生化免疫分析仪检测溶血指数的临床应用

史云峰 杜卉莲 盘锦辽油宝石花医院 （辽宁 盘锦 124010）

内容提要： 目的：观察并分析日立全自动生化分析仪HITACHI 7600-110以及贝克曼DXI800免疫功能仪器临床检测溶血指数的实际效果。方法：纳入2019年5月～2020年8月本院门诊及住院部送检标本2824例，检测溶血指数以及有关的其他检验项目。选用日立全自动生化分析仪HITACHI 7600-110以及贝克曼DXI800免疫功能仪器，将超过15的溶血指数分为六大统计组，检测并统计每组溶血标本的分布情况及构成比例、累计比例。结果：本研究纳入的2824例溶血标本，经检测，溶血指数高于15的共计149例，溶血率为5.28%。其中，溶血指数在15～100的低溶血指标累计比达到87.92%。根据本研究选用的日立全自动生化分析仪HITACHI 7600-110以及贝克曼DXI800免疫功能仪器使用说明书中提供的溶血指数干扰阈值界定，溶血指数处于51～100的溶血标本具体值为19例，占据溶血构成占比的12.75%。结论：在溶血指数检测时应用生化免疫分析仪，检测结果准确性较高。

溶血指数是指在一定条件下，能够使血液中红细胞完全溶解的最低浓度。例如甘草皂苷的溶血指数为1:4000；薯蓣皂苷的溶血指数为1:40万[1]。通常情况下，有效运用溶血指数，能够粗略测算出皂苷的含量，并完成中草药的皂苷定性检查。在血液检测中，如果受检者的溶血指数检测结果提示阳性，则表明受检者的血液可能存在溶血状态，由于红细胞溶解率较高，故容易诱发溶血性贫血[2]。患有该类疾病的患者，其巩膜和皮肤会呈现出明显的发黄现象，并伴有发热、全身浮肿等症状。在正常状态下，每个人的溶血指数都会出现轻微的变化，与患者当前的生活习惯（包含饮食、作息等）相关，但浮动上下区间都处于合理、可控的范围内。如果溶血指数出现较大的波动，则说明患者身体存在较为严重的异常情况，必须前往医院进行治疗[3]。根据临床实验室误差统计，最小40%，最大可达70%的检测误差产生于分析前，溶血指数的不确定，对检验结果造成的干扰往往最大。面对此种情况，医疗设备厂商基于溶血指数的自动量化检测，生产出了客观、灵敏度高、耗时短、易于标准化检测的生化分析仪及免疫功能检测仪，核心要素为自动化溶血指数检测方法以及检验项目的干扰阈值设定[4]。本研究围绕生化免疫分析仪检测溶血指数的临床应用效果而展开，现梳理有关结果，报道如下。

1.资料与方法

1.1 一般资料

纳入2019年5月～2020年8月本院门诊及住院部送检标本2824例，按照医学实验室操作规程，检测溶血指数以及有关的其他检验项目。

1.2 方法

选用日立全自动生化分析仪HITACHI 7600-110，参数设置及具体操作如下：①分析方式：多样品、多项目可同时处理；处理能力800测试/h（不含ISE测定，ISE单元处理能力为300样品/h）；若采用比色法进行分析时，最大测试量可达到3200/h；②通道数：同时分析86项目；③样品量：2～35μL/测试，上下可调整范围0.1μL；④试剂量：终反应体积150～380μL/测试；每种测试体积范围20～270μL，可调整空间为1μL；⑤样品架：5个（包含标准样品被、微量样品被、原始采血管），可同时容纳300个样品；⑥反应时间：3/4/5/10/15/22min任选；⑦反应温度（37.0±0.1）˚C；⑧测试波长：340～800nm，共计12种，可选择单波长、双波长、多波长测定；⑨数据处理：基于统计学计算、统计图、精度统计计算，可处理10000个样本的数据，并监视反应过程，生成曲线；⑩模块组合方式：非平行，两模块不同；⑪离子选择电极速度：最大900测试/h；⑫双试剂下的同步分析项目：最大62项；⑬试剂位置：D模块双试剂16位，P模块双试剂43位；ISE3项；⑭试剂量范围：20～270μL，上下课增减范围1μL；⑮进样方式及样品数量：后轨道式（同时300样品，5样品/架）；⑯样品量范围：2～35μL（0.1μL步进），最小2μL/测试；⑰试剂冷藏：4～12˚C；⑱离子选择电极（ISE）：K、Na、CL三项[5]。

