血清脂肪酸合酶、上皮钙黏素、再生蛋白4水平在早期胃癌中的诊断价值及与淋巴结转移的关系

陈艳红，谢云霞，刘涛

调查显示，中国胃癌发病率居恶性肿瘤前4位[1]，因早期症状具有隐匿性，导致多数病人确诊时已处于中晚期，且80.0%病人存在局部淋巴结转移现象，5年生存率仅30%～40%[2]。胃镜检查在早期胃癌（early gastric cancer，EGC）诊断中具有一定价值，但其属侵入性操作，大部分人对此检查有恐惧心理。近年来，随分子生物学及检测技术进步，血清肿瘤标志物检测因操作简单、费用便宜等优势被逐渐应用于临床实际。脂肪酸合酶（Fatty acid synthase，FAS）作为一种代谢性致癌基因，其表达与肿瘤细胞的分化程度、侵袭及转移等均密切相关[3]。上皮钙黏素（E-cadherin）作为介导细胞-细胞间黏附的钙依赖性跨膜蛋白，黏附减弱是导致肿瘤发生、进展的关键因素之一[4]。再生蛋白4（regenerating islet-derived 4，REG4）在结直肠腺癌、腺瘤中表达显著上升，并与结肠癌的分化程度、分期及淋巴结转移相关[5]，但其在胃癌中鲜有报道。鉴于此，本研究以血清FAS、E-cadherin、REG4水平为观察指标，探讨其在胃癌病人中的诊断价值及与淋巴结转移的关系。具体分析如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料选取郑州大学第一附属医院2014年1月至2016年8月收治的早期胃癌病人88例作为观察组，其中男52例，女36例；年龄（55.74±5.18）岁，范围为32～69岁；采用免疫组化法分析淋巴转移情况：淋巴结转移病人35例，无淋巴结转移病人53例；另选取同期胃良性疾病病人80例作为对照组，其中男47例，女33例；年龄（56.15±4.79）岁，年龄范围为34～67岁。两组基本资料（年龄、性别）比较差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。本研究符合《世界医学协会赫尔辛基宣言》相关要求。

1.2 选取标准

1.2.1 纳入标准 （1）观察组均符合以下标准：均经病理诊断、胃镜检查确诊为胃癌；术前临床分期为I a～I b期；均接受手术治疗；Karnofsky（KPS）评分≥70分；（2）两组临床资料均完整，且病人及近亲属同意与签署承诺书。

1.2.2 排除标准 （1）观察组预计生存时间<12个月者；（2）肝肾等重要脏器器质性病变者；（3）妊娠期或哺乳期女性；（4）非原发性胃癌者；（5）凝血机制紊乱或活动性出血者；（6）术前接受放疗、化疗或手术治疗者；（7）认知功能障碍或精神行为异常者。

1.3 观察指标（1）均于病理确诊前后1周内采集各病人的血清样本并进行检测，分析对比两组血清FAS、E-cadherin、REG4水平。其中血清检测方法为：空腹取3 mL静脉血，离心12 min，3 000 r/min，分离取血清，采用酶联免疫吸附试验检测血清E-cadherin、REG4、FAS水平，试剂盒购自上海臻科生物科技有限公司，严格按照试剂盒说明书操作。

（2）术后随访36个月，方式包括来院复查，电话微信随访及重点病人定期上门随访，获取其疾病情况及生存资料。

1.4 统计学方法采用SPSS 22.0软件分析处理数据。计量资料采用±s表示，组间比较采用成组t检验。计数资料用例（%）表示，组间比较采用χ2检验。此外，通过logistic多因素回归进行影响因素分析。采用ROC曲线进行诊断价值分析。采用Kaplan-Meier生存曲线+log-rank检验进行生存资料分析。P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组血清FAS、E-cadherin、REG4水平比较观察组血清FAS、REG4水平高于对照组，E-cadherin水平低于对照组（P<0.001），见表1。

表1 两组脂肪酸合酶（FAS）、上皮钙黏素（E-cadherin）、再生蛋白4（REG4）水平比较/±s

表1 两组脂肪酸合酶（FAS）、上皮钙黏素（E-cadherin）、再生蛋白4（REG4）水平比较/±s

组别对照组观察组t值P值例数80 88 FAS/（ng/mL）41.90±13.92 62.38±20.79 7.56<0.001 E-cadherin/（μg/mL）8.36±2.78 3.57±1.01 14.56<0.001 REG4/（ng/mL）3.06±1.00 5.93±1.97 12.06<0.001

