Ki67、p63、P504s、LIMK1、Cofilin免疫组化检测在前列腺病理诊断中的价值

何进 徐月 沈文婷

作者单位：南京医科大学附属江苏盛泽医院病理科，江苏，苏州215200

前列腺癌（prostatic cancer，PCa）是男性中高发的恶性肿瘤之一，其死亡率仅次于肺癌，严重危险全球男性的生命健康［1-2］。目前，对于前列腺癌的早期诊断主要包括血清前列腺特异性抗原（Prostate specific antigen，PSA）含量检测、早期肿瘤穿刺活检和病理诊断，很大程度提高前列腺癌检出率［3-4］。但由于前列腺癌具有起病隐匿、发病早期症状不明显、疾病早期发展慢等特点［5-6］，临床上仍需进一步提高检出率，进而达到早诊断，早治疗的目的，提高前列腺癌患者生存率。随着医疗和科技水平的发展，免疫组织化学技术（简称免疫组化）在肿瘤中的协助诊断得到越来越广泛的应用［7-9］。在本研究中，通过收集前列腺相关手术样本，免疫组化检测各样本中相关标志物的表达情况。探究免疫组化技术在前列腺癌病理诊断中的价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集自2012年3月至2021年3月，南京医科大学附属江苏盛泽医院收治的行前列腺穿刺和电切活检的患者190 例。其中良性前列腺增生（benign prostatic hyperplasia，BPH）患者161 例，年龄为43～74 岁，平均年龄为（57.24±6.37）岁，患者血清PSA 含量均在0～10 μg/L 之间。前列腺癌患者29例，年龄为41～75 岁，平均年龄为（53.86±7.38）岁，所有患者血清PSA 含量均大于4 μg/L。患者纳入标准：①此前未经任何前列腺相关药物或化疗等治疗手段。②未合并其他原发性恶性肿瘤。③为何任何感染性疾病。④患者病历资料完整。⑤自愿签署知情同意书。患者排除标准：①合并感染性疾病。②合并其他恶性肿瘤。③合并感染性疾病。④合并其他生殖系统相关的内分泌疾病。⑤肝肾功能异常。⑥患者病历资料不全。⑦未签署或非自愿签署知情同意书。所有患者均签署知情同意书，本研究经院伦理委员会审批通过。

1.2 指标检测

检测各穿刺活检样本中Ki67、p63、P504s、LIM激酶（LIM Kinase1，LIMK1）、丝切蛋白（Cofilin）的阳性检出情况。收集患者穿刺活检样本，使用10%甲醛进行固定，对组织进行常规处理后进行石蜡包埋。将制作好的蜡块进行切片，切片厚度为2 μm。对处理好的切片进行免疫组化染色，见图1。分别进行Ki67（GT209402，基因科技（上海）股份有限公司）、p63（GM7247002，基因科技（上海）股份有限公司）、P504s（13H4，基因科技（上海）股份有限公司）、LIMK1（bs-2775R，北京博奥森生物技术有限公司）、Cofilin（bs-2759R，北京博奥森生物技术有限公司）一抗染色。以细胞核或胞浆中出现棕黄色颗粒为染色阳性。使用光学显微镜，随机选取5 个视野进行阳性细胞比例计数。当阳性细胞比例大于10%，则认定为表达阳性［7］。典型病例图片见图1。

图1 Ki67、p63、P504s、LIMK1、Cofilin免疫组化典型病例染色图（SP，×400）Figure 1 Immunohistochemical staining of Ki67，p63，P504S，LIMK1 and cofilin in typical cases（SP，×400）

1.3 统计学分析

采用SPSS 20.0 进行统计学分析；计数资料采用n（%）表示，组间样本比较采用χ2检验；以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 Ki67、p63、P504s、LIMK1、Cofilin 在不同样本类型中的阳性检出情况

和BPH 样本相比，PCa 样本中Ki67、P504s、LIMK1、Cofilin 阳性检出率均显著升高，p63 阳性检出率显著降低，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 Ki67、p63、P504s、LIMK1、Cofilin 在不同样本类型中的阳性检出情况［n（%）］Table 1 positive detection of Ki67，p63，P504S，LIMK1 and cofilin in different sample types［n（%）］

2.2 Ki67、p63、P504s、LIMK1、Cofilin 阳性检出率和前列腺癌临床病例特征的关系

Ki67、p63、P504s、LIMK1、Cofilin 阳性检出率和患者年龄无关（P＞0.05），和前列腺体积、PSA 浓度、淋巴结转移、临床分期和Gleason 评分相关（P＜0.05）。见表2。

