Her-2蛋白、PGⅡ及Sema4D蛋白在胃癌组织中的表达及临床意义

彭强 余昌俊

据统计，我国胃癌的发病率位居世界第一，每年死亡人数高达30 万人，严重危害了患者的生命健康［1-2］。寻找诊断胃癌、评估病情的特异性标志物意义重大［3］。目前，已有较多相关研究证实人类表皮生长因子受体-2（Human epidermal growth factor receptor 2，HER-2）、胃蛋白酶原（Pepsinogen，PG）、轴突导向生长因子4D（Semaphorin 4D，Sema4D）对胃癌的诊断具有一定价值［4］。HER-2 是一种糖基化多肽性分泌因子，在肿瘤的发生发展中发挥关键作用［5］。PG 是一种消化性蛋白酶，主要有PGI及PGⅡ，其中PGⅡ与胃底黏膜病变有较高相关性［6］。Sema4D蛋白具有促进肿瘤血管发生的作用［7］，是继血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor，VEGF）后，又一促血管新生因子。本文就Her-2蛋白、PGⅡ及Sema4D蛋白在胃癌组织中的表达及临床意义进行分析，旨在为胃癌的研究提供参考数据，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取安徽医科大学第一附属医院2014年10月至2016年1月收治的100 例胃癌患者。纳入标准：①均符合《内科学（第九版）》中胃癌的诊断标准［8］；②参与研究前3月均未参与其他治疗；③病例资料完整；④无其他消化系统疾病。排除标准：①合并白血病等血液疾病者；②三月内服用过抗生素者；③合并精神障碍者；④存在其他恶性肿瘤者；⑤合并风湿免疫系统疾病者。男68 例，女32 例，平均年龄（55.21±6.37）岁。收集患者的胃癌组织及癌旁（距离胃癌组织5 cm 以上）正常组织作为胃癌组和癌旁正常组织组。本研究经院医学伦理委员会批准通过，受试者或其家属已签署知情同意书。

1.2 方法

采用酶联免疫吸附法检测血清PGⅡ，患者空腹采静脉血3 mL，抗凝离心后以-20℃保存。实验时将血浆以37℃温浴箱孵化，同时取出PGⅡ试剂盒，等温度达到28℃时，开始配制标准品液，加样并密封保存，洗板4～7 次，将反应板置于酶标仪里分别测定其水平。PGⅡ试剂盒购自上海西唐生物科技有限公司。

采用免疫组化染色法检测Her-2蛋白、Sema4D蛋白。兔抗人HER2 单克隆抗体、兔抗人Sema4D 单克隆抗体均购于福州迈新生物技术开发公司，检测试剂盒均购自北京中衫金桥生物技术有限公司，检测均严格按照检测说明书进行。阳性判定标准［9］：肿瘤细胞胞质或细胞核中出现棕黄色或棕褐色颗粒，反之则为阴性。阳性细胞比例评分：≤5%为0 分，＞5%～25%为1 分，＞25%～50%为2 分，＞50%～75%为3 分，＞75%为4 分；染色强度评分：未染色为0 分，淡黄色为1分，棕黄色为2 分，棕褐色为3 分。染色指数=阳性细胞比例评分+染色强度评分。染色指数＞3 分为阳性；染色指数≤3 分为阴性。阳性率=阳性例数/总例数×100%。

所有患者均在出院后通过电话、微信、到院复诊等方式进行为期5年的随访，随访直至随访期结束或患者死亡。

1.3 统计学方法

采用SPSS 22.0 软件进行统计分析，计数资料以n（%）表示，行χ2检验，影响胃癌患者预后生存的危险因素以Logistic 回归分析，以P＜0.05 为差异统计学意义。

2 结果

2.1 两组Her-2蛋白、PGⅡ及Sema4D蛋白表达情况比较

胃癌组Her-2蛋白、PGⅡ及Sema4D蛋白阳性表达率均高于癌旁正常组织组，差异均有统计学意义（P＜0.05）。见表1、图1。

图1 胃癌组织中Her-2蛋白、PGⅡ及Sema4D蛋白免疫组化染色图（SP，×500）Figure 1 Immunohistochemical staining of Her-2 protein,PGⅡand Sema4D protein in gastric cancer tissue（SP，×500）

表1 两组Her-2蛋白、PGⅡ及Sema4D蛋白表达情况比较［n（%）］Table 1 Expression of HER-2 protein，PG Ⅱand Sema4D between the two groups［n（%）］

2.2 Her-2蛋白、PGⅡ及Sema4D蛋白与临床病理参数的关系

肿瘤直径（≥5 cm）、分化程度（低分化）、TNM分期（Ⅲ期～Ⅳ期）、淋巴结转移（有）患者的Her-2、PG Ⅱ及Sema4D蛋白的阳性表达率更高（P＜0.05）。见表2。

