单体三倍体太平洋牡蛎苗种培育技术要点

胡金庆，任艳萍，林广明

(1.蓬莱区长岛自然资源局，山东 烟台265800；2.蓬莱区长岛海洋经济促进中心，山东 烟台265800)

单体三倍体牡蛎是指单个独立游离、无固着基的三倍体牡蛎，通过将牡蛎三倍体与单体两种特点相结合，使其既有三倍体牡蛎的高度不育性、生长快、品质好、全年糖原含量较高，一年四季鲜美肥满，繁殖季节死亡率低的优势，又具单体牡蛎个体独立、便于挑拣、外壳规整的特点，以适应市场需求。而常规二倍体牡蛎在繁殖季节因为产卵、排精的消耗，软体消瘦明显，品质大打折扣[1]。本文以我国常见的经济牡蛎品种太平洋牡蛎(Crassostreagigas)为例，通过利用四倍体雄贝与二倍体雌贝杂交生产出三倍体牡蛎，现将单体三倍体牡蛎的苗种培育技术总结如下。

1 亲贝培育

1.1 亲贝暂养配套硬件设施

牡蛎人工育苗的亲贝暂养池、产卵池、幼体孵化池、苗种培育池、单细胞藻类培养池以及与之相配套的供水、 供电、供气、供热等设施。

1.2 亲贝选择

二倍体牡蛎亲贝应符合 GB/T 20552《太平洋牡蛎》和SC/T 2026《太平洋牡蛎 亲贝》的规定[2-3]，健康的2龄贝，壳高>8 cm,体重>40 g为宜。四倍体牡蛎的外部形态、感官要求、规格等与二倍体亲贝相仿。亲贝暂养水体中的密度，二倍体牡蛎80～120个/m3；四倍体牡蛎60～80个/m3.室内经升温促熟培养60 d。

1.3 亲贝培育条件

水质符合GB 11607《渔业水质标准》和NY5052《无公害食品 海水养殖用水水质》的规定[4-5]。可以自然水温培育直至亲贝性腺成熟。北方生产多以升温促熟，可提前至少1个多月出池。亲贝每天升温0.5～1.0 ℃, 期间恒温1～2次，每次3～4 d，水温逐渐提升到22～23 ℃恒温待产。盐度25‰～32‰，光照强度500～1 000 lx，单位水体培育密度：二倍体牡蛎80～100个/m3，四倍体牡蛎60～80个/m3。

1.4 日常管理

1.4.1 投饵 饵料以硅藻、扁藻、金藻等新鲜单胞藻为主，代用饵料多用藻粉、酵母粉、淀粉等。单胞藻饵料浓度为 20×104～30×104cell/mL(以硅藻为例)，6～8次/d；代用饵料用量为 2～5 mg/L。观察水色透明度和亲贝排便情况调整饵料量。

1.4.2 换水 培育前中期换水早晚各一次，每次换水量50%～100%，培育后期临近采卵前减少换水量，每次换50%。临近获卵时换水水流轻缓，避免刺激亲贝导致流产。

1.4.3 倒池 培育前中期2～3 d倒池一次，培育后期临近采卵前不倒池。

1.4.4 吸污 培育后期临近采卵前每天吸污一次。

1.4.5 升温 每天升温1 ℃以内，直到22～23 ℃恒温待产。

1.4.6 充气 前中期中量充气，后期临近采卵前为减少对亲贝的刺激，可微量充气。

1.4.7 性腺检查 计算有效积温，并观察性腺发育。性腺发育充分的亲贝内脏团饱满，生殖腺覆盖全部消化腺，占软体部中央横截面60%以上。将成熟的二倍体亲贝洗刷干净后，剖去右壳，露出软体部。用牙签蘸取少量生殖细胞，涂于载玻片的水滴中，在显微镜下鉴别雌雄，呈颗粒状散开的为卵子，呈烟雾状散开的为精子。解剖镜检观察卵子离散程度好，精子活泼,可准备采卵。雄雌比例10∶1，壳高平均为10～12 cm。

1.4.8 药物使用 药物使用应符合NY 5072《无公害食品 水产品中有毒有害物质限量》和NY 5071《无公害食品 渔用药物使用准则》的规定[6-7]。

2 人工催产与受精卵的孵化

2.1 工具

工具包括牡蛎开壳器、解剖刀、手术剪、牙签、载玻片、显微镜、筛绢网、水盆类塑料容器、海水洗瓶等，并用浓度为10 mg/L的高锰酸钾溶液浸泡10 min，用砂滤海水冲洗干净。

