根施硒肥对藤茶二氢杨梅素含量与硒含量的影响

张朝阳，黄光昱，陈永波，胡百顺，秦 邦，刘淑琴，陈 娥，庞旭娟，谭坤林

（湖北省恩施土家族苗族自治州农业科学院，湖北 恩施445000）

藤茶，俗称长寿藤、茅岩莓茶、龙须茶等，为葡萄科蛇葡萄属木质藤本植物显齿蛇葡萄［Ampelopsis grossedentata（Hand.-Mazz.）W.T.Wang］，主要分布于中国长江流域以南的湖南、湖北、江西、贵州、福建、广东等地［1］，2013年由国家卫计委根据有关规定批准成为新食品原料。藤茶含黄酮类、酚类、氨基酸（17种）、多糖、甾体、挥发油等多类物质［2］，其中尤以二氢杨梅素含量高而出名，药理研究表明，二氢杨梅素有抗炎、抑菌、抗氧化、降血糖血脂、保肝护肝等作用［3-12］。

近年来，藤茶中二氢杨梅素的研究一直是热点问题。常敬芳等［13］、冯淳等［14］分别建立了HPLC测定显齿蛇葡萄中黄酮类化合物的方法。熊伟等［15］研究了热水浸提法同步提取藤茶中二氢杨梅素和多糖的工艺。张明生等［16］分析了江口县显齿蛇葡萄中二氢杨梅素和杨梅素的含量。石治敏［17］研究了显齿蛇葡萄中二氢杨梅素的制备及其抗氧化活性。目前，对藤茶二氢杨梅素的研究主要集中在提取、测定、抗氧化活性等方面，对不同采收期藤茶二氢杨梅素含量与硒含量关系研究较少，本研究在前期根施硒肥对藤茶硒含量研究［18］的基础上，继续深入研究根施硒肥对藤茶二氢杨梅素的影响，以期对藤茶的生产提供理论指导。

1 材料与方法

1.1 仪器和材料

高效液相色谱仪（赛默飞世尔科技公司，UltiMate 3000）；原子荧光光度计（北京吉天仪器公司，AFS-930d）；分析天平（赛多利斯公司，SQP）。二氢杨梅素对照品（上海安谱实验科技股份有限公司，10270010）；硒标准溶液（国家有色金属及电子材料分析测试中心，20D3724）。藤茶采于恩施州来凤县绿水镇老寨村试验基地，干燥粉碎后过40目筛密封备用。

1.2 试验设计

采用随机区组试验，试验变量为富硒生物有机肥，共设5个处理，CK为空白对照，A、B、C、D对应的富硒生物有机肥使用量分别为750、1 500、2 250、3 000 kg/hm2；每个处理3次重复，共15个小区，每个小区面积84 m2，小区间设保护行相隔。

1.3 硒含量测定

按照GB 5009.93—2017［19］的规定执行。

1.4 二氢杨梅素含量测定

采用Kromasil C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相为甲醇-0.15%磷酸水溶液（55∶45），柱温25℃，紫外检测波长291 nm，流速1 mL/min，进样量10 μL。

2 结果与分析

2.1 藤茶二氢杨梅素含量测定

由表1可知，不同施肥处理条件下，藤茶二氢杨梅素含量最高为8月5日AⅡ处理，达49.39%，最低为10月5日DⅡ处理（7.68%），硒含量最高为6月5日DⅡ处理，达到4.54 mg/kg，最低为6月5日CKⅢ处理（0.02 mg/kg）。二氢杨梅素测定HPLC图谱见图1。

图1 二氢杨梅素对照品（左）及样品溶液（右）HPLC图谱

表1 藤茶二氢杨梅素含量测定结果

2.2 采收期对藤茶二氢杨梅素含量的影响

由图2可知，同一施肥处理不同采收期藤茶二氢杨梅素含量不同，8月5日藤茶二氢杨梅素平均含量最高，10月5日藤茶二氢杨梅素平均含量最低，且除C处理6月5日藤茶二氢杨梅素平均含量略高于7月5日外，其他各处理藤茶二氢杨梅素平均含量均呈先升后降的趋势。

