饲料中添加乳酸菌对凡纳滨对虾血清学免疫指标的影响

■ 文｜深圳市渔业发展研究中心 黄浦江 徐远珍

凡纳滨对虾（L i t o p e n a e u s vannamei）又名南美白对虾，是我国对虾养殖主要品种之一。我国广东地区多采用高位池集约化养殖南美白对虾，养殖密度高，养殖池水质较差，近年来以微生态制剂等措施改善水质的做法已引起养殖业关注。常用微生态制剂中所含的乳酸菌，芽孢杆菌和酿酒酵母等益生菌，具有改善水质，调节水体酸碱度、硝酸盐浓度、溶解氧浓度等作用。

益生菌通过分泌胞外酶将养殖水体中常见的亚硝酸盐、氨氮或者多余的磷酸盐、硫化物等污染物，转化为自身所需物质，从而达到净化水质的作用。然而，目前市售益生菌产品良莠不齐，效果无法评估，因此需要进行实际生产评估，为生产实际中凡纳滨对虾使用益生菌剂量提供参考依据。本研究选取市售常见微生态制剂“利生优酸乳”，通过在饲料中添加乳酸菌，并研究其对南美白对虾血清学免疫指标的影响。

实验材料

1.实验池

深圳市大鹏新区海源生物科技有限公司虾苗场，实验用水泥池共6个，32m3/个（水深1m），将海水抽入蓄水池，经过严格的沙滤沉淀和紫外消毒。于试验前7天，将所有试验用水泥池清洗干净，用漂白粉进行严格消毒，然后暴晒三天。分为A，B两组、每组3个平行，其中A组按照对虾生长不同阶段投喂预混乳酸菌对虾料，B组投喂常规对虾料。

2.实验虾和乳酸菌用法用量

实验用虾苗购自深圳市环球联众生物科技有限公司，平均体长 0.6 c m±0.1 c m，体质量为0.52～0.63mg，实验室布苗密度250尾/m2。待虾体长平均1.2cm时，第一次分苗8万尾/池；待虾苗生长到体长平均4cm时，第二次分苗2.2万尾/池，第二次分苗后直至养成成虾。

购买市售常见益生菌“利生优酸乳”，拌料方法为每袋（250g）兑加10kg的常温淡水搅拌均匀制作成复活水（复活水水温4℃），然后将复活水均匀搅拌至100kg的对虾配合饲料中。

实验方法

1.血清学指标测定方法

采样中后期，在养殖期第45天、60天、90天、120天、150天、180天，分别取样检测血清学指标：碱性磷酸酶（ALP）、酸性磷酸酶（ACP）、超氧化物歧化酶（SOD）及溶菌酶（lysozyme），采用的试剂盒由南京建成生物工程研究所提供。比较饲料中添加乳酸菌和不添加乳酸菌条件下，南美白对虾血清学指标的不同之处及作用。

2.数据处理

采用Excel和SPSS11.5软件对数据进行统计分析，先对数据作单因素方差分析（ANOVA），对有显著差异者作Duncan’s多重比较，所有数值用平均值±标准误表示。

结果与分析

1.超氧化物歧化酶（T-SOD）（见图1）

图1 超氧化物歧化酶(T-SOD)活力变化趋势

2.碱性磷酸酶（ALP）（见图2）

图2 碱性磷酸酶（ALP）活力变化趋势

3.酸性磷酸酶（ACP）（见图3）

图3 酸性磷酸酶（ACP）活力变化趋势

4.溶菌酶（lysozyme）（见图4）

图4 溶菌酶（lysozyme）活力变化趋势

养殖凡纳滨对虾 45至 180天的血清测定结果表明，6次取样检测的碱性磷酸酶（ALP）、酸性磷酸酶（A C P）、超氧化物歧化酶（SOD）及溶菌酶（lysozyme）活力指标，实验组A均显著高于对照组B（P＜0.05），其中各实验组之间、对照组之间差异性不显著；综合分析表明，饲料中添加了乳酸菌的实验组A能够显著提高凡纳滨对虾血清中碱性磷酸酶（ALP）、酸性磷酸酶（ACP）、超氧化物歧化酶（SOD）及溶菌酶（lysozyme）活力（P＜0.05）。

讨论

研究报道和生产实践证明，益生菌是水产养殖中传统化学药物的良好替代选择。目前益生菌应用已经十分普遍，能有效提高养殖对象的生长性能，能直接影响动物肠道代谢作用。益生菌可以通过增强机体免疫功能来提高抗病能力，增强抗病毒能力。虾体内水解酶具有破坏和消除侵入体内异物的功能，对机体免疫起重要作用，其中酸性磷酸酶和碱性磷酸酶是比较重要的水解酶，是反映对虾免疫能力的重要指标，在对虾防御反应中发挥重要作用。益生菌的作用机制之一就是通过与肠道内的病原菌争夺附着位点和营养成分，在肠道内达到一定数量成为优势菌，通过影响肠道微生态而起作用。对虾和其他无脊椎动物一样，免疫系统较原始，缺乏真正意义上的抗体，只能依靠先天性的免疫反应来提高对疾病的抵抗力。

结论

本实验结果显示，凡纳滨对虾摄食一定剂量的添加益生菌饲料后，血清中碱性磷酸酶（ALP）、酸性磷酸酶（ACP）、超氧化物歧化酶（SOD）及溶菌酶（lysozyme）活力均有显著性提高，说明益生菌对以上4个免疫指标产生了积极的影响。喂食含有乳酸菌的饲料试验组比喂食不含乳酸菌的对照组，其生长指标得到大大提升。说明乳酸菌在养殖过程的应用，能够在一定程度上改善养殖水环境或鱼的肠道内微生物平衡，通过激发机体的体液免疫来增强机体免疫机能，其作用机理可能是通过细菌本身或细胞壁成分刺激非特异性免疫系统发挥作用，从而可以作为良好的免疫增强剂提高动物免疫力。