HPLC法检测猴耳环提取物及猴耳环牙膏中没食子酸含量

夏美莲 徐媛婷

(江西诚志日化有限公司，江西 南昌 330013)

引言

没食子酸(Gallic acid，GA)又称五倍子酸或棓酸，是一种有机酸，可见于五倍子、漆树、茶等植物中。化学式C6H2(OH)3COOH。没食子酸易溶于水、醇和醚，具有酚(易被氧化和三氯化铁水溶液生成蓝黑色沉淀)及羧酸(加热时失去二氧化碳成焦性没食子酸)的性质。以没食子酸为原料可以合成没食子酸酯类化合物，没食子酸的烷基酯根据烷基碳原子个数可分为低级酯(如甲酯、乙酯、丙酯等)和高级酯(如辛酯、月桂酯、十八碳醇酯等)，这些酯类化合物都是性能优良的食品抗氧化剂。根据李肖玲的报道，没食子酸还有抗炎、抗突变、抗氧化、抗自由基等多种生物学活性[1]。郑雪花等[2]认为没食子酸对食源性致病菌(沙门菌、志贺邻单胞菌)，金黄色葡萄球菌，大肠杆菌，枯草芽孢杆菌及变形链球菌均具有抑菌作用，且对革兰阴性菌的抗菌作用高于革兰阳性菌。

随着牙膏工业的不断发展，功效型牙膏越来越受到消费者的喜爱，各大企业也逐渐将中草药活性成分加入到牙膏中作为其功效成分。功效型牙膏根据《功效性牙膏(QB/T 2966-2014)》的规定对其功效成分进行定性或定量测定。而没食子酸作为猴耳环有机酸的主要功效成分，也是质量控制的主要成分。本研究摸索采用高效液相色谱法建立猴耳环牙膏中没食子酸含量测定方法。

1 实验部分

1.1 实验仪器

Agilengt 1200高效液相色谱仪；

Sartorius BT125D分析天平；

AP-01真空泵；

SC-04低速离心机；

KQ-300DE型数控超声波清洗器。

1.2 试剂和材料

没食子酸对照品(91.5%，批号：110831-201906，中国食品药品检定研究院)；

猴耳环提取物；

猴耳环牙膏(实验室自制，批号:E20220715185)；

甲醇(西陇科学，色谱纯)；

磷酸(麦克林，分析纯)；

蒸馏水。

1.3 实验方法

1.3.1 色谱条件

色谱柱：XDB C18柱(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：甲醇∶蒸馏水∶磷酸=20∶80∶0.2；检测波长：270nm；流速：1ml/min；柱温：30℃；进样量：10ul。

1.3.2 方法与结果

1.3.2.1 没食子酸标准溶液的制备

准确称取10.73mg没食子酸对照品置于50ml容量瓶中，加入流动相溶解并定容至刻度，此溶液浓度为214.6ug/ml。

1.3.2.2 样品溶液的制备

①称取猴耳环提取物0.1g于50ml容量瓶中，加入流动相溶解并定容至刻度，摇匀后经0.45μm微孔滤膜过滤，滤液作为试样溶液上机待测。

②称取猴耳环牙膏样1.25g于50ml容量瓶中，加入流动相溶解并定容至刻度摇匀，超声溶解后离心，经0.45μm微孔滤膜过滤，滤液作为试样溶液上机待测。

1.4 线性关系考察

将没食子酸标准溶液配制系列浓度为0.8383ug/ml、3.3531ug/ml、13.4125ug/ml、53.65ug/ml、214.6ug/ml，按照1.3.1的色谱条件进样分析。以没食子酸浓度为X轴，其对应的峰面积为Y轴，绘制标准曲线。曲线方程为：

Y=53.66x-48.654，R2=0.9992

在浓度为0.8383ug/ml～214.6ug/ml范围内线性良好。

图1 没食子酸线性方程

1.5 样品中没食子酸含量测定

1.5.1 按照1.3.2.2样品溶液的制备配制，根据测定的峰面积，代入上述直线回归方程，求得没食子酸含量。图谱见图2、图3，结果见表1。

图2 猴耳环提取物中没食子酸图谱

图3 猴耳环牙膏中没食子酸图谱

表1 样品中没食子酸含量

2 结果与分析

2.1 精密度实验

按照1.3.1的色谱条件，取对照品溶液(53.65ug/ml)连续进样6次，测定没食子酸峰面积，并计算其RSD值，实验表明仪器的精密度良好。结果见表2。

表2 精密度实验

2.2 稳定性实验

按照1.3.2.2样品溶液的制备，分别将猴耳环提取物和猴耳环牙膏样品处理好，在室温下分别在0,2,6,24h进样，记录其峰面积，并计算RSD值。结果表明猴耳环提取物及猴耳环牙膏中没食子酸在24h内稳定。结果见表3。

表3 稳定性实验

2.3 回收率实验

2.3.1 称取猴耳环提取物已知没食子酸含量(30.27mg/g)供试品总计6份，每份约0.1g，精密称定，分别加入一定量的没食子酸对照品溶液(214.6ug/ml)，按照1.3.2.2样品溶液配制后进样分析，计算回收率。结果表明猴耳环提取物中没食子酸的加样回收率良好。结果见表4。

表4 猴耳环提取物加标回收率

2.3.2 称取空白牙膏(不含猴耳环提取物)供试品总计6份，每份约1.25g，精密称定，分别加入一定量的没食子酸对照品溶液(107.3ug/ml)，按照1.3.2.2样品溶液配制后进样分析，计算回收率。结果表明空白牙膏中没食子酸的加样回收率良好。结果见表5。

表5 空白牙膏加标回收率

2.3.3 称取猴耳环牙膏已知没食子酸含量(0.09mg/g)供试品6份，每份约1.25g，精密称定，分别加入一定量的没食子酸对照品溶液(107.3ug/ml)，按照1.3.2.2样品溶液配制后进样分析，计算回收率。结果表明猴耳环牙膏中没食子酸的加样回收率良好。结果见表6。

表6 猴耳环牙膏加标回收率

3 总结

对于猴耳环中没食子酸含量测定，已经有挺多方法检测，大多数是通过高效液相法测得，但是对于猴耳环牙膏中没食子酸的研究，却鲜有报导，本次实验建立了HPLC检测猴耳环提取物及猴耳环牙膏中没食子酸含量的检测方法。此法具有简便、快速、灵敏度高、精密度好、准确性高等优势。至今在国家标准及行业标准中并没有制定牙膏中没食子酸的检验标准。通过本次研究,为相关标准的制定提供了理论和数据基础。希望之后为服务地方经济,为行政执法提供科学依据，并对提高猴耳环牙膏相关产品检测能力做出重要贡献。