ER、DAPK2在妊娠期高血压疾病胎盘组织中的表达

王滋烁，黄鑫

(锦州医科大学，辽宁 锦州 121000)

妊娠期高血压疾病是最常见的妊娠期内科并发症，我国的发病率达5.22%～5.57%，可以导致胎盘早剥、DIC、胎儿生长受限、胎死宫内等多种严重的并发症，甚至孕产妇及新生儿围产期死亡。该病的病因与发病机制至今仍未完全阐明[1]。HDCP 患者胎盘功能异常和胎盘血管重塑不足，这很可能是由于滋养层细胞浸润能力下降导致，并且胎盘同时存在多发钙化及梗死至胎盘功能严重受损。雌激素通过与雌激素受体结合发挥相应效应，在整个妊娠期起着重要的调节作用，并且在胎盘形成过程中起到决定性作用[2-3]。而死亡相关蛋白激酶2对于细胞自噬及氧化应激起到重要作用[4]，而目前在HDCP的胎盘组织中的研究罕有报道。死亡相关蛋白激酶2(DAPK2)属于丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶家族的蛋白质，在细胞生存、凋亡和自噬等过程中起着重要作用。DAPK2可能通过NF-kB磷酸化来抑制TRAIL受体进而刺激的细胞凋亡，并影响血管内皮细胞功能[5]，在胎盘的血管内皮表达且与内皮损伤相关。但目前在妊娠期高血压疾病中的作用尚不明确。本文通过检测雌激素受体、DAPK2在妊娠期高血压的产妇胎盘中的表达情况，探讨雌激素受体、DAPK2在妊娠期高血压疾病在子痫前期及重度子痫前期中作用的可能机制。

1 资料与方法

1.1 一般资料

本研究经我院伦理委员会批准，于2018年6月至2018年12月在锦州医科大学附属第一医院产科行剖腹产分娩的孕妇中选取正常产妇29例，平均年龄(25.83±2.73)岁，平均孕周(39.1±1.53)w为对照组；患妊娠期高血压疾病产妇43例，其子痫前期患者12例，平均年龄(27.78±3.02)岁，平均孕周(37.3±1.58)w，重度子痫前期患者31例，平均年龄(29.72±4.68)岁，平均孕周(34.8±2.78)w。诊断标准参照《妇产科学》第八版。纳入标准：(1)患者均为单胎妊娠，未进入产程；(2)病例均无妊娠并发症(妊娠期高血压疾病并发症除外)及其它原发疾病，两组患者年龄均在 23～35 岁之间。比较两组一般资料差异无统计学意义(P>0.05)。

排除标准：(1)合并先天性心脏病、慢性高血压疾病、慢性肾炎、糖尿病等妊娠合并症；胎膜早破、临产；胎死宫内；(2)临床资料不完善，拒绝参加临床实验者；(3)慢性高血压合并妊娠。

标本采集：产妇娩出胎盘后30 min内采集1.5 cm×1.5 cm×1.5 cm标本组织，取一部分标本迅速用甲醛溶液固定后过夜，准备用于制作石蜡切片并进行免疫组化染色检测试验。

1.2 方法

免疫组织化学染色检测结果判定:标本组织连续切片，切片厚度5 μm，进行免疫组织化学法检测胎盘组织中雌激素受体、DAPK2的表达情况。结果判定：雌激素受体阳性表达的细胞呈棕黄色，主要定位于胎盘组织细胞的细胞核和细胞质内。DAPK2阳性表达的细胞呈棕黄色，主要定位于胞核和细胞质内。将处理好的标本组织放在光镜下，用高倍镜观察，随机选取5个高倍镜视野(400×)，记录该视野内阳细胞的个数并根据视野内阳性细胞所占的百分比进行分级处理。分级标准如下：0级，(-)阴性，该视野阳性细胞数目为0，细胞内无棕色颗粒出现；1级，(+)弱阳性，该视野内阳性细胞所占的百分比为1%～25%，细胞内出现阳性染色反应；2级，(++)中度阳性，该视野内阳性细胞所占百分比为26%～50%，细胞内出现阳性染色反应；3级，(+++)强阳性，该视野内阳性细胞所占百分比>50%。

1.3 统计学方法

2 结 果

2.1 ER、DAPK2在妊娠期高血压疾病孕妇的胎盘组织中的表达及定位

本次实验收集正常足月剖宫产胎盘组织29例，妊娠妊娠期高血压疾病胎盘组织43例。进行免疫组化实验，分别观察ER、DAPK2在胎盘组织中的表达，分析其定位及表达程度。免疫组化结果显示，雌激素受体在正常妊娠孕妇及患有妊娠期高血压疾病的孕妇中均有表达，主要定位于滋养叶细胞的细胞核和细胞质内。雌激素受体主要表达于胞核内，见图1。

A：重度子痫前期胎盘组织中DAPK2低表达；B：正常妊娠胎盘组织中DAPK2高表达

妊娠期高血压疾病组的表达明显低于正常对照组(P<0.05)。DAPK2在妊娠期高血压疾病组、正常对照组中也均有表达，主要表达于滋养叶细胞、血管内皮细胞的胞浆。DAPK2在正常对照组中的表达明显高于妊娠期高血压疾病组(P<0.05)。且在相同组织中，DAPK2、ER表达下调一致，见表1。