2.2 血清FAS、E-cadherin、REG4对早期胃癌的诊断价值

2.2.1 血清FAS、E-cadherin、REG4指标的单独应用 血清FAS、E-cadherin、REG4三指标对早期胃癌有较高诊断价值，ROC-AUC分别为0.735、0.793、0.747。其中，E-cadherin的灵敏度较高，FAS和REG4的特异度较高。见表2。

表2 血清脂肪酸合酶（FAS）、上皮钙黏素（E-cadherin）、再生蛋白4（REG4）对早期胃癌诊断价值的ROC分析结果

2.2.2 血清FAS、E-cadherin、REG4指标的联合应用 采用临床实用的综合联合诊断模式：仍使用三指标各自的诊断截断值，三个指标同为阳性或阴性时做阳或阴性诊断，否则进行复测。若复测结果不变，则结合专业实践及医师观点进行诊断并侧重考虑：阳性诊断参考E-cadherin指标（其灵敏度较高），阴性诊断参考FAS和REG4指标（其特异度较高）。结果：以本研究样本实测计算得：三指标的联合应用对早期胃癌的诊断价值：灵敏度和特异度分别为93.18%（82/88）、93.75%（75/80）。显然该联合模式，其诊断效能均比单一指标均有明显提高。

2.3 有无淋巴结转移病人临床特征比较以观察组为分析样本。有淋巴结转移病人分化程度、肿瘤最大径、浸润深度与无淋巴结转移病人相比，差异有统计学意义（P<0.001）；两者年龄、性别、肿瘤部位、病理类型差异无统计学意义（P>0.05），见表3。

表3 早期胃癌88例有无淋巴结转移病人临床特征/例（%）

2.4 有无淋巴结转移病人血清FAS、E-cadherin、REG4水平以观察组为分析样本，有淋巴结转移病人血清FAS、REG4水平高于无淋巴结转移病人，E-cadherin水平低于无淋巴结转移病人（P<0.001），见表4。

表4 早期胃癌88例有无淋巴结转移病人血清脂肪酸合酶（FAS）、上皮钙黏素（E-cadherin）、再生蛋白4（REG4）水平比较/±s

表4 早期胃癌88例有无淋巴结转移病人血清脂肪酸合酶（FAS）、上皮钙黏素（E-cadherin）、再生蛋白4（REG4）水平比较/±s

组别有淋巴结转移者无淋巴结转移者t值P值例数35 53 FAS/（ng/mL）70.14±16.38 57.26±13.19 4.07 0.000 E-cadherin/（μg/mL）2.96±0.92 3.97±1.04 4.66 0.000 REG4/（ng/mL）6.83±1.15 5.34±1.01 6.41 0.000

2.5 早期胃癌淋巴结转移的影响因素仍以观察组为分析样本，以早期胃癌是否发生淋巴结转移作为因变量（1=发生淋巴结转移，0=否），将分化程度、肿瘤最大径、浸润深度、血清FAS、E-cadherin、REG4作为自变量，建立非条件Logistic回归模型。为提高统计效率并使回归结果清晰，将部分为连续数值的自变量，按观察组均值进行分段（分层），转化成两分类变量。各变量赋值参见表5。回归过程采用逐步后退法，以进行自变量的选择和剔除，设定α剔除=0.10，α入选=0.05。回归结果显示：分化程度（低分化）、肿瘤最大径（≥5 cm）、浸润深度（黏膜下癌）、血清FAS（升高）、E-cadherin（降低）、REG4（升高）均是早期胃癌淋巴结转移的危险影响因素（P<0.05，OR>1），见表5。

表5 早期胃癌淋巴结转移的影响因素

2.6 生存分析进一步探讨FAS、E-cadherin、REG4三指标对早期胃癌病人预后的关系，对本研究病人随访3年，获取其生存资料，并以观察组FAS、E-cadherin、REG4三指标的均值分别分为对应指标的高表达组和低表达组，建立Kaplan-Meier乘积生存模型，行两组生存率的logrank检验。分析显示：FAS、E-cadherin、REG4高表达组、低表达组的生存资料对比，均差异有统计学意义（χ21=5.27，P1=0.022；χ22=6.17，P2=0.013；χ23=10.92，P3=0.001）。

3 讨论

数据表明，我国每年死于胃癌人数约高达17万，而研究发现，早期胃癌病人术后生存率可由30.0%～40.0%提高至80.0%～90.0%[6]。血清生物学标志物是近年肿瘤诊断常用手段，具有敏感性高、操作便捷等优势，但癌胚抗原、多种糖类抗原等血清标志物仅能反映早期胃癌发病机制中某一方面，故探寻特异性、敏感性更高的早期胃癌血清标志物是当前亟需解决问题。

