牛奶蛋白过敏症患儿血清IgE及淋巴细胞亚群的测定及意义

黄婉文 邸晓华 郭淑雯 郭笑芳 袁慧珍★

牛奶蛋白过敏症（cow's milk protein allergy，CMPA）为儿童常见的一种变态反应性疾病，是指机体摄入牛奶蛋白质后产生一系列的有害免疫［1］。其中，牛奶中蛋白质以β 乳球蛋白、γ 球蛋白、乳白蛋白、酪蛋白四种为主，婴幼儿致敏原又以β 乳球蛋白和酪蛋白多见。当这些过敏原进入患儿机体中，可通过IgE 介导激活肥大细胞致敏，且释放大量的5-羟色胺、缓激肽等物质，引起消化系统等临床表现，譬如恶心、呕吐、腹泻等；另外，皮肤上可表现出湿疹、荨麻疹、皮肤瘙痒及面部、唇部水肿等［2］。严重者可引起致敏喉水肿、窒息及过敏性休克。目前CMPA 病因相对复杂，T、B 淋巴细胞功能紊乱，尤其是以Th2 为主导的免疫应答，参与了CMPA 的发生发展。本研究通过检测血清IgE 及淋巴细胞亚群在CMPA 患儿中的表达，探讨其在CMPA 发病中的作用，为临床诊治提供依据。报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料

分析2018年5月2020年5月东莞市人民医院诊治的64 例CMPA 患儿，其中男性30 例（46.88%）、女性34 例（53.13%）；年龄（3.25±1.26）岁。选取同期38 例健康体检儿童的临床资料。其中男性19 例（50.00%）、女性19 例（50.00%）；年龄（3.32±1.18）岁；两组一般资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。所有入组者监护人均知情并签署同意书。

诊断标准：符合婴幼儿牛奶蛋白过敏国内外指南解读［3］中关于CMPA 的诊断标准，经皮肤点穿刺试验、食物激发试验检测为阳性。

纳入标准：①临床资料完整；②年龄1～6 岁；③无药物性过敏。排除标准：①伴有感染性疾病；②伴检测前1 周服用过抗组胺类药物；③接受本次研究前一周服用影响IgE、淋巴细胞亚群等生化指标药物。本研究符合《赫尔辛基宣言》的伦理审查。

1.2 检测方法

于空腹状态下抽取受试者3 mL 静脉血两份置于EDTA-K2 抗凝管内，1 份离心处理后取上清液待检，1 份全血标本分离淋巴细胞弃上清液待检。其中，采用Beckman-coulter lmmage800 特种蛋白分析仪检测血清免疫球蛋白（IgE、IgG、IgA、IgM）和补体（C3、C4），选择免疫比浊法定量检测试剂盒测定，四川迈克生物科技股份有限公司提供。采用流式细胞仪BD FACSCalibur 及BD 配套试剂检测淋巴细胞亚群，包括CD3+、CD3+CD8+、CD3+/CD19+、CD19+CD23+、CD19+。结果由MultiSET及CellQuest Pro 软件分析获得。

1.3 观察指标

①两组IgE、IgG、IgA、IgM、C3、C4、CD3+、CD3+CD8+、CD3+/CD19+、CD19+CD23+表达。②血清IgE 与淋巴细胞亚群的相关性。③评估IgE、CD3+、CD3+CD8+、CD3+/CD19+、CD19+CD23+诊断CMPA 的AUC值、敏感度、特异度。

1.4 统计学方法

采用SPSS 22.0 软件分析本次数据。符合正态分布的计量资料用（）表示，行独立样本t检验；分类变量以例数和百分率用n（%）表示，行χ2检验；血清IgE 与淋巴细胞亚群（CD3+、CD3+CD8+、CD3+/CD19+、CD19+CD23+、CD19+）相关性采用Pearson 法分析；IgE、CD3+、CD3+CD8+、CD3+/CD19+、CD19+CD23+、CD19+诊断CMPA价值采用ROC曲线分析；以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组免疫球蛋白比较

过敏症组的IgE、IgG 高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）；两组IgA、IgM、C3、C4 比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

