STAT2、CD24和CD44在卵巢癌组织中的表达及其与卵巢癌临床病理特征的关系

梁运霞，张玉文，秦珍珠，王丹，豆颖，邱晓娣

（商丘市第一人民医院病理科，商丘 476100）

卵巢癌是女性生殖系统常见恶性肿瘤之一，发病率位居妇科三大恶性肿瘤第二位，死亡率位居首位[1]。因卵巢位于盆腔深部，早期诊断困难，预后差，复发率达60%～70%[2]，5年生存率仅25%～30%[3]。卵巢癌病理类型较多，其中上皮性卵巢癌是最常见的病理类型，约占90%[4]，可进一步分为浆液性卵巢癌、粘液性卵巢癌、透明细胞癌和内膜样癌等[5]。卵巢癌早期筛查主要依靠妇科超声和血清肿瘤标志物CA125[6]，但卵巢肿瘤早期超声筛查难以发现，CA125虽然在卵巢癌患者具有特异性，但部分良性肿瘤和绝经后患者也可异常升高，并不能作为早期诊断、复发和转移的可靠指标[7]。因此，需要寻找新的肿瘤生物学标志物，做到早期诊断和早期治疗。本组研究选取卵巢癌患者信号转导及转录活化因子2（signal transducer and activator of transcription 2, STAT2）、肿瘤干细胞标记物CD24、CD44的表达水平与其临床病理特征相关性分析。

资料与方法

1 研究对象

选取2017年1月至2020年2月我院病理科确诊的卵巢癌患者69例，设为卵巢癌组。纳入标准：①为首次确诊；②病理诊断明确，参考中华医学会制定标准[11]；③本研究患者充分知情同意；④随访资料完整。排除标准：①术前有放化疗史；②合并其它恶性肿瘤。卵巢癌组患者年龄35～72岁，平均年龄（54.6±8.2）岁；按照国际妇产科学联盟（ International Federation of Gynecology and Obstetrics，FIGO）标准分期[12]：（Ⅰ+Ⅱ）期22例，（Ⅲ+Ⅳ）期47例；病理类型：浆液性癌53例，粘液性癌7例，内膜样癌5例，透明细胞癌4例；分化程度：高分化15例，中分化35例，低分化19例；淋巴结转移：有转移39例，无转移30例；腹水：有腹水41例，无腹水28例。并收集同期卵巢良性上皮组织肿瘤患者32例为良性对照组，年龄32～70岁，平均年龄（52.1±8.9）岁。两组患者平均年龄差别无显著性，具有可比性。本研究经医学伦理委员会批准（批号：2016-005）。

2 主要试剂

兔抗人STAT2单克隆抗体（Abcam，ab134192），小鼠抗人CD24单克隆抗体（Abcam，ab134234），小鼠抗人 CD44单克隆抗体（Abcam，ab134678），生物素化羊抗小鼠IgG二抗（北京佰瑞达生物科技，SA0103B），DAB显色剂（DAKO，K5007）。

3 免疫组织化学染色

应用链霉菌抗生素蛋白-过氧化物酶（SP）法免疫组织化学染色检测两组患者卵巢组织中STAT2、CD24和CD44表达。严格按照试剂盒说明书进行[13]，卵巢病变组织常规脱水、透明、石蜡包埋、切片（4μm厚），依次梯度降酒精水化、0.01mol/L磷酸盐缓冲液（PBS，pH7.4）漂洗、抗原热修复、PBS漂洗后入一抗（1:200）4 ℃孵育过夜，PBS漂洗后入二抗（1:1000）、DAB呈色、苏木精复染后，梯度酒精脱水、二甲苯透明、中性树胶封片。

4 判定标准

由两名有5年以上工作经验的病理科医师采用半定量法[14]进行评分，判定不一致时，取平均值。根据染色强度分为：0分，无染色；1分，淡黄色；2分，棕黄色；3分，褐色或深棕色。根据阳性细胞所占百分比进行评分：1分，阳性细胞百分比≤10%；2分，阳性细胞百分比在11%～50%；3分，阳性细胞百分比在51%～75%；4分，阳性细胞百分比在＞75%。染色强度评分与阳性细胞百分比评分相乘，＜3分为阴性，≥3分为阳性。

5 统计学分析方法

采用SPSS 23.0软件进行统计学分析，计量资料以均数±标准差表示，组间比较采用t检验；计数资料用百分比（%）表示，组间资料比较采用卡方检验（χ2）；以P＜0.05表示差异具有统计学意义。

结 果

1 卵巢癌中STAT2、 CD24和CD44表达率增高

免疫组织化学染色显示，卵巢癌组STAT2、CD24和CD44阳性表达率分别高于良性对照组（见表1）。卵巢癌组STAT2主要表达于细胞膜或细胞质，CD24蛋白主要表达于细胞膜边缘部位，CD44蛋白主要表达于细胞膜或细胞质，染色呈棕黄色或深棕色；良性对照组无染色或呈淡黄色（图1）。

图1 STAT2、 CD24和CD44在卵巢良、恶性肿瘤中表达的免疫组织化学检测。A，卵巢癌组STAT2；B，卵巢癌组CD24；C，卵巢癌组CD44；D，良性对照组STAT2；E，良性对照组CD24；F，良性对照组CD44；比例尺，10μmFig.1 Immunohistochemical examination of the expression of STAT2, CD24 and CD44 in benign and malignant tumors of ovarian. A, STAT2 in the ovarian cancer group; B, CD24 in the ovarian cancer group; C, CD44 in the ovarian cancer group; D, STAT2 in the benign control group; E, CD24 in the benign control group; F, CD44 in the benign control group; scale bar, 10μm

