外周血nCD64指数在鉴别SLE患者并发细菌感染与疾病活动期中的应用

梁 会，李 灿

(1.郑州市第二人民医院检验科；2.河南中医药大学第一附属医院，郑州 450000)

系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus，SLE)在青年女性中较常见，病因尚未彻底明确，可能与家族遗传、内分泌异常、感染、免疫功能异常有关[1]。研究指出该病发生主要与细胞免疫、体液免疫功能出现异常相关，发病时可导致全身脏器系统受累[2]。细菌感染在这类患者中较常见，但对于全身乏力、发热的病例而言，由于缺乏典型症状，临床难以鉴别患者是合并细菌感染或处于疾病活动期。既往采取常规炎症指标对SLE患者病情进行鉴别，虽有一定作用，但总体而言特异性较差[3]。近年来，研究发现nCD64在感染性疾病的诊断中具有一定价值，是免疫球蛋白G(immunoglobulin G，IgG)Fc段的一种受体，在中性粒细胞中表达极低，在单核细胞、树突状细胞、巨噬细胞内存在表达，而一旦机体处于感染状态时，粒细胞集落刺激因子以及细菌脂多糖会刺激中性粒细胞表面CD64的表达，致其表达水平增高[4-5]。鉴于此，本次纳入160例SLE患者进行研究，分析外周血中性粒细胞CD64(neutrophil CD64，nCD64)指数对患者并发细菌感染与疾病活动期的鉴别价值，为临床诊疗提供参考依据。

1 对象与方法

1.1 对象 选取2018年9月—2021年9月河南中医药大学第一附属医院诊治的SLE患者160例开展前瞻性研究，根据SLE疾病活动指数(SLE disease activity index，SLEDAI)评估患者的疾病进展情况，通过病原学检查分析有无细菌感染，其中38例合并细菌感染的稳定期患者作为细菌感染稳定期组，40例合并细菌感染的活动期患者为细菌感染活动期组，40例非细菌感染的稳定期患者为稳定期组，42例非细菌感染的活动期患者为活动期组，取同期体检的健康志愿者40例为对照组。SLEDAI标准[6]：0～4分提示基本无活动，5～9分、10～14分、≥15分分别表示轻度、中度、重度活动，将基本无活动者视为稳定期组，其他患者则纳入活动期组。纳入标准：①SLE患者：符合SLE的诊断标准[7]，经免疫学检查、生化检查、组织病理学检查等证实为SLE；年龄≥18岁；意识清醒，认知正常。②对照组：同期体检的健康志愿者；年龄≥18岁；意识清醒，认知正常。排除标准：妊娠、哺乳期女性；患其他结缔组织疾病；药物性SLE；患慢性传染性疾病、血液系统疾病；恶性肿瘤；既往有精神病史；心、脑等脏器器质性病变。研究方案获伦理委员会批准，5组受试者一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。见表1。

表1 5组受试者基线资料比较

1.2 方法 所有受试者入组后，SLE患者在就诊当日采血，对照组在体检当日采血。①外周血nCD64指数检测：取抗凝全血100 μL，置于流式细胞术专用试管内，取提前处理的CD64抗体与CD45抗体(美国BD公司)加入，充分混合，室温下反应15 min，取1 mL红细胞裂解液加入，室温下反应10 min，离心5 min(1 500 r·min-1)，弃上清液。经生理盐水进行洗涤，取生理盐水400 μL加入，重悬细胞。经流式细胞仪进行测定，以CD45设门，检测中性粒细胞表面CD64平均荧光强度(mean fluoresce intensity，MFI)，从而计算nCD64指数。nCD64指数为中性粒细胞MFI与粒细胞之比。②其他血液指标测定：另取6 mL空腹肘静脉血，分装于两管，一管离心15 min(3 000 r·min-1)，分离血清，存至-70 ℃环境下待测。经化学发光试剂测定血清降钙素原(procalcitonin，PCT)，乳胶增强免疫比浊试剂测定C反应蛋白(C-reactive protein，CRP)。另一管采用血沉分析仪测定血沉(erythrocyte sedimentation rate，ESR)，用血细胞分析仪测定外周血白细胞计数(white blood cell，WBC)。

2 结果

2.1 5组受试者nCD64指数及其他生化指标比较 细菌感染稳定期组、细菌感染活动期组及活动期组nCD64指数、PCT、CRP、WBC均高于稳定期组与对照组，且细菌感染稳定期组、细菌感染活动期组高于活动期组；细菌感染稳定期组、细菌感染活动期组、活动期组与稳定期组的ESR均高于对照组，且细菌感染稳定期组、细菌感染活动期组高于活动期组、稳定期组；稳定期组CRP高于对照组；细菌感染活动期组各指标水平均高于细菌感染稳定期组差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 5组受试者nCD64指数及其他生化指标比较

