气相色谱法测定消栓通络片中龙脑和异龙脑的含量及质量评价

李存金，邓杰华，吴喆，周云峰

1.江西省药品检查员中心，江西 南昌 330029；2.宜春市检验检测中心，江西 宜春 336000

消栓通络方出自北京同仁堂传统秘方［1］，其中消栓通络片收载于现行《中国药典》，由川芎、丹参、黄芪、泽泻、三七、槐花、桂枝、郁金、木香、冰片、山楂共11 味中药制成，有活血化瘀，温经通络之功效［2］。方中冰片为合成品，其主要成分为龙脑和异龙脑，有开窍醒神作用。现代研究表明，冰片可促进药物通过血脑屏障、黏膜、胃肠道、皮肤等部位，可发挥引领其他药物直达病所作用［3-5］，作为佐使药，正如《本草衍义》所述冰片：“独行则势弱，佐使则有功”［6］。

现行质量标准［2］对该中成药中冰片的质量控制为化学鉴别。因中成药成分复杂［7］，采用化学反应鉴别其中某种成分往往专属性不强，在监督抽验和研究中亦发现不同厂家或批次的制剂中冰片主要成分含量存在较大差异。为了准确反映样品中冰片的质量，本实验建立了消栓通络片中冰片（以龙脑和异龙脑的总量计算）的含量测定方法，并以此为指标对11 家企业生产的26 批次样品进行质量评价。

1 仪器与材料

7890A 气相色谱仪（安捷伦科技有限公司）；MS205DU 电子天平（梅特勒-托利多仪器有限公司）；PL-S60 超声波清洗仪（东莞康士洁超声波科技有限公司）。龙脑对照品（来源：中国食品药品检定研究院，批号110881-201709，含量：99.6%），异龙脑对照品（来源：中国食品药品检定研究院，批号111512-201904，含量：98.4%）；乙酸乙酯（色谱纯，天津光复科技发展有限公司）。

消栓通络片共26 批次涉及11 个生产企业（18批次来自市场监督抽样，8 批次通过网络平台自购），样品信息见表1。

表1 消栓通络片样品信息

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Agilent DB-WAX（30 m×0.45 mm×0.85 μm)；火焰离子化检测器（FID）；进样口温度200 ℃；检测器温度300 ℃，分流比为2∶1；柱温：140 ℃，保持20 min；进样量为1 μL。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备精密称取龙脑对照品19.03 mg、异龙脑对照品20.96 mg 分别置10 mL 容量瓶中，加乙酸乙酯适量溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液。

2.2.2 供试品溶液的制备取样品20 片，除去包衣，研细，取约0.2 g，精密称定，置10 mL 容量瓶中，加乙酸乙酯适量溶解，冰浴超声处理（功率250 W，频率40 kHZ）30 min，放至室温，加乙酸乙酯至刻度，摇匀，即得。

2.2.3 阴性样品溶液的制备精密称取不含冰片的消栓通络片阴性样品约0.2 g，按“2.2.2”项下方法制备阴性样品溶液。

2.3 方法学考察

2.3.1 标准曲线制备精密吸取龙脑对照品储备液、异龙脑对照品储备液，加入乙酸乙酯配制系列浓度的对照品溶液，按照“2.1”项下色谱方法进行测定。以峰面积Y为纵坐标，对照品溶液浓度X（μg/mL）为横坐标，绘制标准曲线。龙脑、异龙脑的线性范围、回归方程和相关系数见表2。

表2 龙脑、异龙脑线性关系

2.3.2 专属性实验取“2.2”项下制备的阴性样品溶液、供试品溶液、对照品溶液分别照“2.1”项下色谱方法进行测定，采集色谱图，如图1 所示，供试品溶液出现与龙脑、异龙脑保留时间一致的色谱峰，且阴性样品色谱图在相应位置处无相应色谱峰，说明该方法专属性较好。