表1 两组患者STAT2、CD24和CD44蛋白阳性表达率Tab.1 Positive expression rate of STAT2, CD24 and CD44 protein in the two groups

2 STAT2、 CD24和CD44表达与卵巢癌病理分期、分化程度、淋巴结转移和腹水相关

卡方检验显示：STAT2、 CD24和CD44阳性率与卵巢癌患者年龄、病理类型无显著相关，但与病理分期、分化程度、淋巴结转移和腹水显著相关，即在（Ⅲ+Ⅳ）期阳性率高于（Ⅰ+Ⅱ）期，低分化阳性率依次高于中分化和高分化，伴有淋巴结转移阳性率高于未见淋巴结转移，有腹水患者阳性率高于无腹水患者（表2）。

表2 STAT2、 CD24和CD44与卵巢癌患者临床病理参数分析Tab.2 Analysis of STAT2, CD24 and CD44 expression and clinicopathological parameters of patients with ovarian cancer

临床病理参数 n STAT2(n=47) CD24(n=45) CD44(n=51)阳性率 χ2 P 阳性率 χ2 P 阳性率 χ2 P低分化 19 17(89.47) 17(89.47) 18(94.74)淋巴结转移 5.341 0.021 11.206 0.001 5.329 0.021有39 31(79.49) 32(82.05) 33(84.62)无30 16(53.33) 13(43.33) 18(60.00)腹水 4.590 0.032 4.810 0.028 4.257 0.039有41 32(78.05) 31(75.61) 34(82.93)无28 15(53.57) 14(50.00) 17(60.71)

3 术后分析

术后随访表明：卵巢癌组患者1年总生存率为78.26%（54/69），STAT2、CD24和CD44阳性者1年生存率为72.34%、71.11%和74.51%，均低于STAT2、CD24和CD44阴性者1年生存率90.91%、91.67%和88.89%，其中CD24阳性性1年生存率低于CD24阴性患者1年生存率的差异具有统计学意义（表3）。

表3 STAT2、 CD24和CD44蛋白不同表达患者1年生存率Tab.3 One-year survival rate of patients with different expression level of STAT2, CD24 and CD44

讨 论

卵巢癌的发生发展主要与长期的性激素受体敏感性改变以及家族易感基因携带有关，尤其在45岁以后伴有卵巢癌家族史的人群中发病率进一步升高[15]、全球每年有239 000例新发病例，152 000例死亡病例[16]。临床上一直缺乏早期有效的诊断，约75%的患者出现临床症状时为中晚期[17]，失去手术根治机会[18]。尽管近年卵巢癌的手术和化疗取得较大进展，以及新的靶向药物的问世[19]，患者生存期得到不断延长，但早期诊断仍然比较困难，患者术后易出现复发转移[20]。针对卵巢癌发病机制从分子水平研究致病相关基因，寻找新的治疗靶点是临床研究热点。肿瘤干细胞的提出，为卵巢癌早期诊断提供新的思路。2005年，Bapat首次证实卵巢癌组织中存在肿瘤干细胞，可能来源于卵巢表面上皮，当细胞DNA损伤无法修复时，可转化为肿瘤干细胞。

细胞粘附分子是一类可以介导细胞间，细胞与细胞外基质之间相互作用的分子的统称[21]。STAT2是STATs家族重要成员，是构成JAK-STAT信号通路的重要组成，是最常见肿瘤干细胞之一，可介导多种细胞因子和生长因子信号转导，在免疫、炎症反应、抗病毒、肿瘤血管生成、肿瘤细胞增殖和肿瘤耐药等多种生物学行为发挥重要作用，其高表达与卵巢癌密切相关[22]。CD24是一种糖蛋白，不仅参与人体正常生理过程，在乳腺癌、胃癌、结肠癌、肺癌等恶性肿瘤可呈过表达状态，可能与肿瘤生长、转移和侵袭相关，既往有关于CD24参与卵巢癌发病过程报道，但是其与临床病理资料相关性鲜有研究[23]。CD44属于跨膜糖蛋白，是卵巢癌肿瘤干细胞的一种，在多种恶性肿瘤侵袭转移过程高表达，在卵巢癌肿瘤干细胞同样高表达，介导卵巢癌细胞生存、生长和种植转移的重要信号分子[24]。

本组研究发现，卵巢癌组患者STAT2、CD24和CD44阳性表达率均高于良性对照组，提示STAT2、CD24和CD44蛋白可能为卵巢癌生物学标志物。进一步研究发现，STAT2、CD24和CD44蛋白阳性表达水平与年龄、病理类型无显著相关性，而与病理分期、分化程度、淋巴结转移和腹水显著相关，即在（Ⅲ+Ⅳ）期阳性率高于（Ⅰ+Ⅱ）期，低分化阳性率依次高于中分化和高分化，伴有淋巴结转移阳性率高于未见淋巴结转移，有腹水患者阳性率高于无腹水患者，再次佐证其高表达可能在卵巢癌侵袭、转移、癌细胞播散等病理过程发挥一定作用。此外，尤其是CD24阳性表达患者1年生存率显著低于CD24阴性表达患者，说明CD24高表达可能为潜在预后不良标志物；STAT2和CD44表达与病理分期、分化程度、淋巴结转移和腹水的相关性还需要收集更多样本研究证明。

卵巢癌患者STAT2、CD24和 CD44表达水平明显高于卵巢良性肿瘤患者的结果除了提示其可作为卵巢癌患者肿瘤标志物外，还提示下调其（尤其是CD24）表达水平可能成为卵巢癌治疗的潜在靶点。