2018—2021年山东省血液中心单采血小板和献血者乙肝表面抗原ELISA复检阳性情况分析

于媛 陈剑锋 陈元锋

血小板在生理性止血、维持血管壁完整性等过程中起着重要作用，单采血小板是临床常用的血液成分之一。单采血小板具有纯度高、受血者机体不易产生针对人类白细胞抗原、人类血小板抗原的抗体等优点[1]，在抢救患者生命中具有不可替代的作用，临床需求量不断增加。但由于单采血小板采集过程较全血复杂，需要一个相对固定献血场所，献血者采集时间更长，献血过程中更易出现献血反应。单采血小板献血者需要对血液安全和无偿献血的意识相对较高，且其招募要求比全血献血者更加严格等多种原因增加了献血者的招募难度[2]，因此单采血小板供应常常不能满足临床需要。所以采供血机构非常关注血液质量，单采前的筛查工作尤显重要，以期减少血液的报废。现对山东省血液中心2018—2021年单采血小板和单采献血者乙肝表面抗原（hepatitis B virus surface antigen，HBsAg）酶联免疫吸附测定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）复检阳性情况进行回顾性分析，探讨提高初筛单采献血者HBsAg的检出能力，对避免血小板复检出现阳性报废率以及降低血液资源浪费率的相关影响意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料

研究对象为2018—2021年在山东省血液中心捐献单采血小板的无偿献血者，需符合国家《中华人民共和国献血法》[3]《献血者健康检查要求（GB 18467—2011）》[4]《血站技术操作规程》[5]等相关规定要求，并根据知情同意原则在唐山启奥科技SHINOW 9.5系统中登记相关信息。

1.2 方法

献血者采前需做健康征询、一般检查合格后进行血液初筛检测，检测项目包括血型、丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase，ALT）、血液细胞计数、HBsAg。检测结果合格后即可进行单采。单采献血者HBsAg初筛均采用英科新创乙肝胶体金试纸条法，按试剂说明书要求检测标本。2018—2020年采用全血检测，2021年采用全血离心后血浆检测。

1.3 观察指标

试纸条上检测区和对照区各出现1条红色印线为HBsAg快速检测法阳性。ELISA复检不合格定义如下：用2种不同厂家的试剂进行检测，2种试剂均阳性判为阳性；1种试剂阳性再用2种试剂对原管进行双孔检测，至少1孔阳性亦判为阳性。对2种试剂均判为阴性的标本再进行核酸检测，核酸实验反应性标本判定为核酸反应阳性不合格。

1.4 统计学方法

用唐山启奥科技SHINOW 9.5系统中统计功能模块分析，SPSS 26.0（IBM公司）进行数据分析，计数资料表示为n（%），采用χ2检验。两两间的比较采用Bonferroni调整法进行调整，P＜0.008 3为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 单采献血者情况

2018—2021年，山东省血液中心共采集单采血小板献血者15 495人，因为有献血者多次参加献血，共采集51 129人次。ELISA复检HBsAg阳性人次数33人次，约占总人次的0.6‰。ELISA复检HBsAg阳性人数33人，约占总人数的2.1‰。各年情况见表1。2021年与2018、2019年、2020年相比及各年间比较复检HBsAg（+）单采血小板献血者人次比差异无统计学意义，献血者人数比差异无统计学意义。

表1 2018—2021年山东省血液中心乙肝表面抗原ELISA复检阳性单采血小板献血者数据

表1 （续）

2.2 单采血小板情况

2018—2021年，山东省血液中心单采血小板共采集86 364份，ELISA复检HBsAg阳性51份，约占采集总份数的0.6‰。各年份情况见表2。2021年与2018、2020年相比，复检HBsAg（+）单采血小板比例显著下降，差异有统计学意义。

表2 2018—2021年山东省血液中心乙肝表面抗原ELISA复检阳性单采血小板数据

3 讨论

在献血过程当中，为保障献血者机体健康以及避免在输血过程当中出现传染病等相关性问题。我国血站技术操作规程当中，对于上述问题有所明确。首先，供血机构应当对献血者机体健康进行初筛及复检，在初筛当中，内容应当包含血红蛋白检测，同时，血小板献血者应当对献血人员血小板计数以及红细胞比容等相关数据进行综合评判。此外，各地区应当根据自身条件以及疾病流行史，对血型、ALT等检测项目有所增加。各采供血机构在对单采献血者进行初筛检测项目设计选择时结合了自身的实际情况，比如新疆[6]、广州[7]及郑州[8]等地单采初筛检测项目均包括血型、ALT、血液细胞计数、HBsAg、抗-HCV、抗-TP、抗-HIV，所有检测结果合格后进行单采。东莞市[9]初筛项目包括ALT、血常规、HBsAg、抗-TP。唐山市[10]经血传播疾病初筛项目包括ALT、HBsAg、抗-TP、抗-HIV。本中心多年来初筛检测项目均是血型、ALT、血液细胞计数、HBsAg，与成都[11]、深圳[12-13]等地区相同。