图1 GC色谱图：A.混合对照品；B.供试品；C.阴性样品

2.3.3 精密度试验精密吸取龙脑对照品溶液、异龙脑对照品溶液，按照“2.1”项下色谱条件，连续进样6 次，记录龙脑、异龙脑的峰面积，结果显示，龙脑、异龙脑峰面积的RSD 值分别为0.5%、0.8%，表明方法精密度好。

2.3.4 重复性试验取消栓通络片样品（编号25）粉末0.2 g，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录龙脑、异龙脑的峰面积，并计算其含量。结果龙脑、异龙脑含量RSD（n=6）值分别为1.6%、1.5%，表明该方法重复性好。

2.3.5 稳定性试验取同一份消栓通络片样品供试品溶液，分别于0、2、4、8、12、24 h 进样测定，记录龙脑、异龙脑的峰面积，计算峰面积RSD 为1.8%、1.9%，表明样品溶液在24 h 内稳定。

2.3.6 加标回收试验精密称取6 份消栓通络片样品（编号25）各0.1 g，加入龙脑、异龙脑对照品溶液适量，按“2.2.2”项下方法制备，按“2.1”项下色谱条件进样测定，计算回收率。结果龙脑的回收率范围为96.00%～100.27%，异龙脑回收率范围为96.32%～101.22%，RSD 值均小于2.0%，表明该方法准确度高。

2.4 实验结果

26 批次市售消栓通络片均检出与龙脑对照品、异龙脑对照品保留时间一致的色谱峰，计算样品中龙脑、异龙脑的含量，结果见表3。26 批次样品中冰片含量（以龙脑、异龙脑的总量计）在0.42～4.49 mg/片之间，不同企业冰片含量差异较大，如K 公司的消栓通络片中冰片含量最高为4.49 mg/片，为B 公司（0.42 mg/片）的10 倍，且同一企业不同批次样品中冰片的量呈总体较离散状态。

表3 消栓通络片中冰片含量测定结果 mg/片

3 讨论

《中国药典》2020 年版一部冰片（合成龙脑）标准中含量测定项规定“本品含龙脑（C10H18O）不得少于55.0%”。计算本研究中26 批次样品中龙脑含量与龙脑、异龙脑总量的比值在55.9%～64.3%之间。消栓通络片现行质量标准采用冰片升华物与香草醛浓硫酸发生显色反应来鉴别冰片［2］，专属性不强，且不能反映方中冰片的质量、投料量、主要成分含量及制剂成型的质量控制等。本研究采用气相色谱法测定了消栓通络片中龙脑和异龙脑的含量，以二者总量来计算冰片的含量，能有效控制冰片的质量、投料量及制剂成型过程。结果不同厂家26批次制剂中冰片含量差异较大。

供试品溶液制备参考相关文献报道［8-9］，考察了不同超声时间的影响，最终选择超声30 min 作为最佳提取条件。

消栓通络片制法为除冰片外的其余药味制粒、干燥后，冰片以原粉直接加入，后续混匀、包衣工艺均未涉及连续高热，理论转移率应接近90%，根据处方中冰片用量5.7 mg/片，以实际样品中龙脑、异龙脑总量计算冰片的平均转移率仅为42.2%，分析原因可能是冰片属挥发性药材，原材料质量、生产工艺、包衣辅料、包装材料、贮存条件等因素都会影响其含量［9］。以平均转移率42.2%计算，拟定本品每片含冰片（以龙脑、异龙脑总量计）不得少于2.41 mg/片。不同企业、相同企业不同批次生产的消栓通络片中冰片含量差异较大，26 批次样品中低于拟定限度（2.41 mg/片）的有10 批次，合格率为61.5%，提示部分企业冰片原料质量、投料量可能存在问题，或制剂在生产、储存过程中冰片挥发而导致龙脑和异龙脑含量偏低。建议法定检验标准中增加消栓通络片中冰片的含量测定项；生产企业按规定优化工艺，如将冰片进行包合后再入药，以及改进包衣辅料、包装材料等，以保证其临床用药的有效性。