2型糖尿病合并冠心病患者miR⁃26a与心电图校正QT间期的关系及临床意义

李智慧 安晓飞 彭梦乐 于瑞静

冠心病（Coronary heart disease，CHD）是2 型糖尿病（Type 2 diabetes mellitus，T2DM）患者常见的并发症之一，冠脉粥样斑块的性质是影响病情转归的重要因素，软斑块患者发生急性冠脉综合征的风险明显高于混合斑块及钙化斑块患者［1⁃2］。冠状动脉CT血管成像（coronary computed tomography angiography，CCTA）是临床上诊断CHD并评估斑块性质的常用方法，因为检查中需要使用造影剂，所以不适用于CHD病情及斑块性质变化的连续动态评估。CHD 发病过程中心肌缺血会出现QT 间期延长等心电图变化，有研究证实心电图校正QT（QT correction，QTc）间期延长与2 型糖尿病患者多种心血管危险因素存在相关性［3⁃4］。另有研究报道，微小RNA（microRNA，miR）⁃26a在心血管系统中发挥重要的调控作用，一方面miR⁃26a影响心脏电生理、过表达miR⁃26a能够发挥抗心律失常作用［5］，另一方面miR⁃26a 影响动脉粥样硬化进程、miR⁃26a 表达降低与斑块增厚有关［6］。但目前miR⁃26a及QTc间期在T2DM合并CHD患者斑块性质评估中的价值尚不清楚。因此，本研究将以T2DM 合并CHD 为对象，分析外周血miR⁃26a 表达水平与心电图QTc间期的相关性及临床意义。

1 对象与方法

1.1 研究对象

选择2018年1月至2020年12月期间在河南省直第三人民医院接受CCTA 检查的135 例T2DM患者，80 例合并CHD 的患者作为T2DM+CHD 组，55 例未合并CHD 的患者作为T2DM 组，纳入标准：①T2DM 符合《中国2 型糖尿病防治指南（2017年版）》中的诊断标准［7］；②CHD 符合《稳定性冠心病诊断与治疗指南》中的诊断标准［8］；③均接受CCTA 检查。排除标准：①既往有心肌梗死、脑梗死等病史；②合并心脏瓣膜病、心律失常或有起搏器植入病史；③正在服用可能影响心律的药物；④合并恶性肿瘤、自身免疫性疾病、急慢性感染。另取同期在本院体检的100 例健康志愿者作为对照组。T2DM+CHD 组中男性48 例、女性32 例，年龄平均（52.49±9.38）岁；T2DM 组中男性29 例、女性26 例，年龄平均（50.83±11.23）岁；对照组中男性63例、女性37 例，年龄平均（49.59±8.38）岁。3 组间一般资料的比较，差异无统计学意义（P>0.05）。

1.2 QT 间期及QTc 间期评估方法

T2DM 患者在CCTA 前进行心电图检查，对照组在体检时进行心电图检查，记录QT 间期及RR 间期，按照公式（QT 间期/RR 间期1/2）计算QTc 间期［8］。

1.3 CCTA 检查方法

T2DM 患者接受CCTA 检查，检查前2～3 min给予硝酸甘油舌下含服，而后使用双筒高压注射器向外周静脉注射非离子型对比剂60 mL、速率（4.5～5.0）mL/s，采用人工智能触发扫描系统确定延迟时间，其他参数包括电压120 kV、电流280 mA、层厚0.75 mm、球管旋转时间0.33 s/r。参照《稳定性冠心病诊断与治疗指南》［8］，根据扫描结果，管腔狭窄≥25%认为存在冠状动脉粥样硬化，测量斑块CT 值并判断斑块性质：软斑块的CT 值≤60 HU、混合斑块的CT 值60⁃130 HU、钙化斑块的CT 值≥130 HU。