表2 Ki67、p63、P504s、LIMK1、Cofilin 阳性检出率和前列腺癌临床病例特征的关系［n（%）］Table 2 Relationship between Ki67，p63，P504S，LIMK1，cofilin positive rate and clinical features of prostate cancer［n（%）］

3 讨论

前列腺癌是严重威胁男性生命健康的癌症之一［10］。我国男性前列腺癌发病率虽远低于西方国家，但由于饮食结构的改变，人口老龄化等原因，我国前列腺癌发病率正逐年升高［11］。目前普遍认可的前列腺癌诊断方式主要包括血清PSA 含量检测、肿瘤穿刺活检和病理诊断。但血清PSA 含量的检测在早期前列腺癌诊断中具有较大的局限性，有可能造成患者生存获益较小或过度治疗等情况［12］。肿瘤穿刺活检对肿瘤取样部位、医生的操作技术等均具有一定的要求［13］。并且由于前列腺癌的异质性，病理早期可能不易发现前列腺癌细胞的典型诊断特点，进而导致误诊或漏诊等情况发生［14］。因此寻找更好的诊断手段有利于提高前列腺癌的早期诊断，并有利于提高患者的生存期，改善患者预后情况。

肿瘤穿刺活检是确诊前列腺癌的首选办法，免疫组化技术检测肿瘤相关标志物，协助诊断肿瘤的早期病理诊断，目前在医学上发展迅速［15］。Ki67 是反应细胞增殖的核抗原，是反映细胞过度增殖的表达，其在正常组织中表达很低，在良性增生组织和癌组织中表达异常升高。且肿瘤分化程度越低，恶性程度越大，Ki67 则越强，其对肿瘤的生物学行为和预后具有一定的指导意义。但仅通过检测Ki67的表达判断前列腺癌，会造成假阳性较高的情况［16］。p63 属于p53 抑癌基因家族成员之一，可特异性标记基底细胞，其在大多数前列腺良性增生或低级别上皮内瘤中呈阳性表达，在高级别上皮内瘤中p63 阳性表达成间断性消失，在前列腺癌中绝大多数呈阴性表达。基底细胞消失是前列腺癌的重要依据，但由于p63 在基底细胞中呈间断性表达，其阴性结果不能作为前列腺癌诊断的单独因素，且p63 表达消失时间较长，不利于前列腺癌的早期诊断［17］。P504s 蛋白属于细胞质蛋白，在前列腺癌中表达升高，在前列腺癌诊断中具有非常重要的作用，但临床上存在前列腺良性病变中P504s 表达阳性的情况，具有一定的假阳性情况［18］。目前临床主要通过Ki67、p63、P504s联合检测进行前列腺癌病理诊断，其联合检测可显著提高临床前列腺癌检出率，但其灵敏度和特异性，以及在前列腺癌的早期诊断中仍存在一定局限。LIMK1 是一种丝氨酸-苏氨酸蛋白，Cofilin 是一种肌动蛋白结合蛋白。LIMK1 和Cofilin 蛋白均在前列腺癌组织中表达升高［19］。本研究结果显示，前列腺癌相关标志物Ki67、P504s 在前列腺癌中的阳性检出率远高于良性前列腺增生样本，p63 阳性检出率检出低于良性前列腺增生样本，这与先前的研究一致。LIMK1、Cofilin 在前列腺癌中的阳性检出率显著升高，且一定程度上高于Ki67、P504s 阳性检出率。

提示联合前列腺癌相关标志物Ki67、p63、P504s、LIMK1、Cofilin 的检测，可显著提高前列腺癌早期检出率。同时将前列腺癌各样本中前列腺癌相关标志物Ki67、p63、P504s、LIMK1、Cofilin 的阳性检出情况和前列腺癌样本临床病例特征进行对比，发现Ki67、p63、P504s、LIMK1、Cofilin 的阳性检出率和前列腺癌患者前列腺体积、淋巴结转移、临床分期和Gleason 评分相关。进一步提示可通过免疫组化技术检测标志物的表达，进一步定位患者临床分期，从而制定更合适的治疗方案，提高前列腺癌患者治疗获益，改善前列腺癌预后生存情况。

综上所述，免疫组化技术对前列腺癌标志物的检测对前列腺癌临床诊断具有非常重要的意义。对肿瘤标志物的联合检测对提高临床检出率具有重要的价值。