通过分析我国流行病史可发现，在我国，乙型肝炎发病几率较高，对我国民众身心健康造成严重损害。引起患者出现乙型肝炎原因，与患者感染乙肝病毒有直接关联。在我国基础民众当中，大约有10%人群均携带乙型肝炎病毒[14]。乙型肝炎具有较长的潜伏期，当前对于该疾病的诊断主要依赖于血清标志物检测[15]，目前广大供血机构对于献血者在血液检测复检当中，必检指标为HBsAg。由于乙型肝炎在发病初期时无显著临床症状，因此，在血液检测过程当中，检测乙肝病毒标志物具有显著影响意义。同时，在进行检测过程当中，应当选取具有较高的灵敏度及特异性手段[16-17]，最常用的检测方法有酶联免疫法ELISA法与胶体金法[14-18]。ELISA法与胶体金免疫层析法在乙肝表面抗原检测方面，具有显著应用意义，同时，还可发挥无放射性污染等相关性优点[14]。面对HBsAg使用胶体金试纸法检测方法，可全面发挥检测结果直观快速、操作过程简单以及无需特殊设备等多方面优点，因此，胶体金试纸检测手段，在广大采供血机构血液采集筛查方面，得到广泛应用。ELISA通过采用抗原抗体结合的专一性，对免疫反应进行定量及定性检测，上述手段不会对血液样本中抗体及抗原免疫学特性有所改变。通过保留酶活性物质标记的抗体或抗原与吸附在载体上的已知抗原或抗体结合，并加入底物产生化学反应。可对抗体抗原是否出现特异性反应有所认知并对底物颜色深浅进行综合评判，用来分析抗体水平。同时，该检测手段在检测当中，具有操作较为便捷、结果清晰易判读、成本较低以及资料易储存整理等相关性优点，因此，应用价值较为积极。此外，在检测过程当中，由于加入酶物质，对反应效果有极大增强，使得ELISA发挥较高灵敏度及特异性等相关性优点[19]。在进行大批量血液标本检测时，更加快捷及迅速。因此，目前各地区实验室当中常广泛应用HBsAg检测方法[14]。但ELISA方法也存在操作方法较复杂等缺点[20]，所以广泛应用于采供血机构HBsAg的血液检测复检中。

经统计，本中心2018—2021年单采献血者HBsAg ELISA复检阳性人数比例和人次比例均较低，阳性人数比例在0.9‰～2.4‰，阳性人次比例在0.3‰～0.9‰。2021年中心共采集了16 774人次单采血小板，复检阳性人次降至最低5例。胡静[21]统计了广州惠州市2016年1月—2019年12月单采血小板献血者7 865人，ELISA复查HBsAg阳性率为1.72%，中心低于相关数据。李仲平等[7]统计了广州血液中心2014年1月—2018年3月单采血小板共157 692人次，复检HBsAg双试剂阳性人次数比例约2.1‰。2016—2020年重庆地区[22]单采血小板献血者共采集68 755人次，复检HBsAg阳性为133例，比例约为1.9‰。2021年中心ELISA复检阳性人次比例0.3‰均低于相关报导。因为单项核酸HBV-DNA（+）的单采献血者人次比例，中心2018—2021年在0～0.4‰之间，重庆地区统计约为0.45‰。2021年中心的比例约为0.2‰，与报导相比也处于较低水平。

2018—2021年中心单采血小板HBsAg ELISA复检阳性报废率在0.2‰～0.9‰，2021年比例降至最低约0.2‰，与2018年和2020年0.9‰相比均明显降低，考虑与2021年改用离心后血浆检测方法有关。2021年和2019年相比没有显著差异的原因考虑与2019年8名阳性献血者捐献双份血小板比率较低有关。2018—2021年复检HBsAg阳性的献血者双份捐献率分别是66.7%、25.0%、72.7%、40%，可以看出2019年比例为4年内最低。