1.4 外周血miR⁃26a 表达水平的检测方法

取三组的外周抗凝血样本，采用全血RNA 提取试剂盒（赛默飞世尔公司）提取RNA，采用一步加A 法miR 反转录试剂盒（哈尔滨海基生物科技公司）将进行反转录，得到cDNA 后采用荧光定量PCR 检测，分别扩增miR⁃26a 及U6，以U6 为内参、计算miR⁃26a 的表达水平。

1.5 血清指标检测方法

T2DM 患者在CCTA 前收集外周静脉血5 mL，静置30 min 后在离心机中按照温度4℃、离心力3 000 g 离心10 min（半径为10 cm），收集血清后采用酶联免疫吸附法试剂盒（上海酶联公司，中国）检测肿瘤坏死因子⁃α（tumor necrosis factor⁃α，TNF⁃α）、白介素⁃6（interleukin⁃6，IL⁃6）、细胞间黏附分子⁃1（Intercellular adhesion molecule⁃1，ICAM⁃1）、血管细胞黏附分子⁃1（Vascular cell adhesion molecule⁃1，VCAM⁃1）、8⁃羟基脱氧鸟苷酸（8⁃hydroxydeoxy⁃guanosine，8⁃OHdG）的含量，采用分光光度法（北京索莱宝公司，中国）检测丙二醛（Malondialdehyde，MDA）、超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase，SOD）、还原型谷胱甘肽（Gutathione，GSH）的含量。

1.6 统计学方法

采用SPSS21.0 软件录入数据，计量资料采用（±s）表示，多组间比较采用单因素方差分析、进一步采用LSD⁃t 法两两比较，两组间比较采用t检验，相关性分析采用Pearson 检验，QTc 间期对软斑块的诊断价值采用ROC 曲线分析。以P<0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 3组外周血miR⁃26a表达水平、QTc间期的比较

T2DM+CHD 患者的外周血miR⁃26a 表达水平低于T2DM 组、对照组，QTc 间期均高于T2DM 组、对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）；T2DM 组的外周血miR⁃26a 表达水平低于QTc 间期与对照组比较，差异无统计学意义（P>0.05）。见表1。

表1 3 组外周血miR⁃26a 表达水平、QTc 间期的比较（±s）Table 1 Comparison of miR⁃26a expression level in peripheral blood and QTc interval among 3 groups（±s）

表1 3 组外周血miR⁃26a 表达水平、QTc 间期的比较（±s）Table 1 Comparison of miR⁃26a expression level in peripheral blood and QTc interval among 3 groups（±s）

注：与对照组比较aP<0.05；与T2DM+CHD 组比较bP>0.05。

组别T2DM+CHD 组T2DM 组对照组F 值P 值n 80 55 100 miR⁃26a 表达水平0.42±0.16a 0.95±0.21b 1.00±0.19 31.594 0.000 QTc 间期（ms）392.62±93.63a 304.57±64.41b 301.77±69.38 25.584 0.000

2.2 T2DM+CHD 组中不同冠脉斑块性质患者外周血miR⁃26a 表达水平、QTc 间期的比较

T2DM+CHD 组中冠脉软斑块患者的外周血miR⁃26a 表达水平低于混合斑块及钙化斑块患者，QTc 间期均高于混合斑块及钙化斑块患者，差异有统计学意义（P<0.05）；混合斑块患者的外周血miR⁃26a 表达水平、QTc 间期与钙化斑块患者比较，差异无统计学意义（P>0.05）。见表2。

表2 冠脉斑块性质与miR⁃26a 表达水平、QTc 间期的关系（±s）Table 2 Relationship between coronary plaque characteristics and miR⁃26a expression，QTc interval（±s）

表2 冠脉斑块性质与miR⁃26a 表达水平、QTc 间期的关系（±s）Table 2 Relationship between coronary plaque characteristics and miR⁃26a expression，QTc interval（±s）

注：与钙化斑块患者比较aP<0.05；与软斑块患者比较bP>0.05。

冠脉斑块性质软斑块混合斑块钙化斑块F 值P 值n 21 34 25 miR⁃26a 表达水平0.32±0.11a 0.45±0.13b 0.47±0.20 21.932 0.000 QTc 间期(ms)451.51±92.97a 371.59±82.72b 371.77±90.16 34.491 0.000