表1 ER、DAPK2在妊娠期高血压疾病孕妇的胎盘组织中的表达

2.2 ER、DAPK2在子痫前期重度的胎盘组织中的表达低于子痫前期

本次妊娠期高血压疾病病例中，收集子痫前期患者胎盘组织12例、重度子痫前期患者胎盘组织31例，对其免疫组化结果分析后发现。随疾病程度的加重，ER、DAPK2在胎盘组织中的表达明显差异，且其差异有统计学意义(P<0.05)，见表2。ER、DAPK2在子痫前期重度的胎盘组织中的表达明显低于子痫前期的胎盘组织。提示DAPK2可能在妊娠期高血压疾病的加重过程中起到重要的作用。由于ER、DAPK2均出现疾病加重是表达降低，遂进行了其表达的相关性分析。结果提示ER、DAPK2在子痫前期、子痫前期重度的胎盘组织中的表达程度正相关(R=0.56,P<0.05)。

表2 ER、DAPK2在子痫前期、子痫前期重度的胎盘组织中的表达

2.3 DAPK2的表达与新生儿出生体重、胎盘重量相关

本次研究同时统计了全组患者的新生儿体重、胎盘重量及产后血压。在妊娠期高血压疾病组中，将DAPK2表达情况分为两组。其中高表达组为中度阳性及强阳性(共23例)，低表达组为弱阳性(共20例)。分别比较并分期两组间新生儿体重、胎盘重量及产后血压的差异。发现DAPK2高、低表达两组间表达存在差异，且差异有统计学意义(P<0.05)，见表3。

表3 DAPK2高表达与低表达组中新生儿出生体重、胎盘重量、产后血压生的比较

DAPK2低表达组在新生儿体重、胎盘重量均低于高表达组。提示DAPK2的表达可能与妊娠期高血压疾病中新生儿生长发育。DAPK2高表达组产后3个月复诊时血压高于低表达组，且差异有统计学意义(P<0.05)，提示围产期结局不良相关。

3 讨 论

妊娠期高血压是产妇特有的较为常见的一种临床并发症，也是孕产妇及围产期胎儿死亡的主要原因之一，该病严重威胁妊娠期母儿生命健康[6]。由于对该病的病因和发病机制仍未明确，目前现有的各种学说均未能完整的解释该病的机理，所以针对该病仍缺乏有效的预防措施和治疗方法。

雌激素是促进女性生殖器官发育的重要性激素，通过与存在于靶器官细胞核上的雌激素受体特异性结合，启动一系列合成蛋白的反应来发挥其相应的生理作用[7]。由此看来，雌激素要想发挥正常的生理功能不仅需要在血浆中保持正常的浓度，还需要靶器官和靶组织中存在数量足够的并且具有正常功能的雌激素受体。大量研究表明胎盘氧化应激和细胞凋亡可能与子痫前期的病理生理特征有关[8-9]。DAPK2在凋亡相关疾病中发挥着重要的作用[10]，可能通过NF-kB磷酸化来抑制TRAIL受体进而刺激的细胞凋亡，并影响血管内皮细胞功能[5]3284，在胎盘的血管内皮表达且与内皮损伤相关。由此本文选择DAPK2与ER联合检测尝试探讨其在妊娠期高血压疾病胎盘病理改变中的作用。DAPK2是死亡蛋白激酶相关家族成员之一，在细胞生存、凋亡和自噬等过程中起着重要作用。本次研究发现在妊娠期高血压患者与正常产妇的胎盘组织中ER、DAPK2均有表达，但ER主要表达于滋养叶细胞中，而DAPK2在滋养叶细胞中、内皮细胞中均有表达。ER、DAPK2在胎盘组织中的表达有趋向一致性，在妊娠期高血压疾病的胎盘组织中的表达明显低于正常组织，且与疾病程度相关。并且ER、DAPK2的表达呈正相关性。本次研究同时证明，随着DAPK2表达降低新生儿体重、胎盘重量也降低。这可能提示ER、DAPK2的低表达在妊娠期高血压疾病的进展过程中起到一定的作用，且与预后不良相关。大量研究表明，自噬是一个在分化和发育过程中维持细胞内稳态、循环的过程，研究证实自噬也在子痫前期的胎盘组织中观察到[11]。DAPK2通过AMPK进而在促进细胞自噬的过程中起到重要作用[12]。雌激素受体分布在众多系统组织中，但是对于女性孕期雌激素生理起关键作用的还是胎盘内的雌激素受体数目。大量的研究结果表明，雌激素对于心脑血管的血压调节具有保护作用[13]。本研究提示胎盘组织中雌激素受体表达的下降，提示妊娠期高血压疾病的孕期血压、心功能预后不良，可能与内皮细胞损伤相关。本次研究结果显示，雌激素受体、DAPK2表达水平的降低可能与妊娠期高血压疾病的进展相关。