表1 两组免疫球蛋白比较（±s）Table 1 Comparison of two groups of immunoglobulins（±s）

表1 两组免疫球蛋白比较（±s）Table 1 Comparison of two groups of immunoglobulins（±s）

组别过敏症组对照组t 值P 值n 64 38 IgE（g/L）165.02±46.32 48.52±15.25 15.003＜0.001 IgG（g/L）9.05±2.12 8.25±1.85 2.026 0.045 IgA（g/L）0.78±0.15 0.83±0.18 1.509 0.134 IgM（g/L）1.31±0.41 1.24±0.23 0.965 0.337 C3（g/L）0.99±0.15 1.02±0.21 0.839 0.404 C4（g/L）0.23±0.07 0.21±0.05 1.542 0.126

2.2 两组淋巴细胞亚群比较

过敏症组的CD3+、CD3+CD8+低于对照组，而CD3+/CD19+、CD19+CD23+、CD19+高于对照组，差异均有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2 两组淋巴细胞亚群比较（±s）Table 2 Comparison of lymphocyte subsets between the two groups（±s）

表2 两组淋巴细胞亚群比较（±s）Table 2 Comparison of lymphocyte subsets between the two groups（±s）

组别过敏症组对照组t 值P 值n 64 38 CD3+（%）49.23±12.02 64.28±17.32 5.17＜0.001 CD3+CD8+（%）18.92±6.25 29.55±8.65 7.178＜0.001 CD3+/CD19+（%）19.71±8.02 12.25±4.32 5.289＜0.001 CD19+CD23+（%）12.32±4.10 3.55±1.46 12.695＜0.001 CD19+（%）15.23±2.05 10.39±1.11 13.415＜0.001

2.3 相关性分析

Pearson 相关分析显示，CD3+、CD3+CD8+与IgE呈负相关（P＜0.001），CD3+/CD19+、CD19+、CD19+CD23+与IgE 呈正相关（P＜0.001）。见表3。

指标CD3+CD3+CD8+CD3+/CD19+CD19+CD23+CD19+IgE r 值-0.303-0.389 0.588 0.759 0.785 P 值0.008＜0.001＜0.001＜0.001＜0.001

2.4 诊断效能分析

ROC 曲线分析显示，IgE、CD3+、CD3+CD8+、CD3+/CD19+、CD19+CD23+、CD19+诊断CMPA 的AUC值分别为（0.997、0.741、0.752、0.805、0.998、0.960，P＜0.05）。依据AUC 及标准误，采用Z检验AUC差异，结果显示，IgE 与CD3+AUC 比较，Z=4.618、P＜0.001；IgE 与CD3+CD8+AUC 比较，Z=4.53、P＜0.001；IgE 与CD3+/CD19+AUC 比较，Z=4.346、P＜0.001；IgE 与CD19+CD23+AUC 比较，Z=-0.277、P=1.218；IgE 与CD19+AUC 比较，Z=6.541、P＜0.001；敏感度分别为0.984、1.000、0.500、0.734、0.969、0.906；特异度分别为1.000、0.500、1.000、0.844、1.000、1.000。见表4、图1～2。

图1 CD3+/CD19+、CD19+CD23+及IgE 的ROC 曲线分析Figure 1 ROC curve analysis of CD3+/CD19+，CD19+CD23+and IgE

图2 CD3+、CD3+CD8+的ROC 曲线分析Figure 2 ROC curve analysis of CD3+，CD3+CD8+

表4 血清IgE 与淋巴细胞亚群的诊断效能分析Table 4 Analysis of diagnostic efficacy of serum IgE and lymphocyte subsets

