染色体分析在慢性骨髓增殖性疾病诊断及治疗中的应用价值

崔岗

慢性骨髓增殖性疾病发生机制尚未明确,是一组多能造血干细胞的克隆性疾病［1］。该病类型多,如慢性粒细胞白血病、原发性血小板增多症、慢性中性粒细胞白血病、肥大细胞增生症等［2,3］。而不同疾病类型,临床治疗方法也不同。因此,准确诊断慢性骨髓增殖性疾病,为疾病治疗、进展及预后提供有效依据至关重要。既往是根据患者临床表现、血液学、骨髓检查等综合手段进行诊断,但无法准确诊断疾病,误诊率高［4,5］。染色体分析的应用,是基于细胞遗传学、分子生物学技术发展而来,具有一定的诊断技术。现本研究拟对慢性骨髓增殖性疾病采用染色体分析,报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集本院2018 年1 月～2020 年12 月期间收治的95例慢性骨髓增殖性疾病患者,男51例,女44例；年龄2～76 岁,平均年龄(49.83±15.97)岁；参照《血液病诊断及疗效标准》［6］判定疾病类型,慢性粒细胞白血病82例,原发性血小板增多症6例,原发性骨髓纤维化4例,真性红细胞增多症3例；所有患者均采集骨髓细胞行染色体分析；患者知情研究,且签署了同意书；该研究符合本院医学伦理委员会审批标准,且审核通过。

1.2 方法 制备RPMI 1640 培养液(GIBCO BRL 公司提供),装入培养瓶内,置入-20℃冰箱内保存备用。无菌注射器采集骨髓液2 ml,置入RPMI1640 培养瓶内。先行染色体制备,培养瓶带回实验室,骨髓有核细胞计数,并将其接种含有RPMI 1640 的标本瓶内,放置37℃温箱内培养,持续24 h,定时摇匀。24 h 后,取出培养瓶摇匀,加入80 μl 秋水仙胺,摇匀后放置37℃温箱内培养1 h。1 h 后吸取培养物,置入尖底离心管,离心10 min,1000 rpm,离心半径13.5 cm。丢弃上清液,加入约8 ml 的0.075 mol/L 氯化钾溶液,摇匀后孵育30 min。随后加入固定液1 ml,混匀后离心10 min。丢弃上清液,加入8 ml 固定液,混匀,室温放置30 min。离心10 min 后,弃上清液,加入8 ml 固定液,混匀,室温放置15 min。离心10 min 后,丢弃上清液,加入8 ml固定液,混匀,室温放置15 min。离心10 min,丢弃上清液,加入适量固定液,配制细胞悬液,保存备用。将制备后的细胞悬液打匀后,吸取少量,滴至洁净、无脂的玻片,滴2～3 滴/片,在酒精灯上干燥。于50 ml染缸内倒入Earle's 溶液,置入水浴箱内进行加热至87.5℃。将玻片制备好后,水洗、晾干,以10% Giemsa染液进行染色,15 min,水洗后于进行镜检。在显微镜下观察染色细胞,分析10～20 个分裂中期细胞,是否存在Rh 染色体及其异常,将其排列呈核型。

1.3 观察指标及判定标准 分析骨髓增殖性疾病患者染色体异常检出率、慢性粒细胞白血病染色体异常检出率及治疗前后染色体变化情况。慢性骨髓增殖性疾病效果判定标准：血液学缓解(CHR)：外周血白细胞＜10×109/L,血小板＜3000×109/L,无髓外白血病浸润。CCyR：骨髓内无Ph 阳性细胞。主要遗传学缓解(MCR)：骨髓内Ph 阳性细胞数量占比＞0,但≤35%［5］。

1.4 统计学方法 采用SPSS20.0 统计学软件进行统计分析。计数资料以率(%)表示,采用χ2检验。P＜0.05 表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 骨髓增殖性疾病患者染色体异常检出率 95例慢性骨髓增殖性疾病患者染色体异常检出率为77.89%(74/95),Ph 染色体阳性率为70.53%(67/95),其他染色体异常检出率为7.37%(7/95)。见表1。