2.3 T2DM+CHD 组中外周血miR⁃26a 表达水平与QTc 间期的相关性

经Pearson 检验，T2DM+CHD 组中外周血miR⁃26a 表达水平与QTc 间期具有负相关关系（r=-0.500，P<0.05）。见图1。

图1 T2DM+CHD 组中外周血miR⁃26a 表达水平与QTc 间期的相关性Figure 1 Correlation of miR⁃26a expression level in peripheral blood and QTc interval in T2DM+CHD group，

2.4 外周血miR⁃26a 表达水平、QTc 间期对T2DM+CHD 患者冠脉软斑的诊断价值

外周血miR⁃26a 表达水平、QTc 间期诊断T2DM+CHD 患者冠脉软斑的曲线下面积分别为0.770（95%CI：0.653～0.888）、0.737（95%CI：0.604～0.870），截断值为0.362、455 ms，对应的灵敏度分别为72.88%、83.05%，特异性分别为76.19%和61.90%。见图2。

图2 miR⁃26a 表达水平、QTc 间期对冠脉软斑的诊断价值Figure 2 The diagnosis value of miR⁃26a expression level、QTc for coronary soft plaque

2.4 T2DM+CHD 组中不同miR⁃26a 表达患者血清炎症细胞因子的比较

T2DM+CHD 组miR⁃26a 表达≥0.362 患者的血清TNF⁃α、IL⁃6、ICAM⁃1、VCAM⁃1含量低于miR⁃26a表达<0.362 的患者，差异有统计学意义（P<0.05）。见表3。

表3 T2DM+CHD 组中不同miR⁃26a 表达患者血清炎症细胞因子的比较（±s）Table 3 Comparison of serum inflammatory cytokines between patients with different miR⁃26a expression in T2DM+CHD group（±s）

表3 T2DM+CHD 组中不同miR⁃26a 表达患者血清炎症细胞因子的比较（±s）Table 3 Comparison of serum inflammatory cytokines between patients with different miR⁃26a expression in T2DM+CHD group（±s）

miR⁃26a≥0.362<0.362 t 值P 值n 23 57 TNF⁃α（ng/mL）22.55±7.41 31.92±9.71 4.669 0.000 IL⁃6（pg/mL）76.52±10.35 95.61±18.57 5.856 0.000 ICAM⁃1（ng/mL）247.46±52.77 314.58±73.52 4.5777 0.000 VCAM⁃1（ng/mL）231.27±45.67 274.51±89.45 2.857 0.005

2.5 T2DM+CHD 组中不同QTc 间期患者血清氧化应激指标的比较

T2DM+CHD 组QTc 间期≥455 ms 患者的血清MDA、8⁃OHdG 含量低于QTc 间期<455 ms 的患者，SOD、GSH 含量高于QTc 间期<455 ms 的患者，差异均有统计学意义（P<0.05）。见表4。

表4 T2DM+CHD 组中不同QTc 间期患者血清氧化应激指标的比较（±s）Table 4 Comparison of serum oxidative stress indexes between patients with different different QTc interval in T2DM+CHD group（±s）

表4 T2DM+CHD 组中不同QTc 间期患者血清氧化应激指标的比较（±s）Table 4 Comparison of serum oxidative stress indexes between patients with different different QTc interval in T2DM+CHD group（±s）

QTc 间期≥455 ms<455 ms t 值P 值n 23 57 MDA（μmol/mL）7.03±1.32 8.19±1.85 3.154 0.002 8⁃OHdG（ng/mL）10.94±2.36 14.58±3.26 5.571 0.000 SOD（U/mL）68.63±9.04 51.32±9.29 7.691 0.000 GSH（U/mL）58.72±10.08 42.57±7.76 6.894 0.000