刘艳芳等[23]统计玉溪市中心血站2015—2017年共采集1 913份单采血小板，HBsAg复检阳性报废率约为0.5‰。王珺等[8]统计了郑州市2013—2017年采集单采血小板，ELISA复检HBsAg阳性率为1‰。可以看出中心2021年的阳性报废比例约为0.2‰，与其他采供血机构相比处于较低水平。

胶体金法试剂灵敏度较ELISA低是引起HBsAg漏检的主要原因之一[18，24]。贺生梅[25]将献血者ELISA法和核酸检测HBsAg阳性的样本171例再次采用胶体金法复检，检出阳性47例。李昶[18]检测HBsAg指标时，通过采取胶体金法及酶联免疫法，对送检4 500例血液样本进行综合评判，其中通过采用酶联免疫法检测后，检出阳性标本305例，阳性率为6.78%；而使用胶体金法，样本检测后检出阳性标本298例，阳性率为6.62%。而分析2种检测方法，共同检测时检出阳性血液标本共295例。酶联免疫法与胶体金法相对比检出结果，阳性率有明显增加。同时，存在3例样本通过胶体金法检测后，出现结果阳性，而酶联免疫法检出阴性。杨俊鸿等[26]对31例单采献血者进行ELISA检测HBsAg，当检测结果为阳性时，再次使用胶体金法进行再次检测发现，存在15例阳性及16例阴性问题。总的一致性为48.4%。ELISA阳性标本中S/CO值小于10，而面对漏检标本，通过采取胶体金法进行检测后发现，阴性结果是4例，阳性结果3例，一致性为9.7%；S/CO 值在10～30时用胶体金法检测为阳性的标本总共有14例，阴性为2例，一致性为45.2%；S/CO值大于30的9例标本再次用胶体金法检测全部检出，一致性为100%。何卫社等[27]通过对319例阳性标本采取ELISA检测HBsAg，发现6例S/CO值在29以上标本胶体金法复检仍为阴性。而分析胶体金法漏检因素包含少量标本存在HBV变异或亚型，以及试剂包被片段不同有直接关联。此外，部分阳性标本由于水平过高，与抗原抗体结合最大比例不适宜，也会出现假阴性结果[28]。

乙肝胶体金试纸条法说明书要求检测标本全血（指血或耳血）、血浆、血清均可选用。在实际工作中，全血加样易出现混有气泡、加样量不足、全血过于粘稠辅助液添加不准确等情况。另外主要是工作人员因素[27]，如责任心不够、培训不到位、观察时间不够、试剂贮存不当、献血者人数较多时未做标记等原因影响结果的正确判定导致漏检。通过对多方面因素进行综合评判后，血液检验中心应当在实际工作当中，采取适宜解决措施，以此对初筛HBsAg遗漏问题有所解决。（1）首先，应当对血液样本检验操作人员进行综合培训，以此提升操作人员及技术能力，尤其面对新入职员工。（2）明确了使用离心后血浆检测，不用辅助液。乙肝试纸条渗透速度及自身快慢，与检测结果准确性有直接关联[29]。当乙肝试纸条渗透速度太快或太慢时，均会引起检测结果出现假阴性现象。从而保证加样量稳定，规范工作人员的操作。（3）献血者初筛检测时制定好先做乙肝试纸条检测再做转氨酶检测的步骤流程，这样减少献血者等待时间，优化采血流程，提高献血者的献血体验和满意度。（4）标记每一位献血者的条码，防止献血者过多时出现误判、漏判，保证结果的准确性。（5）试验操作严格遵循说明书，规范加样，记录实验开始和结束时间，保证试纸条判读时间至少为10 min后。（6）做好试剂的质控把关。试剂贮存得当，防止受潮，开盖时准确标识开启时间及失效时间，开盖后尽快使用。（7）保证筛查标本离心后无溶血、脂肪血等情况。（8）保证单采初筛实验环境稳定。（9）制定量化考核目标，质管科加强考核监督，奖惩并进。

本中心采取了上述综合措施，2021年ELISA复检的HBsAg阳性单采血小板报废率降至近年来最低约0.2‰。单采献血者初筛时采用全血离心后血浆进行HBsAg的胶体金试纸条检测方法降低了单采血小板的报废，该方法适用于单采献血者的初筛。血液质量和输血安全是采供血机构的重心，今后中心将继续积累数据，持续观察，不断摸索改进，减少宝贵的血小板资源浪费。