表1 95例骨髓增殖性疾病患者染色体异常检出率 (n,%)

2.2 慢性粒细胞白血病染色体异常检出率 82例慢性粒细胞白血病患者,染色体异常检出率为81.71%(67/82),其中Ph 染色体阳性率为76.83%(63/82),其他染色体异常率为4.88%(4/82)。见表2。

表2 82例慢性粒细胞白血病患者染色体异常检出率(n,%)

2.3 不同方法治疗染色体变化情况比较 动态分析24例慢性骨髓增殖性疾病患者治疗情况,其中17例Ph 染色体阳性的慢性粒细胞白血病患者经格列卫治疗,用药至今,14例达到CCyR,转正常核型,占82.35%(14/17)；7例Ph 染色体阳性的慢性粒细胞白血病患者经异基因骨髓移植治疗,随访至今,6例转正常核型,占85.71%(6/7)；经格列卫治疗与经异基因骨髓移植治疗转正常核型的比例比较,差异无统计学意义(χ2=0.040,P=0.841＞0.05)。见表3。

表3 不同方法治疗染色体变化情况比较［n(%)］

3 讨论

慢性骨髓增殖性疾病类型多,发生机制复杂不明,既往疾病诊断仅依靠临床表现、血液学及骨髓细胞学检查,难以准确诊断疾病。染色体分析是在细胞遗传学基础上发展而来,并逐级成为诊断恶性血液病的重要方法,不仅能诊断恶性血液病,也能为疾病预后判断、个体化治疗提供依据［6,7］。对慢性骨髓增殖性疾病患者行染色体分析时,因血液病染色体呈数量、结构异常,其中数量异常为整倍体及非整倍体异常,结构异常为结构断裂、易位、缺失等［8,9］。慢性粒细胞白血病发病机制过程中,染色体易位会促使BCR-ABL 融合基因形成,但慢性向加速期、急变期进展时,可能使BCR-ABL 阳性克隆出现遗传学变化［10］。真性红细胞增多症出现重现性染色体异常,克隆性异常及染色体双排发生率均＞20%。原发性血小板增多症患者染色体异常与疾病转归、转化密切相关,且能提示疾病预后不良［11］。原发性骨髓纤维化多见1 号、13 号及20 号染色体重现性异常,为细胞遗传学诊断提供有利信息。慢性骨髓增殖性疾病中的多种病症均有共同的发病、表现及病情转归特征,各病症之间可相互存在及转化［12,13］。本组研究中,95例慢性骨髓增殖性疾病患者染色体异常检出率为77.89%,其中Ph 染色体阳性率70.53%,其他染色体异常检出率7.37%。82例慢性粒细胞白血病患者,染色体异常检出率81.71%,其中Ph 染色体阳性率76.83%,其他染色体异常率4.88%。研究发现,慢性骨髓增殖性疾病存在明显的染色体异常,其中以Ph 染色体阳性为主。

慢性粒细胞白血病治疗时主要为异基因骨髓移植,格列卫的运用,为肿瘤靶向治疗开创了一个新时代。该药物能够抑制肿瘤细胞的增殖,阻断Ph 染色体阳性细胞向BCR-ABL 络氨酸激酶转化。本组研究中,动态分析24例慢性骨髓增殖性疾病患者治疗情况,其中17例Ph 染色体阳性的慢性粒细胞白血病患者经格列卫治疗,用药至今,14例达到CCyR,转正常核型,占82.35%(14/17)；7例Ph 染色体阳性的慢性粒细胞白血病患者经异基因骨髓移植治疗,随访至今,6例转正常核型,占85.71%(6/7)；经格列卫治疗与经异基因骨髓移植治疗转正常核型的比例比较,差异无统计学意义(P＞0.05)。因此格列卫对慢性粒细胞白血病的治疗具有一定效果,但因研究样本量少,是否会影响其他染色体,仍需研究。

综上所述,染色体分析能有效诊断慢性骨髓增殖性疾病,为疾病治疗提供系统依据,具有一定应用价值。