3 讨论

我国近些年的T2DM 发病率不断升高，相应血管并发症的发生率也呈增加趋势。CHD 是T2DM 常见的血管并发症，流行病学资料显示，T2DM 合并CHD 患者表现出更为严重的冠脉狭窄程度及斑块稳定性，相较冠脉狭窄程度，斑块稳定性是影响预后更为重要的因素。T2DM 合并冠脉软斑块患者发生急性冠脉综合征的风险更高［9⁃10］。因此，在临床实践中需要准确评估T2DM合并CHD 患者的冠脉斑块性质。

miR⁃26a 是一种具有心血管保护作用的miR，在冠心病、脑梗死等患者的外周血中均呈低表达趋势［11⁃12］，本研究表明低表达的miR⁃26a 与T2DM患者发生CHD 有关。

国内赵欣［5］的研究显示，miR⁃26a 参与心脏电生理的调控，过表达miR⁃26a 具有抗心律失常的作用。在心肌发生缺血缺氧损伤的过程中，心脏电生理也会发生相应变化，通过心电图检查能够评估心脏电生理的变化、进而反映心肌损伤的程度。心电图QT 间期是心室除极开始至复极结束的时间间隔，用RR 间期进行校正得到QTc 间期能够更准确的评价心肌电生理状况。当心肌发生损伤时，心电图会出现QTc 间期延长的表现。有研究证实，ST 段抬高心肌梗死患者QTc 间期延长且与预后有关［13⁃14］；另有糖尿病相关的研究证实，QTc 间期延长是糖尿病患者发生颈动脉粥样硬化的危险因素［15］。本研究的分析证实，与不合并CHD 的T2DM 患者及健康志愿者比较，T2DM 合并CHD 患者的QTc 间期均延长，提示在T2DM 患者发生CHD 的过程中可能存在心肌缺血缺氧损害、心电图检查表现出QT间期的变化。

本研究结果提示在T2DM 患者发生CHD 的过程中低表达的miR⁃26a 可能影响心脏电生理、造成QTc 间期延长。进而本研究还分析了这两项指标与CHD 冠脉斑块性质的关系，通过CCTA 检查将CHD 冠脉斑块性质分为软斑块、混合斑块和钙化斑块，通过比较不同斑块性质T2DM 合并CHD 患者miR⁃26a 表达水平、QTc 间期的差异可知：与混合斑块和钙化斑块患者比较，软斑块患者的miR⁃26a 表达降低、QTc 间期明显延长，提示miR⁃26a 的低表达及QTc 间期延长与斑块稳定性降低有关。进一步通过ROC 曲线分析证实，miR⁃26a 及QTc 间期对T2DM 合并CHD 患者的软斑块具有诊断价值。

在T2DM 患者CHD 的发病过程中，miR⁃26a造成QTc 间期延长以及斑块性质改变的相关分子机制可能是炎症反应及氧化应激反应的持续激活，多种炎症细胞因子及氧化应激产物可造成内皮损伤、导致斑块稳定性降低，同时也会引起心肌间质损害、改变心肌电生理并出现心脏传导系统异常，在心电图上表现为QTc 间期的延长［16］。TNF⁃α、IL⁃6、ICAM⁃1、VCAM⁃1 是目前已知与CHD 发病密切相关的炎症细胞因子，介导炎症反应的级联放大激活［17］；MDA和8⁃OHdG 是细胞发生氧化应激损伤的产物，SOD和GSH 则是起到细胞保护作用的抗氧化酶、在氧化应激损伤过程中消耗增加［18］。本研究结果提示T2DM 患者CHD 的发病过程中，炎症反应及氧化应激反应的激活与斑块性质变化、QTc 间期延长相关。

综上所述，本研究通过一些列临床数据的收集及血清指标的检测表明QTc 间期在T2DM 合并CHD 患者斑块稳定性评估中的价值，检测QTc 间期对冠脉软斑块具有诊断价值，并且通过血清炎症指标及氧化应激指标的检测证实QTc 间期在冠脉斑块稳定性变化中延长可能与炎症反应及氧化应激反应的激活有关。