2.2 SLE患者nCD64指数与其他生化指标的相关性分析 经相关性分析，显示SLE患者nCD64指数与PCT、CRP、ESR、WBC水平呈正相关(P<0.05)。见表3。

2.3 各检验指标对SLE患者合并细菌感染、疾病活动期的鉴别价值 经ROC曲线分析提示，nCD64指数与PCT、CRP、ESR、WBC水平鉴别SLE患者合并细菌感染与疾病活动期的AUC分别为0.812、0.775、0.736、0.741、0.743，以nCD64指数评估的AUC最大，敏感度、特异度分别为84.21%、82.86%，评估价值优于其他指标。见表4、图1。

表4 各检验指标对SLE患者合并细菌感染、疾病活动期的鉴别价值

图1 各检验指标鉴别SLE患者合并细菌感染与疾病活动期的ROC曲线

2.4 nCD64指数与临床鉴别结果的一致性分析 以病原学诊断为金标准，发现nCD64指数鉴别SLE患者合并细菌感染与疾病活动期的准确率为83.75%(67/80)，阳性预测值为82.05%(32/39)，阴性预测值为85.37%(35/41)。nCD64指数与临床病原菌鉴别结果呈高度一致(Kappa值=0.675)。见表5。

表5 nCD64指数与病原学检测的鉴别数据分析

3 讨论

SLE属于自身免疫性疾病，早期主要累及皮肤与关节部位，随着病情进展，可导致全身脏器受累，严重时会危及生命[8]。SLE以女性居多，目前，我国SLE患病率呈逐年增高趋势，这类患者因免疫功能异常，易出现细菌感染，患者感染早期伴有发热、全身乏力等症状[9]。然而，SLE活动期患者也伴有上述类似症状，临床需要及时对患者的细菌感染与疾病活动期进行鉴别，以便给予针对性治疗，避免病情延误。目前，CD64在细菌感染诊断中应用广泛，在机体存在感染的情况下，炎症因子可激活中性粒细胞表面CD64的表达，而淋巴细胞、单核细胞表面的CD64表达则不会产生明显变化[10]。故通过测定nCD64表达水平，可能为SLE患者合并细菌感染与疾病活动期的鉴别提供依据，从而更好地指导临床治疗。

本研究结果显示，与对照组比较，细菌感染稳定期组、细菌感染活动期组、活动期组的nCD64指数及PCT、CRP、ESR、WBC水平均增高，且以细菌感染活动期组最高。CD64是免疫球蛋白家族的一种跨膜糖蛋白，在炎症刺激下，其表达可在4～6 h内快速增高10倍，在22 h内达峰值，且CD64的表达非常稳定，当刺激因素去除后，其表达可逐渐恢复正常，通常在1周内恢复完全[11]。吴朝霞等[12]以恶性血液病患者进行研究，发现nCD64指数能对患者早期合并血流细菌感染进行诊断，且可用于判断预后。梅虹等[13]指出急性细菌性、病毒性感染者均可见nCD64表达上调，而细菌性感染者的nCD64表达更高，其能对细菌性、病毒性感染进行鉴别。这均提示nCD64指数对于细菌性感染的评估有重要意义，本研究发现除细菌感染组外，疾病活动期组的nCD64指数也有所增高，这可能与患者病情处于活跃状态，对nCD64表达具有刺激作用有关。而细菌感染活动期组患者同时伴有细菌感染与疾病活跃状态两种特征，nCD64指数增高则更明显。

PCT、CRP、ESR、WBC在SLE评估中应用广泛，其中PCT、CRP在机体存在炎症刺激时水平增高，ESR则在多种病理状态下增快，而WBC已被大量研究证实在细菌感染患者中增高[14-15]。本研究也提示伴有细菌感染患者的PCT、CRP、ESR、WBC水平明显增高，这主要与细菌侵袭导致的炎症刺激有关。通过进一步分析，提示SLE患者的nCD64指数与PCT、CRP、ESR、WBC水平呈正相关。nCD64能结合其配体级联放大免疫炎症反应，在机体正常时，中性粒细胞表面CD64表达极少甚至不表达，而在炎症刺激下则会使nCD64表达增强[16]。这表明nCD64表达与炎症反应有关，而PCT、CRP、ESR、WBC在炎症刺激下也会出现水平异常，故nCD64指数与上述指标间的相关性主要通过炎症刺激产生。通过绘制ROC曲线，发现nCD64指数与PCT、CRP、ESR、WBC水平对SLE患者合并细菌感染与疾病活动期均有鉴别价值，以nCD64指数的鉴别效果最好，AUC高达0.812，敏感度、特异度均超过83%，且与病原学鉴别结果呈高度一致。PCT、CRP等常规指标虽对细菌感染有一定评估作用，但敏感度、特异度欠佳，检测结果不稳定。病原学细菌检测可作为“金标准”，然而，检测周期较长，可能致病情延误。nCD64指数则不仅检测方便，稳定性好，而且能够较快获得检测结果，总体应用价值较高。

综上所述，外周血nCD64指数对SLE患者并发细菌感染与疾病活动期存在鉴别价值。但本研究也有局限性，如本次纳入的样本来源比较单一，样本量较少，未来还需要扩大样本来源，进行进一步研究。