放冷，稀乙醇定容，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

阴性对照溶液：取处方量的1/10（缺黄芩、陈皮、白芍），按女金片工艺及供试品溶液的制备方法，制备阴性对照溶液。

2.3 方法学考察

专属性考察：取对照品溶液、阴性对照溶液以及供试品溶液，按拟定色谱条件进样测定，记录色谱图。阴性对照溶液在与芍药苷、橙皮苷和黄芩苷对照品相同保留时间处未检出色谱峰，表明阴性无干扰。见图1～3。

图2 供试品溶液的HPLC色谱图

图3 阴性对照溶液的HPLC色谱图

线性关系考察：精密吸取对照品贮备溶液0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，10.0ml，置入10 ml量瓶，用甲醇定容，摇匀，按拟定色谱条件进样测定，记录各色谱峰峰面积。以浓度（μg/ml）为横坐标、峰面积为纵坐标进行线性回归。结果见表2，表明各浓度范围内与峰面积呈现良好的线性关系。

表2 各成分回归方程、相关系数及线性范围

精密度试验：取对照品溶液，按拟定色谱条件连续进样6次测定，记录峰面积。结果见表3，表明该方法具有良好的精密度。

表3 精密度试验结果

稳定性试验：取同一供试品溶液，在室温下放置0，2，4，8，12，24 h后，按拟定色谱条件进样测定，记录峰面积。结果见表4，表明该溶液24 h内具有良好的稳定性。

表4 稳定性试验结果

重复性试验：取同一批号供试品6份，按拟定含量测定方法测定各成分含量。结果见表5，表明该方法具有良好的重复性。

表5 重复性试验结果

加样回收率试验：取已知含量的供试品6份，分别加入适量的芍药苷、橙皮苷和黄芩苷对照品，按拟定的含量测定方法测定各成分含量，计算加样回收率。

表6 加样回收率试验结果

2.4 样品含量测定

取3批供试品按上述含量测定方法测定供试品中芍药苷、橙皮苷及黄芩苷的含量，结果见表7。

表7 女金片各成分的含量测定结果/mg·片-1（n=2）

3 讨论

3.1 色谱条件的选择

在流动相比例选择时，由于3种成分的极性差异明显，若选用乙腈-0.05 %磷酸等度洗脱，出峰时间过长或分离度达不到要求，故试验经摸索确定了梯度洗脱程序。在检测波长的选择时，试验过程中采用DAD检测器对待测组分的紫外光谱进行了检测，发现230 nm作为检测波长时，芍药苷吸收较好，但黄芩苷的吸收很差，而在280 nm波长检测时，可兼顾橙皮苷和黄芩苷均有较好的紫外吸收，但此波长下芍药苷几乎没有吸收，故试验选择双波长对样品进行检测。

3.2 供试品提取溶剂的选择

采用甲醇、稀乙醇以及50 %甲醇3种溶剂提取女金片，结果见表8。由表8 可见，甲醇的提取效果最差，50 %甲醇和稀乙醇提取效果相当；但是50 %甲醇作为溶剂时，有杂质峰干扰，会影响主峰峰面积的准确性，所以最终选择用稀乙醇作为供试品的提取溶剂。

表8 不同溶剂对女金片的提取结果（n=2）

3.3 小结

女金片可改善微循环，改善女性内分泌水平，与低剂量米非司酮联用对围绝经期功血有良好的治疗效果，且有助于大量失血后的女性患者，是一种妇科常用药物[12-15]。其方中的白芍具有养血调经、敛阴止汗之功效；陈皮可理气健脾、燥湿化痰；黄芩能清热泻火解毒、止血、安胎；芍药苷、橙皮苷和黄芩苷分别为这3味药的主要有效成分，本研究所建立的HPLC法可同时检测女金片中3种成分的含量，克服了检测单一组分的局限性，能更加全面准确地反映该制剂的内在质量，为保证妇科用药的安全有效提供更多的科学依据。