3 讨论

经流行病学调查发现［4］，目前国内婴幼儿牛奶蛋白过敏患病率约为2.00%～7.50%。据报道［5］，CMPA 主要集中于2 岁以下儿童。且有研究指出［6］，CMPA 是影响婴幼儿生长发育的主要因素之一，若是得不到正常诊治，约有二分之一的CMPA 患儿可发展至食物过敏。因此早期诊治意义重大。目前临床上对于牛奶蛋白等食物造成的过敏机制尚未完全阐明，仅认为它的发生与机体免疫反应有关。譬如存在Th1/Th2 型免疫反应失衡，当Th2 反应过强则会影响Th1，即导致其反应受抑制。为了进一步证实上述说法的可靠性，本研究采用流式细胞仪检测CMPA 患儿与健康体检儿的淋巴细胞亚群，结果显示，过敏症组的CD3+CD8+低于对照组，由此说明过敏症组患儿存在CD3+CD8+淋巴细胞抑制现象。经分析可能与肠道内可溶性抗原有关，能选择性激活CD8+T 细胞抑制功能［7］。另外，在CD19+CD23+淋巴细胞百分比中，发现其在过敏症组患儿中呈高表达。而CD19+CD23+为B 细胞表面标志物，由此推测，B 细胞参与了机体分泌食物过敏原特异性抗体，继而导致CMPA的发生［8］。

有研究表示［9］，T 淋巴细胞不仅参与了细胞免疫，还可调节细胞参与多种免疫反应。在研究中，过敏症组的CD3+低于对照组，而CD3+/CD19+高于对照组。其中，CD3+含量代表着T 淋巴细胞水平。故本文认为CD3+含量的下调与T 淋巴细胞免疫功能降低有关。而免疫功能的下降又会减弱B 细胞抑制作用，且使其大量产生IgE 抗体，成为CMPA 发病的关键［10］。而CD3+/CD19+为真正的B 淋巴细胞，其水平的升高表明B 细胞在机体分泌食物过敏原特异性抗体方面具有重要作用。血清过敏原特异性IgE 为临床诊断变态反应的特异指标。在正常情况下，血清中IgE 含量较低，但当IgE 抗体介导变态反应时，则会引起高表达。在研究结果中可见，过敏症组的IgE 高于对照组。经分析可能是患儿在接触过敏原后，会激活机体的免疫反应，形成一系列临床表现，并且在机体免疫系统被激活后生成IgE 抗体，而该抗体又附着于肥大细胞上，能使机体更加敏感化，当再次接触类似或相同过敏原后，则会从肥大细胞内释放大量的炎症介质，最终形成过敏反应，导致血清IgE 上升，而IgE 的合成又与T 淋巴细胞密切相关，可能因细胞免疫是启动病理学过敏反应的重要原因。也有学者指出，血清IgG 可作为评估食物过敏性疾病的有效指标［11］。研究结果显示，过敏症组的IgG 表达量高于对照组，针对过敏症组的IgG 表达量分析，发现其波动水平较小可能与IgG 介导的过敏反应多属迟发型有关，故早期测定IgG 水平，并没有出现显著升高趋势［12］。

基于血清IgE 及淋巴细胞亚群研究，本文发现两者之间具有密切联系。在Pearson 相关分析中显示，CD3+、CD3+CD8+与IgE 呈负相关，CD3+/CD19+、CD19+CD23+、CD19+与IgE 呈正相关。提示过敏原致敏时能对调节性T 细胞的比例及其功能造成不利影响［13］。针对其作用机制分析，可能是IgE抗体的生成和血清IgE 表达量的上调，会在一定程度上破坏T 淋巴细胞亚群的平衡，引起细胞免疫功能紊乱。同时CMPA 患儿多项免疫指标的改变，也间接表示了婴幼儿胃肠道免疫功能尚未发育成熟，故导致CMPA 多见于婴幼儿及儿童［14-15］。因此本文认为测定IgE、淋巴细胞亚群意义重大，有利于及时了解患儿免疫功能变化和特异性IgE抗体应答情况。在ROC 曲线模型中可见，IgE、CD3+、CD3+CD8+、CD3+/CD19+、CD19+CD23+、CD19+的AUC 值分别为0.997、0.741、0.752、0.805、0.998、0.960，说明上述指标能为CMPA 诊断及治疗提供依据。另外，针对CMPA，本文认为除达到食物回避效果及保证营养供应外，可通过调节机体免疫是否能达到防治CMPA 的作用。但目前对于该说法还有待进一步研究。

综上所述，血清IgE 在CMPA 患儿中呈高表达，其水平的上调会影响患儿机体免疫功能，因此检测血清IgE 及淋巴细胞亚群表达对掌握病情变化和指导临床治疗具有重要意义。本研究不足：本研究为回顾性研究，且样本量相对较少，可能存在一定偏差，尚需大样本进一步研究。