免疫仪器为贝克曼DXI800，具有操作简单、检测速度快，灵敏性、特异性、准确性、稳定性均较高，检测速度可达400T/hr，是较为先进的全自动微粒子化学发光免疫分析系统。

基于上述仪器特点，完成溶血指数测定参数设定；负压静脉血液采集系统可采用非可替4mL惰性分离胶血清管。

1.3 溶血指数结果报告生成方式

将溶血指数通过检验信息系统导出。如果出现高于溶血指数干扰阈值的检验项目，检测人员需要在结果显示栏添加异常标识。

1.4 统计学分析

本研究的检测数据（包含送检标本综述、溶血指数异常的标本数、溶血标本的构成比例等），借助全自动生化免疫分析仪自带的数据信息处理功能即可完成。

2.结果

本研究纳入的2824例溶血标本，经检测，溶血指数高于15的共计149例，溶血率为5.28%。其中，溶血指数在15～100的低溶血指标累计比达到87.92%。根据本研究选用的日立全自动生化分析仪HITACHI 7600-110以及贝克曼DXI800免疫功能仪器使用说明书中提供的溶血指数干扰阈值界定，溶血指数处于25～50的标本数为34例，构成比为22.82%；51～100的溶血标本具体值为19例，占据溶血构成占比的12.75%，见表1。

表1.溶血指数超过15的149例溶血标本具体指数分布情况

3.讨论

生化免疫分析是一种“合称”，分为“生化分析”和“免疫分析”两部分[6]。其中，生化分析是指通过多种生物化学反应，测定受检者体内的酶类、糖类、脂类、蛋白、非蛋白氮类、无机元素类、肝功能等指标，是医院常规检测必不可少的项目。此种检测方式在我国已经发展了数十年，主要通过检测患者某一项或某几项生物指标，与相关标准进行比对，判断患者是否患有特定的疾病。比如通过乙肝五项检测，根据每一项抗体、抗原的检测值，与感染乙肝病毒或曾经感染乙肝病毒的标准进行比对，有助于确诊患者病情。时至今日，受发展时间较长的影响，我国生化诊断试剂市场的发展较为成熟，试剂品种相对齐全，测量技术的完善程度较高，测量结果的准确性可得到保障。免疫分析是指利用待测物质与其对应物质之间的“专一特异性反应”，成功建立的一种具备“高选择性”的诊断方法。此种方法主要围绕抗原抗体之间进行免疫反应，完成对样本的检测。具体而言，检测期间需要使用多种载体，完成对反应信号的增幅，从而达到增强检测灵敏度的目的。目前，可用于进行标记的物质包含同位素、多种酶、化学发光物质。基于此，具体的免疫分析方式可分为放射免疫分析、酶联免疫分析、化学发光免疫分析、电化学发光免疫分析等多种方式。此种检测方式主要针对受检者体内的小分子蛋白、激素、脂肪酸、药物等物质进行检验，可有效检测出包含传染性疾病、内分泌疾病、肿瘤疾病在内的多种疾病。除此之外，在孕前检查、血型抗原等检测中也较为常见。相较于常规的生化分析检验方式，生化免疫分析更加侧重于对感染性疾病进行检测[7]。