表2 Her-2蛋白、PGⅡ及Sema4D蛋白与临床病理参数的关系［n（%）］Table 2 the relationship between HER-2 protein，PG Ⅱand Sema4D protein and clinicopathological parameters［n（%）］

2.3 影响胃癌患者预后生存的单因素分析

随访资料显示100 例胃癌患者死亡41 例，存活59 例，死亡率为41.00%，存活率59.00%。肿瘤直径、分化程度、TNM 分期、淋巴结转移为影响患者预后生存的单因素（P＜0.05），年龄、性别非影响患者预后生存的单因素（P＞0.05）。见表3。

表3 影响胃癌患者预后生存的单因素分析［n（%）］Table 3 univariate analysis of prognostic factors in patients with gastric cancer［n（%）］

2.4 影响胃癌患者预后生存的多因素分析

logistic 分析结果显示：肿瘤直径、分化程度、TNM 分期、淋巴结转移及Her-2、PGⅡ、Sema4D蛋白表达均为影响患者预后的危险因素（P＜0.05），见表4。

表4 影响胃癌患者预后生存的多因素分析Table 4 multivariate analysis of prognostic factors in patients with gastric cancer

3 讨论

胃癌恶性程度高，早期症状不明显且进展迅速，术后复发转移及死亡的风险较高。因此，寻找和肿瘤发生发展相关的分子标志物对胃癌患者的诊疗及预后具有重要意义。Saiyin 等人［10］研究发现，胃癌患者的发病与Her-2蛋白、PGⅡ及Sema4D蛋白表达水平有关。HER-2 是一种具有活性的跨膜蛋白，属于VEGF 家族成员。人体健康状态下HER-2 单体保持着非激活状态，与需HER-2蛋白的络氨酸磷酸化后，参与了基因表达、DNA 合成代谢，具有介导细胞内磷酸化等生理功能［11］。病理状态下，HER-2 通常呈现出高表达水平，导致细胞迅速增殖引起肿瘤，其在肿瘤细胞的生长增殖过程中扮演了重要角色。国外文献显示，Her-2蛋白可抑制细胞凋亡、促进胃癌肿瘤细胞存活，在胃癌的发展中具有重要作用，是预测胃癌预后的一个重要参考指标［12］。

PGⅡ是一种蛋白酶的前体，合成于胃黏膜组织并进行分泌，与胃底黏膜病变有较高相关性，能够作为初步判断胃癌组织的病理情况［13］。Sema4D蛋白属于Semaphorins 家族，具有促进肿瘤血管发生的作用，多项研究显示，Sema4D蛋白在血管病变、肿瘤侵袭转移等方面发挥了重要作用，同时也在肺癌组织、乳腺癌组织等癌症组织中呈现高表达状态［14］。本研究结果显示Her-2、PGⅡ及Sema4D蛋白在胃癌组织中的阳性表达率高于癌旁正常组织，与上述文献研究结果相一致，进一步佐证了Her-2、PGⅡ及Sema4D蛋白呈高表达水平时可反映机体癌变的发生。肿瘤直径（≥5 cm）、分化程度（低分化）、TNM 分期（Ⅲ期～Ⅳ期）、淋巴结转移（有）患者的Her-2、PGⅡ及Sema4D蛋白的阳性表达率更高，与既往对胃癌组织的研究结果一致［15］，说明Her-2、PGⅡ及Sema4D蛋白的表达与胃癌病理参数具有一定关系。

相关文献显示，Her-2、PGⅡ及Sema4D蛋白与胃癌细胞周期调节、增殖、凋亡以及信号传导的关系紧密，参与了肿瘤的发生发展，三者表达水平影响着胃癌患者后期的预后及生存率［16］。PGⅡ及Sema4D蛋白表达水平与肿瘤的侵袭转移有关，是判断胃癌患者疾病程度与预后的分子标志物［17］。本研究Logistic 回归分析结果显示，肿瘤直径、分化程度、TNM 分期、淋巴结转移及Her-2、PGⅡ、Sema4D蛋白表达均为影响患者预后的独立危险因素，这与既往研究一致［18］，进一步提示Her-2、PGⅡ及Sema4D蛋白通过参与肿瘤细胞的分化、浸润和转移影响胃癌患者临床结局。

综上所述，Her-2蛋白、PGⅡ及Sema4D蛋白在胃癌组织中为高表达状态，三者的表达水平能够作为评估胃癌患者预后生存率的分子标志物和肿瘤治疗的潜在靶点。