2.2 采卵与授精

通常自然排放法、人工刺激法(阴干、流水、升温刺激)、性腺解剖法综合使用。发现性腺发育充分的亲贝有少量自然排放，即用阴干、流水、升温法刺激亲贝排放。性腺解剖法常用于人工授精时亲贝性腺成熟度不同步时采用，三倍体培育中也多用此法。挑出发育好的亲贝，雌雄严格分开放置，避免精子污染。二倍体牡蛎选取雌贝，四倍体牡蛎选取雄贝，雄雌比例10∶1。用解剖刀刮取卵巢盛放于容器中，将成熟的卵巢逐个剥离并搅碎，先后用80目、200目的筛绢依次过滤，去除杂质和大的组织碎片，然后用500目筛绢滤洗，去除组织液等，清洗干净的卵子加入过滤海水，卵子的密度4×107～8×107粒/L，在23 ℃下静置30～60 min备用。四倍体雄贝性腺也剥离并搅碎，并用300目筛绢过滤杂质和组织碎块，制成精液备用。分批将精液加入有卵子的海水中，镜检每个卵子周围有4～5个精子即可，搅拌5～10 min。

2.3 孵化

2.3.1 孵化设施与条件 将受精卵移入孵化池中孵化。孵化池体积 20 m3，水深 1～1.5 m。水温控制在 22～26 ℃，盐度为 25‰～32‰，光照强度500～1 000 lx。

2.3.2 孵化管理 受精卵的密度控制在30～50个/mL。受精卵入池后，停止充气1～2 h，通过筛绢网箱过滤，用虹吸法吸去上层含有大量精子的海水，再添加过滤后的海水，洗卵1～2次。幼体破膜之前每小时搅池一次，捞取水面精沫，定时镜检胚胎发育情况。

3 浮游幼虫培育

3.1 选幼

水温21～23 ℃，受精卵孵化22～24 h后发育至D形幼虫，用显微镜观察D形幼虫比例达到70%～80%时，先停气20 min，然后用300目筛绢将D形幼虫移入培育池中。

3.2 幼虫培育设施与条件

培育池水温、水质与孵化池近同。 水温22～25 ℃为宜。

3.3 培育密度

壳高≤150 μm，幼虫密度10～20个/mL；壳高>150 μm，幼虫密度5～10个/mL。

3.4 日常管理

3.4.1 投饵 D形幼虫形成6 h后即可投喂金藻，幼虫壳高120 μm后逐渐增加硅藻、角毛藻、扁藻等微藻的比例。前期保持水体单胞藻饵料密度5×103～1×104cell/mL(以金藻为例)；后期随着投喂量逐渐增加，单胞藻数量可达3×104～5×104cell/mL。 投喂量通过镜检胃含物多少做调整。投喂次数从4次/d逐渐增加到8次/d。

3.4.2 换水 每天早、晚换水各1次，初期每次换水20%～30%，后期逐渐增加到每次50%以上。

3.4.3 倒池 每隔5～7 d倒池一次。

3.4.4 充气 连续充气，保持溶解氧(DO)≥5 mg/L。

3.5 采苗

3.5.1 采苗器制作和投放 第一种附着基材料是塑料薄膜、废旧洗净的筛绢网。第二种附着基材料是贝壳，生产中应用较多。牡蛎壳高8 cm以上，扇贝壳高6 cm以上。在贝壳中间钻小孔，用聚乙烯绳穿串连结，80～100片/串，全长90～100 cm，投放水体密度5 000～8 000片/m2。采用80目筛绢拖网法或者虹吸法将眼点幼虫移出放入它池，投放附着基进行附着。聚乙烯波纹板固着功能相仿。

3.5.2 采苗器消毒 采苗器冲刷干净后，先用0.5‰～1‰的NaOH溶液或2‰的漂白粉(含氯量35%)溶液浸泡24 h，再用砂滤海水冲洗2～3遍，去除残氯。

3.5.3 投放密度 每立方水体投放50～80串扇贝壳。

3.5.4 采苗时间 幼虫壳高达到300～350 μm，出现眼点幼虫比例达40%以上时，对眼点幼虫进行筛选，并移入已投放采苗器的水池中，密度控制在2～3个/mL即可。

4 稚贝培育

4.1 稚贝管理

幼虫附着4 d左右，鳃和次生壳逐渐形成，足、眼点、面盘等器官逐渐消失，长成稚贝。按照每天降温1 ℃的速度降温至自然海水水温后出库。水位浸末采苗器最上端。固着后24 h，可加大换水量及充气量；日投喂饵料密度为10×104～20×104个/mL(以硅藻为例)，分8～12次投喂。

4.2 单体牡蛎脱固着基处理

4.2.1 培育单体牡蛎最常用的是先固着后脱基法 对于筛绢、塑料薄膜，从幼虫附苗后10 d至壳高1.0～1.5 mm,通过抖动、冲刷塑料薄膜、筛绢，可将小稚贝脱离固着基;对于附在贝壳、聚乙烯波纹板上的蛎苗，需至壳高1.5～2.0 cm脱基，也可根据贝壳、聚乙烯波纹板上固着稚贝密度的大小适当调整脱基时间，从而降低牡蛎壳破损率，提高成活率。使幼虫先固着后脱离固着基，成为单体牡蛎，从而实现了单体三倍体牡蛎的培育。

4.2.2 苗种质量与计数 符合SC/T 2027《太平洋牡蛎 苗种》的规定[8]。

4.2.3 苗种出池运输 采用干运法。气温在25 ℃以下，运输时间控制在8 h以内。