分析本次溶血标本可以得知女性标本溶血率明显高于男性，主要是因为女性静脉较细，更加脆弱，血液流量较少，血流速度与男性相比较慢。在反复穿刺的情况下所产生的痛感会增加患者心理负担，从而增加穿刺难度，而这也增加了女性采血过程中溶血现象的发生。同时老年人和幼儿在进行抽血的时候也容易出现溶血，因为老年人血管较为脆弱，幼儿恐惧感较高都成为了溶血率偏高的原因。使用目测法可以在一定程度上对标本中存在的一些不合格现象进行筛查，但并不够精准。目测法会受到干扰，且存在不确定性，溶血后产生游离血红蛋白超出0.3g/L后才能被目测，会导致严重误差。为了避免个体差异和主观漏断，减少轻度溶血标本的漏判，接受生化免疫分析有着非常重要的作用。虽然轻度溶血标本不会对大部分生化免疫项目检测产生影响，但是还存在一定的影响，特别是针对一些对溶血较为敏感的乳酸脱氢酶、血钾等。使用生化免疫分析仪可以最大程度上减少人为干预，其检测数据更为客观、准确。所以在日常工作中借助生化免疫分析仪能够提升检验报告准确性，客观评估溶血干扰程度，将溶血指数检测结果包含在报告中，对检验报告进行审核，定期分析和回顾能够使分析结果更加规范化，减少误差带来临床风险。

在过去，临床生化免疫分析最常见、应用范围最广的方法为酶联免疫检测法。此种检测方式的原理为：选择各种酶作为标记物，用于对某一种抗原或抗体的检测。由于检测试剂成本较低，故可进行大规模检验。但此种检测方式的灵敏度相对较低，故在未来会被逐渐淘汰。相较于酶联免疫检测法，化学发光检测法的灵敏度更高、特异性更强、重现性更好，故在一、二线城市的三甲医院、很多专科医院中，一些高端的化学发光检测系统已经逐渐取代酶联免疫，成为临床最主要的免疫诊断方法。除了上述优势外，化学发光免疫检测过程可进行半定量和定量分析，检测耗时短、准确率极高[8]。

目前，医院使用的生化免疫检测设备一般为全自动生化免疫系统检测仪（如本研究开展期间，使用的日立全自动生化分析仪HITACHI 7600-110），该设备是一类具备极强灵活性、选择性、先进性的生化分析仪。在检测及相关操作方面，全自动生化免疫分析仪的应用优势在于：①操作难度低；②清洗时间少；③只需少量时间即可完成样本的更换；④几乎没有其他较为繁琐的检测手续；⑤为了增加测定精度，可将测定方式选择为“双波长”形式；⑥针对一些疑难指标进行检测时，可通过使用双试剂的方式，实现试剂选择性的增加，并改善测定方法；⑦基于此类设备的检测过程能够屏蔽绝大多数内源性和外源性干扰，有利于长时间保管试剂，大幅度提升使用期限。

本研究共纳入2824例溶血样本，借助日立全自动生化分析仪HITACHI 7600-110以及贝克曼DXI800免疫功能仪器进行对溶血指标的生化分析及免疫检测，替代了传统的目测识别溶血及人工录入相关信息的检测方式；基于干扰阈值的设定，检验全过程抗干扰能力较强，结果的可靠性极高，极大地提升了检测全过程的安全性以及结果报告的准确性，有效避免了人工作业模式引发的误读及遗漏。

针对2824例溶血样本的检测，溶血指标超过15的标本共计149例，溶血率为5.28%。该结果与国外某实验室的检测结果（10.42%）相比，差异较大[9]。研究组成员对本研究结果与其他两项研究的操作过程、结果生成等环节进行全面对比后认为，造成差异的原因为：本研究纳入的2824例溶血标本均来自于本院门诊及住院部，其他研究人员开展研究时，纳入的溶血标本总例数近5000，对比之下，标本纳入数量差异较大[10]；此外，由于其他研究人员选用的设备为全自动生化免疫分析仪，能够针对溶血标本进行自动一体化检测，而本研究选用的设备为日立全自动生化分析仪HITACHI 7600-110以及贝克曼DXI800免疫功能仪器，导致检测过程需分成两步走，故结果出现近3个百分点的差异，处于可接受范围内[11]。

综合而言，联合使用生化分析仪及免疫功能检测仪测量溶血指数，围绕溶血程度分别进行生化分析及免疫检测，并将相关信息发布于检测报告单中，能够大大地提升临床医生对标本信息的掌控水平，有效降低了误诊的发生率。