FAS主要产物为软脂酸，参与合成细胞膜所需的磷脂及肺泡表面活性物质、细胞内信号传导及蛋白质酰化[7]。国外相关报道指出，FAS表达在肿瘤发生早期阶段、癌前病变形成中发挥重要作用，且≥70.0%早期胃癌病人出现FAS过度表达现象[8]。本研究结果显示，血清FAS水平在早期胃癌病人中呈异常高表达状态，并是早期胃癌淋巴结转移的独立危险因素，与Allina等[9]研究相似。研究也认为，内源性脂肪酸是肿瘤细胞生长的能量、物质来源，而FAS作为脂肪酸合成步骤中的关键酶，能激活磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K/Akt激酶）信号通路-固醇调节原件结合蛋白（SREBPs）调控途径[10]，提高SREBP-1水平，进而刺激FAS表达增多，抑制早期胃癌肿瘤细胞凋亡，调控细胞周期，促进肿瘤细胞增殖、侵袭及迁移，形成恶性循环，充分说明FAS参与早期胃癌的发生、侵袭及转移。进一步对比不同血清FAS水平病人3年生存率可知，血清FAS高表达者3年总生存率明显低于低表达者，与税明才、熊标[11]观点相符，提示FAS有望成为评估早期胃癌生存率的重要血清生物标志物，为临床预后评估提供数据指导。

E-cadherin是上皮间质转化过程中的关键蛋白，其水平下调或缺失，可降低肿瘤细胞间紧密连接，诱导肿瘤细胞向周围组织浸润及远处转移[12-13]。谭生权等[14]通过酶联免疫吸附试验检测158例早期胃癌病人、158例体检健康者血清E-cadherin水平，结果显示，血清E-cadherin水平在早期胃癌病人中表达下调，支持本研究观点。E-cadherin缺失可启动胰岛素样生长因子1（IGF1）信号通路，激活βcatenin，提高癌基因IFITM表达，同时其还能诱导STAT3磷酸化，调控胃癌细胞增殖、凋亡及分化等多个生物过程[15]，有力佐证了血清E-cadherin在胃癌发生、发展中具有一定促进作用。ROC曲线进一步证明，E-cadherin以7.51 μg/mL为最佳截断值，诊断早期胃癌的AUC最大（0.793）、灵敏度最高（92.05%），提示E-cadherin可作为诊断早期胃癌的敏感性肿瘤标志物，为临床及早检出早期胃癌高危人群提供科学依据。进一步经ROC曲线证明，采用临床常用三指标综合联合应用模式，对早期胃癌诊断效能均较单一指标有明显提高，且灵敏度和特异度分别可达93.18%（82/88）、93.75%（75/80），提示联合检测血清FAS、E-cadherin、REG4水平有助于提高早期胃癌的诊断灵敏度及特异度，为临床鉴别提供重要依据。

此外，经K-M曲线分析得出，血清E-cadherin表达下调可增加死亡风险，影响胃癌病人总生存率，说明血清E-cadherin在预测胃癌病人预后方面具有一定价值，建议临床监测血清E-cadherin水平，有助于延长病人生存时间。

经体外实验发现，肿瘤细胞可通过自分泌或旁分泌将REG4转移至胞外，抑制细胞凋亡，推测REG4通过抗凋亡机制，发挥促进肿瘤细胞生长、增殖作用[16]。朱燕、黄淑玲[17]研究指出，REG4在早期胃癌病人中出现水平上调趋势，并经ROC曲线进一步分析发现，REG4对早期胃癌的诊断特异性高达92.75%，表明REG4参与早期胃癌的发生、发展，有望成为诊断早期胃癌特异性血清标志物。REG4表达水平升高，可增强蛋白-1（AP-1）转录因子活性，激活下游靶基因表达，活化EGFR/AKT/AP-1信号传导通路，促进Bcl-2、Bcl-XL等活性及表达明显增加，有助于加快胃癌病人肿瘤细胞有丝分裂及增殖速度，强化肿瘤侵袭力及抗凋亡能力，进而参与细胞基质降解、异常黏附、肿瘤新生血管形成等多个环节[18]。通过Logistic多因素回归分析显示，血清REG4表达上调是早期胃癌淋巴结转移的独立危险因素，与杜琳等[19-20]研究相似，充分证实血清REG4异常高表达可促进早期胃癌病人临床病理特征进展，可作为淋巴结转移胃癌病人不良预后的预测因子。

综上可知，血清FAS、E-cadherin、REG4水平可考虑作为诊断早期胃癌的潜在有效肿瘤标志物，其水平异常表达是早期胃癌淋巴结转移的独立危险因素。