图2 不同采收期藤茶二氢杨梅素平均含量比较

2.3 不同施肥处理对藤茶二氢杨梅素的影响

由表1可知，除10月5日采收期外，其他采收期藤茶二氢杨梅素含量均大于20%。对同一采收期不同处理藤茶二氢杨梅素含量数据进行方差分析，由

表2可知，同一采收期藤茶二氢杨梅素含量组间F值分别为1.801、0.294、1.079、2.640、0.568，P均大于0.05，对各组间进行多重比较发现，各组间存在不同程度差异。由图2可知，同一采收期不同处理藤茶二氢杨梅素平均含量不同，但基本呈先升后降的趋势，除7月5日外，其他采收期CK、A、B、C处理藤茶二氢杨梅素平均含量均大于D处理，且所有采收期内藤茶二氢杨梅素平均含量最高处理均在A、B、C、D处理内，5个不同采收期中，二氢杨梅素平均含量最大的处理分别为C、D、A、B、A处理。

表2 藤茶二氢杨梅素含量方差分析

2.4 二氢杨梅素含量与硒含量相关性

对6月5日、7月5日藤茶二氢杨梅素含量、硒含量相同处理平均数作图进行分析，计算相关系数。利用公式Cov（X，Y）=E［（X-E［X］）（Y-E［Y］）］计算藤茶二氢杨梅素含量、硒含量协方差，其中X、Y分别代表二氢杨梅素、硒含量测定值，［X］、［Y］分别代表二氢杨梅素、硒含量平均值。

利用下列公式计算藤茶二氢杨梅素含量、硒含量相关系数，其中Cov（X，Y）为X、Y的协方差，D（X）、D（Y）分别为X、Y的方差，经计算6月5日、7月5日藤茶二氢杨梅素含量、硒含量相关系数分别为-0.34、0.40。

相关系数绝对值均小于0.50，说明藤茶二氢杨梅素含量与硒含量间相关性不显著，同时由图3、图4可知，藤茶硒含量随硒肥施用量增加呈上升趋势，图3中藤茶二氢杨梅素含量随硒肥施用量的增加呈先升后降的趋势，且A、B、C处理二氢杨梅素含量高于CK处理，CK处理二氢杨梅素含量高于D处理。图4中藤茶二氢杨梅素含量随硒肥施用量的增加呈先升后降再升的趋势，且A、B、C、D处理二氢杨梅素含量均高于CK处理，结合相关分析，说明适量硒肥对藤茶二氢杨梅素含量升高有促进作用。

图3 6月5日藤茶二氢杨梅素含量和硒含量

图4 7月5日藤茶二氢杨梅素含量和硒含量

3 小结与讨论

不同采收期对藤茶二氢杨梅素含量有不同程度影响。黄建华等［20］研究表明，藤茶二氢杨梅素含量呈月递减趋势，4月最高，6月最低。雷华平等［21］研究表明，4—5月藤茶中总黄酮和二氢杨梅素含量最高，然后回落，8月有小高峰。本研究发现，6—10月藤茶二氢杨梅素含量呈先升后降的趋势，8月达最高值，10月含量降至最低。因本试验采集的藤茶样品来自当年扦插苗，4—5月藤茶龙须较少，10月后温度降低叶片脱落无龙须可采，故本研究只采集了6—9月的龙须、10月的普叶，不同部位对藤茶二氢杨梅素含量有影响［22，23］，可能是造成本研究与上述研究存在差异的原因。

同时，本研究分析了6月5日、7月5日藤茶二氢杨梅素含量与硒含量关系，发现适量硒肥对藤茶二氢杨梅素含量升高有促进作用，故藤茶在富硒栽培时需合理控制硒肥浓度。本研究只进行了根施硒肥对当年扦插藤茶二氢杨梅素含量与硒含量的影响，后期将继续对多年生藤茶二氢杨梅素含量及抗氧化活性等方面进行研究，以期推动藤茶特色产业健康发展。